Déterminer le nombre de cellules pendant la culture cellulaire en utilisant le compteur cellulaire Sceptre

Le compteur de cellules sceptre est un appareil automatisé portable permettant de compter les cellules, de surveiller le diamètre et le volume des cellules et de vérifier la santé et la qualité des populations cellulaires. Il offre des avantages significatifs par rapport aux autres méthodes de comptage, notamment une précision améliorée, une facilité d’utilisation et un faible coût de comptage des cellules. À l’aide du sceptre, suivez les instructions sur son écran graphique pour aspirer les cellules dans le capteur jetable.

Les cellules sont ensuite comptées et l’appareil signale les concentrations de cellules et les statistiques, qui peuvent être téléchargées sur un ordinateur et analysées. Bonjour, je m’appelle Sonya. Je suis chercheur ici à Millport, et aujourd’hui, je vais vous montrer comment utiliser le sceptre.

Le comptage des cellules est une étape nécessaire mais fastidieuse pour la culture cellulaire in vitro. Des concentrations cellulaires constantes garantissent la reproductibilité et la précision des expériences. Le comptage des cellules est important pour surveiller la santé cellulaire et le taux de prolifération, évaluer les cellules immortelles ou d’ensemencement de transformation pour les expériences ultérieures, la transfection ou l’infection, et se préparer aux tests cellulaires malgré la nécessité de rapidité et de précision.

Dans le comptage des cellules, 71 % des 400 chercheurs interrogés comptent les cellules à l’aide d’un hémocytomètre. Bien que l’hémocytométrie soit peu coûteuse, elle est laborieuse et sujette à des biais et à une mauvaise utilisation par l’utilisateur, ce qui entraîne des comptages inexacts. Les sources d’erreur en hémocytométrie comprennent une distribution inégale des cellules dans l’échantillon, un trop grand nombre ou trop peu de cellules dans l’échantillon.

Décisions subjectives quant à savoir si une cellule donnée se trouve dans la zone de comptage définie. Contamination de l’hémocytomètre, variation totale de l’utilisateur et variation du taux de remplissage de l’hémocytomètre pour atténuer l’ennui associé au comptage manuel. 29 %des chercheurs comptent les cellules à l’aide d’appareils automatisés de comptage de cellules.

Cependant, pour la plupart des chercheurs, le prix associé à ces grands instruments de paillasse est un obstacle à leur utilisation. Le compteur de cellules sceptre est un appareil portable automatisé qui offre l’automatisation et la précision du comptage des coters à un coût relativement faible dans un format portable facile à utiliser. Le système utilise le principe de Coter de détection de particules basée sur l’impédance dans un format miniaturisé en utilisant une combinaison de matériel analogique et numérique pour le traitement du signal de détection, le stockage des données et l’affichage graphique.

Le capteur jetable est conçu avec une zone de détection de cellules micro-fabriquée qui permet la discrimination par taille et volume de cellule à une résolution submicronique et sub-picoliter, améliorée par des canaux de manipulation des liquides et une électronique de précision. Le compteur de cellules du sceptre affiche graphiquement les statistiques de population cellulaire sous forme d’histogramme à utiliser. Le compteur de cellules du sceptre commence par diluer une suspension de cellules unicellulaires dans une solution saline tamponnée au phosphate.

Une concentration de 10 000 à 500 000 cellules par millilitre est optimale. Transférez 100 microlitres de cellules diluées dans un tube microview de 1,5 millilitre. Allumez le compteur de cellules du sceptre en appuyant longuement sur la bascule à l’arrière de l’instrument et attendez que les instructions à l’écran apparaissent.

Lorsque vous y êtes invité, fixez un capteur à l’extrémité de l’unité sceptre avec le panneau de détection des électrodes vers l’avant de l’instrument. Les capteurs Scepter se composent d’une chambre d’échantillonnage moulée avec précision avec une zone de détection électronique et des électrodes de détection de cellule intégrées. Les capteurs permettent de discriminer la taille des cellules à une résolution submicronique et le volume cellulaire à une résolution sub picolite.

Une ingénierie cohérente des capteurs garantit que des volumes d’échantillon égaux sont comptés et que des mesures de taille précises sont effectuées. Une fois le capteur fixé, effectuez chaque étape du processus de comptage selon les instructions à l’écran comme suit. Lorsque l’écran lit, maintenez le piston enfoncé pour commencer à appuyer sur le piston, l’écran lira alors submerger le capteur, immerger le capteur dans la solution de suspension de cellule et relâcher le piston pour aspirer la suspension de cellule dans le capteur.

Le piston agit comme un signal électrique et aspire l’échantillon ainsi que le volume mort dans le capteur. La vitesse ou la précision de la plongée n’a pas d’importance comme c’est le cas pour le pipetage. Ce processus prendra plusieurs secondes lorsqu’il sera prêt.

L’instrument émettra un bip et l’échantillon chargé s’affichera à l’écran. Une fois l’échantillon chargé dans le capteur, il est aspiré à travers la zone de détection pour évaluer la taille et le volume de la cellule. Ensuite, à travers les microcanaux, une fois que 50 microlitres d’échantillon sont comptés, le capteur indique à l’instrument d’arrêter de compter.

Une fois le comptage terminé, l’écran de l’instrument indiquera le comptage terminé. Veuillez retirer le capteur et le jeter. Suivez l’invite et retirez et jetez le capteur.

L’instrument affichera alors un histogramme de la taille ou du diamètre des cellules sur son écran, ainsi que la concentration cellulaire par millilitre. Une fois le comptage terminé et l’histogramme affiché sur l’instrument, appliquez les points de contrôle en appuyant sur le bouton bascule, sélectionnez le contrôle automatique ou utilisez l’option Dernier pour définir automatiquement le point de contrôle en fonction du profil de l’histogramme ou pour utiliser les points de contrôle du comptage précédent. Quelle que soit la sélection, les portes peuvent être déplacées manuellement pour s’adapter.

Réglez les données, appuyez à nouveau sur le bouton bascule pour sélectionner la porte gauche et faites défiler la bascule pour déplacer la porte comme vous le souhaitez. Appuyez ensuite à nouveau sur la bascule pour activer la porte de droite et faites défiler la bascule pour placer la porte de droite. Cliquez à nouveau.

Une nouvelle concentration de cellules, le volume moyen et le diamètre des cellules seront affichés. Le basculement peut également être d’un côté ou de l’autre pour basculer l’affichage entre la date et l’heure, la taille moyenne des cellules et le volume moyen des cellules jusqu’à 72 histogrammes peuvent être stockés sur l’instrument lui-même. Pour télécharger les données sur un ordinateur personnel, connectez l’instrument via le port du câble USB, sur l’écran d’affichage du PC.

Double-cliquez sur l’application logicielle sceptre pour lancer le logiciel. Cliquez ensuite sur connecter. Tous les comptes seront automatiquement transférés vers le logiciel.

Le logiciel d’application du sceptre affiche l’histogramme détaillant la distribution de la population de la culture en volume ou en diamètre. Les fichiers téléchargés peuvent ensuite être exportés vers Microsoft Excel, où les données brutes seront affichées dans des bacs de diamètres de cellules ou de volumes de cellules spécifiés. 19 lignées cellulaires différentes ont été préparées pour le comptage et les concentrations théoriques de départ ont été déterminées à l’aide d’un compteur Aculter.

Ces suspensions cellulaires ont ensuite été diluées pour obtenir des suspensions cellulaires à des concentrations cellulaires théoriques. Le compteur de cellules du sceptre a ensuite été utilisé pour déterminer les concentrations cellulaires. Cette figure montre cinq dilutions qui ont été mesurées pour cinq lignées cellulaires représentatives ainsi que la concentration cellulaire théorique.

Le haut degré de linéarité, comme l’indiquent les valeurs r au carré, démontre que le comptage des sceptres est une méthode fiable pour les lignées cellulaires testées sur une large plage de fonctionnement linéaire. La précision relative globale du comptage des sceptres est démontrée ici, dans laquelle les données obtenues à partir du comptage des sceptres sont comparées aux comptages obtenus à partir du comptage des coters. Le log du nombre de cellules du sceptre est comparé au log du nombre de coters et montre que dans toutes les lignées cellulaires testées, le nombre de sceptres correspond au nombre de coters.

Le comptage de 19 lignées cellulaires a été effectué à l’aide d’un compteur de deux socs Z. Le compteur de cellules de sceptre, un compteur automatisé basé sur la vision, tel qu’un système de test de cellules V ou de comptage, et un comptage TER hémologique ont été effectués conformément aux instructions du fabricant en utilisant la même suspension de démarrage de cellule et des dilutions identiques. Les résultats présentés dans cette figure démontrent que les concentrations cellulaires mesurées par comptage de sceptre correspondent étroitement aux concentrations cellulaires théoriques avec une linéarité élevée.

Le coefficient de variation en pourcentage (CV) a été calculé pour chaque dilution de chaque lignée cellulaire. Pour chaque système de comptage, on voit ici le pourcentage moyen de CVS sur 19 lignées cellulaires en ce qui concerne la concentration cellulaire et la méthode de comptage dans la plage de fonctionnement. Le compteur de cellules du sceptre est plus précis que le comptage par hémocytomètre, affichant des écarts-types plus petits et des coefficients de variation moyens plus petits.

Le comptage des sceptres est 10 fois plus rapide que l’hémocytométrie et plus rapide que les autres compteurs automatisés. Ici, les cellules SF neuf, MCF sept et HC 2 93 ont été comptées en utilisant les méthodes décrites dans cette vidéo. Le temps moyen nécessaire pour mesurer la concentration cellulaire a été enregistré.

Notez que l’hémocytométrie n’a été réalisée qu’une seule fois par échantillon. Scepter effectue des mesures en fonction de la taille des cellules. Ainsi, tout changement dans la morphologie cellulaire peut être capturé dans l’histogramme.

Les cultures saines présentent une belle distribution gaussienne en forme de cloche tandis que les cellules malsaines provoquent des poux et provoquent un décalage de l’histogramme vers la gauche. De même, lorsqu’une population de 50 % de cellules mortes était mélangée à 50 % de cellules vivantes, des décalages d’histogramme ont également été observés. Je viens de vous montrer comment utiliser le nouveau compteur de cellules de sceptre pour millipore, ce qui révolutionne la façon dont les chercheurs comptent leurs cellules.