Un test cellulaire pour évaluer l’absorption de la protéine tau par la microglie

Commencez avec une plaque multipuits à fond plat contenant des cellules microgliales murines adhérentes – des cellules phagocytaires dans le cerveau.

Introduire un milieu sans sérum contenant des immunocomplexes. Ces complexes sont constitués d’anticorps attachés à des agrégats de protéines Tau phosphorylées, qui se forment lors de certaines maladies neurodégénératives.

Les agrégats Tau sont marqués avec un colorant fluorescent vert sensible au pH.

Au cours de l’incubation, ces immunocomplexes interagissent avec les récepteurs Fc des cellules microgliales, facilitant ainsi leur engloutissement.

Cet endosome contenant un immunocomplexe fusionne avec un lysosome, formant un endolysosome. L’environnement acide de l’endolysosome rend les molécules de colorant fluorescentes.

Laver pour éliminer les immunocomplexes non internalisés.

Traiter avec une solution de trypsine-EDTA pour détacher les cellules.

Transférez la suspension cellulaire sur une plaque à fond en U positionnée sur la glace pour stabiliser l’endolysosome. Granulez les cellules et jetez le surnageant.

Lavez et remettez en suspension les cellules avec le tampon FACS.

À l’aide de FACS, identifiez les cellules vivantes uniques