Protocole pour l'élevage des moustiques (A. gambiae)

Je m'appelle Shish et je suis postdoctorant dans le laboratoire du Dr George OU à la faculté de santé publique de Johns Hopkins, dans le département de microbiologie moléculaire et d'immunologie. Je vais vous montrer comment élever des moustiques de l'espèce *Anopheles gambiae*. En laboratoire, nous les maintenons dans une salle d'insectarium, généralement conservée à 27 degrés Celsius et à 80 % d'humidité.

La chambre d'élevage est également maintenue selon un cycle jour-nuit de 12 heures afin de reproduire les conditions naturelles. Voici donc la chambre d'élevage que nous possédons, une installation essentielle ici, destinée à l'élevage de cet insecte. Comme vous pouvez le voir, elle contient divers bacs abritant les moustiques à tous les stades de développement : œufs, différents stades larvaires et pupe.

Ces plateaux contiennent des larves âgées d’environ 11 ou 12 jours, et cette cage sert à recueillir les moustiques adultes que nous maintenons avec une solution de saccharose à 10 %. Pour commencer l’élevage des moustiques, nous devons les nourrir de sang, car les moustiques ont besoin des protéines du sang pour pondre des œufs. Le jour 1 correspond au jour suivant la mise des adultes dans la cage et leur maintien sous solution de saccharose à 10 %.

Le jour un, on nourrit les moustiques avec du sang, d'où l'alimentation par membrane artificielle. Il s'agit d'un nourrisseur en verre que nous utilisons pour l'alimentation par membrane des moustiques. Nous introduisons le sang par le petit orifice que vous voyez, et il est contenu à l'intérieur.

En bas sur le côté, se trouvent deux buses, qui sont reliées à un bain d'eau maintenu à 37 degrés. Pour maintenir le sang à 37 degrés et préparer le distributeur pour l'alimentation, nous prenons un petit morceau de parafilm. Nous l'étirons aux deux extrémités et sur les quatre côtés, puis nous le plaçons sur l'ouverture du distributeur en verre afin de former une fine membrane simulant la peau.

On appelle cela l'alimentation par membrane. Il s'agit d'un bain-marie thermostaté à circulation, qui maintient l'eau à 37 °C et la fait circuler à travers l'alimenteur en verre afin que le sang reste chaud à 37 °C. Nous relions donc l'alimenteur en verre aux petits capillaires, puis nous le raccordons au bain-marie thermostaté à circulation et mettons ce dernier en marche, de sorte que l'eau circule. L'eau et le sang ne se mélangent jamais, car ils se trouvent dans deux chambres distinctes.

Ceci est une cage contenant des moustiques adultes de Phis Gambi. Voici le nourrisseur en verre, qui est relié à un bain thermostaté, et nous plaçons une pince en haut de la cage ainsi que 200 microlitres de sang. La cage contient des moustiques mâles et femelles.

C'est uniquement la femelle qui vient se nourrir de sang. L'alimentation dure environ 30 minutes. Deux jours après le repas sanguin, nous plaçons des coupes à œufs dans la cage des moustiques afin qu'elles y déposent leurs œufs.

Voici comment procéder. Nous prenons un petit bécher, que nous remplissons partiellement avec de l'eau distillée, puis nous prenons un morceau de papier que nous humidifions, que nous roulons en forme conique et que nous plaçons dans le bécher contenant l'eau distillée, en veillant à ce que le piment inda soit humidifié. Ensuite, nous ouvrons lentement la cage à moustiques en prenant soin de ne laisser s'échapper aucun moustique, et nous insérons les godets à œufs à l'intérieur.

Le lendemain après avoir placé les coupes à l'intérieur de la cage, c'est-à-dire le quatrième jour, on les retire lentement de la cage. Ce sont les œufs, les noirs, parmi lesquels se trouvent également quelques moustiques morts. Une fois que vous avez les œufs prêts, vous les placez sur un plateau en plastique.

Dans le passé, le plateau en plastique est rempli d'eau distillée. Prenez le filtre contenant les œufs et sortez-le. Nous ajoutons également une pincée d'aliment A, qui est de la nourriture pour poissons broyée, puis plaçons le plateau dans le support.

Nous devons niveler le plateau le jour où nous commençons le plateau et indiquer également les espèces présentes ici. Ceci est fait après vous, c’est-à-dire le lendemain du jour où vous avez placé l’œuf dans le plateau. Autrement dit, ces œufs ont un jour, mais le protocole réel correspond au cinquième jour du cycle du moustique.

Ce sont les noirs qui sont les œufs, qui vont simplement éclore en larves. Et ceci est la nourriture pour les moustiques. Pour l'élevage des moustiques, nous utilisons généralement trois types différents d'aliments.

La nourriture A est en réalité de la nourriture pour poissons broyée, et nous ajoutons cette nourriture lorsque nous démarrons la culture de moustiques, au stade X, en ajoutant deux comprimés de nourriture C par jour, qui est de la nourriture pour chats achetée chez Purina. Après huit ou neuf jours, nous changeons l'eau du plateau et ajoutons de l'eau fraîche. À ce moment-là, au lieu de la nourriture A, nous ajoutons une pincée de nourriture B, qui n'est autre que de la nourriture broyée, C, c'est-à-dire de la nourriture pour chats broyée, ainsi que deux comprimés de nourriture C ; les œufs éclosent alors en larves.

Et il existe trois stades larvaires différents. Premier stade en installation, deuxième stade en installation et troisième stade en installation. Ce sont des bacs contenant des larves âgées de cinq ou six jours.

Ces ravi, qui se trouvent à un stade beaucoup plus avancé, âgés de neuf à dix jours environ, ont bénéficié d'un changement d'eau auquel a été ajoutée de l'eau fraîche ainsi que de la nourriture fraîche. Ce plateau contient à la fois les adultes et les ppe.

Voici les adultes, comme vous pouvez le voir, volant sous les moustiquaires. Et sur le bord, vous pouvez apercevoir tous les œufs de couleur foncée, qui vont éclore en adultes. Une fois que vous avez les adultes, ils sont prêts à être collectés dans une cage, qui ressemble à ceci.

Il est doublé de papier absorbant à l'intérieur et contient un petit flacon renfermant une solution super à 10 % ainsi qu'une pastille de savon au coton, qui servira de source alimentaire pour les moustiques. Nous avons donc recouvert le couvercle, et voici l'appareil, l'aspirateur, qui est relié à une pompe à vide grâce à laquelle nous recueillerons les adultes provenant de ces plateaux. Cette partie de l'aspirateur est connectée ici, et se trouve à l'autre extrémité.

Connecté au vide. Nous insérons la cage, dans laquelle nous recueillerons les adultes dans cette petite boîte. Il s'agit d'une autre partie de l'aspirateur, qui comporte un long tube que nous placerons à l'intérieur du plateau à moustiques.

L'autre extrémité sera reliée à la cage. Vous devez vous assurer que tout est bien serré, afin que le vide fonctionne correctement. Nous fermons le couvercle et vérifions que tout est hermétiquement clos.

Démarrez lentement le dispositif arrière. Une fois que l'installation est prête, insérez lentement ce long tube dans le plateau à moustiques, en veillant à bien refermer le filet afin d'empêcher les moustiques de s'échapper. Comme vous pouvez le voir, les moustiques sont regroupés dans la petite cage.

Parcourez lentement tout l’espace avec le tube afin de collecter tous les adultes. Maintenant, j’ai presque terminé. Tous les adultes ont été collectés et se trouvent dans cette cage, que vous pouvez voir.

Ensuite, nous relâchons lentement le vide et démontons l'appareil de collecte. Voici donc les moustiques adultes d'Anopheles gambiae, qui seront placés dans cette cage pendant quelques jours. Ils seront nourris avec une solution de saccharose à 10 % et on leur fournira du sang uniquement lorsque nous souhaiterons qu'ils pondent des œufs.

J'ai juste montré comment porter les moustiques. Après avoir terminé les moustiques en conditions de laboratoire, les étapes importantes en mots sont l'adaptation sanguine. Ensuite, placer les godets à œufs, suivre les œufs, puis ceux-ci passent par différentes étapes comme les larves, le stade ppe, et les adultes.

Et enfin, nous collectons les adultes. L'importance de cette technique réside dans la nécessité de reproduire les conditions extérieures du milieu naturel afin d'obtenir des moustiques en bonne santé, puis de les infecter avec le plasmodium et de mener différents types d'études sur le paludisme, dont l'objectif principal est d'éliminer le paludisme du monde entier.