Pseudofracture: Un modèle périphérique aiguë traumatisme tissulaire

Lorsqu’un os long, comme le fémur ou le tibia, est fracturé, le muscle et les tissus mous blessés sont exposés à des fragments osseux et à la moelle osseuse endommagés. Ceci est suivi d’une forte réponse immunitaire pour aider à la réparation des tissus. Un modèle pour étudier les effets de cette exposition peut être généré en prélevant à la fois des fémurs et du tibia.

À partir d’une souris donneuse. Les os sont broyés pour créer une solution osseuse, qui est ensuite injectée dans la cuisse blessée d’une souris receveuse. Les réponses immunitaires sont ensuite surveillées et les lésions d’organes à distance évaluées afin d’étudier les effets à long terme des traumatismes induits par les fractures.

Le principal avantage de cette technique par rapport aux méthodes existantes de traumatisme des tissus périphériques, comme le modèle de fracture bilatérale du fémur, est que ce modèle, le modèle de pseudo-fracture, permet une survie à long terme sans complications d’une anesthésie prolongée ou de techniques complexes de fixation de fracture, et permet donc d’étudier les réponses immunitaires à terme après un traumatisme. Avant de commencer la procédure, préparez les fournitures suivantes : un seau à glace, des instruments chirurgicaux de bétadine, des hémostats GRE, un mortier et une pince à pilon, des aiguilles de calibre 20, une seringue CC, une anesthésie PBS et un cône nasal en fluor. Un seul euthanasié correspond à l’âge et au poids.

La souris donneuse génique devrait fournir suffisamment de matériel pour trois receveurs. Fixez le donneur sur une planche de plexiglas, en veillant à ne coller les membres inférieurs qu’à l’extrémité du pied. Rasez soigneusement les membres inférieurs.

Ensuite, couvrez-les complètement de bétadine et d’alcool pour la stérilité afin d’enlever les os longs du membre inférieur, de faire une incision chirurgicale dans la peau de la région inguinale, et de continuer à couper la peau sur toute la longueur de l’extrémité jusqu’à la cheville, rétractez la peau et disséquez-la loin du visage sous-cutané et du muscle, tant sur les faces médiale que latérale. Insérez ensuite une lame des ciseaux sous les muscles qui se trouvent en avant et latéralement du tibia. Faites glisser la lame vers la proximale et la distale pour soulever proprement les muscles loin de l’os sous-jacent.

Répétez cette technique sur la face postérieure et médiale du tibia pour séparer les muscles sous le tibia. Un effort supplémentaire minimal doit être utilisé sur le côté postérieur lors du glissement distal pour éloigner le péroné du tibia à l’extrémité proximale de ces muscles de la jambe. Coupez les tendons aussi près que possible de leurs insertions et rétractez les muscles distalement tout en tirant sur le groupe musculaire ensemble De manière descendante, une petite traction libérera les attaches distales de l’articulation de la cheville à l’aide de ciseaux coupés à travers l’articulation de la cheville.

Ne détachez pas le tibia du fémur à ce stade, cette connexion donne un effet de levier supplémentaire qui aidera à la dissection du fémur de l’articulation de la hanche. Utilisez une technique similaire pour relâcher les muscles du fémur. Effectuez cela postérieurement et à la fois médialement et latéralement si nécessaire.

Coupez l’attache distale de ces groupes musculaires pour les libérer de l’articulation du genou. Étendez l’incision cutanée au besoin pour obtenir une exposition adéquate et suivez sous les muscles. Pour disséquer l’extrémité du fémur de l’articulation de la hanche, retirez le fémur et fixez le tibia de la souris donneuse et placez-les sur de la gaze stérile.

Séparez les deux os de l’articulation du genou en saisissant simplement chaque os dans une main séparée et en tordant ou en tournant doucement les deux os dans des directions opposées le long de leurs longs AE. Pour retirer les attaches tendineuses restantes des os longs, enroulez un morceau de gaze de quatre par quatre sur toute la longueur de l’os. Saisissez fermement et grattez plusieurs fois toute la longueur des os pour retirer les tissus restants de la surface.

Placez les os collectés dans un tube micro-refusé stérile de 1,5 millilitre sur de la glace. Transportez les os du donneur dans une enceinte de sécurité biologique soigneusement désinfectée. Pour la préparation de la solution osseuse.

La hotte doit être préparée à l’aide d’un pansement stérile sur le terrain, d’un mortier et d’un pilon stériles, d’une paire de pinces stériles, d’un tube stérile de huit millilitres, d’une pipette PBSA stérile d’un millilitre avec les pointes de pipette respectives. Une pipette de 100 microlitres avec les pointes respectives, des seringues d’un millilitre et des aiguilles de calibre 20 à l’aide de la pince, transfère les os dans le mortier et utilise le pilon pour écraser doucement les os. Pipetez un millilitre de PBS dans le mortier et continuez à écraser les fragments restants en utilisant des mouvements circulaires pour assurer une suspension complète.

Ajoutez ensuite un autre millilitre de PBS et continuez à écraser pour créer la solution osseuse, qui doit avoir une teinte rose. Versez lentement la solution du mortier dans le tube de huit millilitres tout en vous assurant que les restes plus gros restent derrière. Transférez la solution osseuse dans une seringue d’un millilitre.

Avec une aiguille de calibre 20, la solution osseuse doit rester sur de la glace. Pipetez un microlitre de la solution osseuse sur une plaque de congar Mac en étalant uniformément sur la surface. Incuber la plaque pendant 24 à 48 heures pour assurer la stérilité.

Commencez l’intervention chirurgicale pour les lésions des tissus mous et l’injection de solution osseuse en évaluant la profondeur de l’anesthésie d’une souris anesthésiée pentabarbitale par l’orteil. Pincer. Placez la souris en position couchée sur une planche de plexiglas et immobilisez l’animal en enroulant sans serrer de fines bandes de ruban adhésif autour de la partie distale de chaque extrémité à l’aide d’Oscar, une tondeuse à cinq avec une lame de taille 40. Rasez les régions abdominale, inguinale et cuisse de l’animal.

Transférez la souris dans le champ opératoire stérile. Essuyez la zone chirurgicale avec de la bétadine. Essuyez ensuite avec de l’alcool pour le stériliser.

Placez un cône nasal sur la souris contenant un morceau de gaze avec un millilitre de fluor à 99 %. Une fois que la respiration de l’animal commence à ralentir, retirez le cône nasal. Si une anesthésie supplémentaire est nécessaire tout au long de la procédure, un pentobarbital supplémentaire peut être injecté ou du fluor administré.

Ensuite, pliez un pansement de terrain stérile et drapez-le sur la souris pour permettre l’exposition uniquement des membres inférieurs et de la tête. Cette blessure aux tissus mous est une blessure bilatérale par écrasement des membres postérieurs. Assurez-vous que la souris est positionnée avec les membres postérieurs légèrement abductés et tournés latéralement.

Cela aide à l’accessibilité au bon muscle. Regroupez les fléchisseurs du genou pour effectuer la blessure par écrasement : clampez un grand hémostat de 18 centimètres autour du point médian de la musculature postérieure de la cuisse le long du fémur avec sa courbe convexe face au fémur. Verrouillez l’hémostat au premier clic seulement pendant 30 secondes.

Insérez l’aiguille dans la peau de deux à trois millimètres lorsque la pointe du biseau touche à peine le fémur. Injectez 0,15 millilitre de la solution osseuse dans la musculature de la cuisse écrasée de chaque côté. Retirez l’aiguille et placez rapidement un doigt ganté stérile sur le site d’injection pour arrêter tout reflux de solution osseuse hors de la plaie.

Maintenez ce doigt là pendant plusieurs secondes. Remettez la souris dans la cage et laissez-la libre de mouvement directement lorsque l’anesthésie s’estompe. Approprié. La gestion de la douleur doit être administrée au réveil de la souris.

Ce schéma général montre la réponse immunitaire biphasique à la suite d’un traumatisme à l’heure zéro. Un traumatisme est induit. Ceci est suivi d’une réponse hyper-inflammatoire précoce qui peut être vue comme culminant à six heures et est mesurée par l’évaluation de l’inflammation systémique et du dysfonctionnement des organes à distance.

La deuxième composante de la réponse immunitaire post-traumatique est une immunosuppression retardée mesurée par un dysfonctionnement des cellules immunitaires et est représentée par un creux d’environ 48 heures. Il s’agit d’un schéma représentatif de la réponse inflammatoire des cytokines dans le plasma qui se produit tôt après le traumatisme et constitue un exemple d’inflammation systémique. Le dysfonctionnement des organes à distance, mesuré par les lésions hépatiques, est élevé dans un délai similaire.

Ce schéma représentatif est un exemple pour mettre en évidence le dysfonctionnement des cellules immunitaires tardivement après un traumatisme. Lors de la tentative de cette procédure, il est important de se rappeler de s’assurer de la stérilité et de la manipulation précise tout au long de l’expérience. Il ne s’agit pas d’un modèle de véritable fracture ou d’infection de la plaie.