Name: Protocole pour lélevage des moustiques (A. gambiae) (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-04T01:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 3 s
Description: Découvrez l'élevage d'Anopheles gambiae en laboratoire pour la recherche sur le paludisme. Cette méthode montre le contrôle de la température, de l'humidité et le cycle jour/nuit nécessaires au développement des moustiques vecteurs.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Alimentaires des moustiques: <ol><li> Alimentation A: la nourriture des poissons à la terre (Aquaricare). Une petite pincée doit être ajouté. </li><li> Alimentation B: mise à la terre la nourriture CAT (Purina). Une petite pincée doit être ajouté. </li><li> Alimentation C: aliments pour chats (Purina). Deux comprimés doit être ajouté. </li></ol> Sang: Sang animal ou humain peut être utilisé pour les moustiques à l&#39;arrière. Le sang frais est recueilli avec une seringue et mettre dans un tube stérile de 15 ml contenant 1 ml de Falcon DPC (anticoagulant) pour chaque 10 ml de sang, puis mélangés doucement et centrifugé à température ambiante à 2000 rpm pendant 5 min. Le surnageant est écarté, en prenant soin d&#39;enlever la couche leuco qui comprend d&#39;autres cellules sanguines (par exemple WBC). Le culot de RBC est ensuite suspendu dans un volume égal de milieu RPMI par pipetage, et encore lavé dans ce trois moyennes fois. Après le lavage final, les globules rouges granulés sont remis en suspension dans un volume égal de milieu RPMI et conservés à 4 ° C (peut être conservé pendant 8-10 jours). Juste avant l&#39;alimentation, la RBC (dans RPMI) est centrifugé (2000 rpm pendant 5 min) pour obtenir un culot en bas des cellules, et la RBC emballé est remis en suspension dans le sérum (O + sérum humain) afin d&#39;obtenir un hématocrite de 40%. Le sang doit être conservé à 37 ° C toujours à l&#39;alimentation. JOUR 1: <ol><li> Les 3-5 jours moustiques adultes âgés féminins sont nourris de sang pour pondre leurs œufs. </li><li> Pour nourrir le sang, une méthode de membrane artificielle alimentation (parafilm) est utilisé comme suit: <ol><li> Les globules rouges (voir ci-dessus pour la préparation du sang) sont mélangés avec du sérum inactivé par la chaleur pour obtenir un hématocrite ~ 40% (emballé RBC 40% et 60% de sérum). Ceci est ajouté à l&#39;alimentation en verre. </li><li> Le chargeur est relié à une chaude enveloppe d&#39;eau (37 ° C), et placée sur la cage pour permettre l&#39;accès des moustiques à la surface membranaire. </li><li> Les moustiques sont autorisés à nourrir pour ~ 30 minutes. </li></ol></li></ol> JOUR 3: <ol><li> Les femelles pondent des œufs deux jours après ils se nourrissent de sang. Un petit papier filtre enveloppé dans une forme conique est placé dans un petit bécher contenant de l&#39;eau distillée, en s&#39;assurant que le papier filtre est humide. Le bécher est gardé à l&#39;intérieur de la cage durant la nuit pour les moustiques de pondre des œufs. </li></ol> JOUR 4: <ol><li> Le papier filtre contenant les œufs des moustiques est placé dans un bac en plastique avec environ 300 ml d&#39;eau distillée. Une pincée de nourriture A est ajoutée à la barre et les oeufs sont autorisés à éclore au cours de larves les prochains jours. </li></ol> JOURS 5 - 8: <ol><li> Larves en croissance sont nourris chaque jour avec deux comprimés de nourriture C, et surveillés pour la densité et la population. Le huitième jour (5 jours larves âgées), la population des larves est dilué de 1 Bac à ~ 10 plateaux, avec une pincée de nourriture A et deux comprimés de C des aliments dans chaque bac. (~ 30 minutes) </li></ol> JOURS 9 - 12: <ol><li> Les larves sont nourries chaque jour avec de la nourriture C. Sur le 12ème jour (9 jours larves âgées), l&#39;eau est changée avec de l&#39;eau fraîche, et la nourriture est ajoutée (une pincée de nourriture B et deux comprimés de nourriture C). Les nymphes commence à se développer à ce stade. Les plateaux sont couverts de filets pour éviter de sortir des adultes. (~ 80 à 10 mn) </li></ol> JOUR 13 - 15: Les nymphes sont autorisés à émerger aux adultes pour les 2 prochains - 3 jours. La nourriture est donnée tous les jours pour les larves / nymphes par enlevant soigneusement le net pour éviter l&#39;échappement des adultes. JOUR 16: <ol><li> Les adultes sont recueillis dans une cage à travers un aspirateur relié à vide. La cage se compose d&#39;un petit flacon de 100 ml avec une mèche de coton qui a été trempé avec du saccharose à 10% (autoclave) et une doublure serviette en papier sur le fond pour absorber les déversements potentiels de sucre qui peut se produire pendant la manipulation cage. (~ 30-40 minutes) </li></ol> JOUR 17 - 21: <ol><li> Les adultes (mâles et femelles) sont ensuite conservés dans la salle insectarium pour les 4-5 jours, nourri de 10% de saccharose avant qu&#39;ils ne soient à nouveau du sang nourris pour commencer le cycle suivant. Les moustiques mêmes peuvent être utilisées pour pondre plus d&#39;une fois. </li><li> Les moustiques qui ne sont pas nécessaires pour des expériences ou de l&#39;élevage peuvent être tués en plaçant la cage dans un congélateur. Les plateaux utilisés et les cages doivent être nettoyés et séchés avant qu&#39;ils puissent être utilisés à nouveau. </li></ol> REMARQUE: Il peut y avoir quelques variations dans la méthode d&#39;élevage des moustiques et des laboratoires différents peuvent avoir différentes techniques.

<ol><li>Bangs, M. J., Soelarto, T., Barodji,, Wicaksana, B. P., Boewono, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Colonization+of+Anopheles+maculatus+from+Central+Java%2C+Indonesia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Mosq+Control+Assoc%22%5BJournal%5D)">Colonization of Anopheles maculatus from Central Java, Indonesia.</a> J Am Mosq Control Assoc. 18, 359-363 (2002).</li>
<li>Beier, M. S., Beier, J. C., Merdan, A. A., el Sawaf, B. M., Kadder, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laboratory+rearing+techniques+and+adult+life+table+parameters+for+Anopheles+sergentii+from+Egypt%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Mosq+Control+Assoc%22%5BJournal%5D)">Laboratory rearing techniques and adult life table parameters for Anopheles sergentii from Egypt.</a> J Am Mosq Control Assoc. 266, 266-270 (1987).</li>
<li>Benedict, M. Q. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBenedict%2C+MQ+%22Care+and+maintenance+of+anopheline+mosquitoes%2C+The+molecular+biology+of+disease+vectors%3A+A+methods+manual%22">Care and maintenance of anopheline mosquitoes, The molecular biology of disease vectors: A methods manual</a>. Crampton, J. M., Beard, C. B., Louis, C. , Champman & Hall. London. 3-12 (1997).</li>
<li>Casanges, A. H., Mcgovran, E. R., Chiles, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rearing+of+Anopheles+quadrimaculatus+Say+and+Aedes+aegypti+%28L.%29+in+the+laboratory%5BTitle%5D)+AND+%22Mosq+News%22%5BJournal%5D)">Rearing of Anopheles quadrimaculatus Say and Aedes aegypti (L.) in the laboratory.</a> Mosq News. 9, 112-117 (1949).</li>
<li>Merritt, R. W., Dadd, R. H., Walker, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Feeding+behavior%2C+natural+food+and+nutritional+relation+ships+of+larval+mosquitoes%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Rev.+Entomol%22%5BJournal%5D)">Feeding behavior, natural food and nutritional relation ships of larval mosquitoes.</a> Annual Rev. Entomol. 37, 349-376 (1992).</li>
<li>Nasirian, H., Ladonni, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Artificial+bloodfeeding+of+Anopheles+stephensi+on+a+membrane+apparatus+with+human+whole+blood%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Mosq+Control+Assoc%22%5BJournal%5D)">Artificial bloodfeeding of Anopheles stephensi on a membrane apparatus with human whole blood.</a> J Am Mosq Control Assoc. 22, 54-56 (2006).</li>
<li>Ng'habi, K. R., John, B., Nkwengulila, G., Knols, B. G., Killeen, G. F., Ferguson, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+larval+crowding+on+mating+competitiveness+of+Anopheles+gambiae+mosquitoes%5BTitle%5D)+AND+%22Malar+J%22%5BJournal%5D)">Effect of larval crowding on mating competitiveness of Anopheles gambiae mosquitoes.</a> Malar J. 30 (4), 49(2005).</li>
<li>Stobart, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+affecting+the+control+of+body+volume+in+the+larvae+of+the+mosquitoes+Aedes+aegypti+and+Aedes+detritus%5BTitle%5D)+AND+%22Edw.+J.+Exp.+Boil%22%5BJournal%5D)">Factors affecting the control of body volume in the larvae of the mosquitoes Aedes aegypti and Aedes detritus.</a> Edw. J. Exp. Boil. 54, 67-82 (1971).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Nourriture A</td><td></td><td>Aquaricare</td><td></td><td>Nourriture pour poissons broyée. Une petite pincée doit être ajoutée.</td></tr><tr><td>Nourriture B</td><td></td><td>Purina</td><td></td><td>Nourriture pour chats broyée. Une petite pincée doit être ajoutée.</td></tr><tr><td>Nourriture C</td><td></td><td>Purina</td><td></td><td>Nourriture pour chats. Deux comprimés doivent être ajoutés.</td></tr><tr><td>RBC</td><td></td><td></td><td></td><td>globules rouges préparés : 40 % d'hématocrite dans du sérum humain</td></tr><tr><td>RPMI</td><td>Milieu</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CPD</td><td></td><td></td><td></td><td>anticoagulant</td></tr><tr><td>sérum</td><td></td><td></td><td></td><td>sérum humain O+</td></tr><tr><td>alimenteur pour moustiques</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>parafilm</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Anopheles gambiae</td><td></td><td></td><td></td><td>moustiques</td></tr><tr><td>saccharose à 10 %</td><td></td><td></td><td></td><td>nourriture pour moustiques</td></tr><tr><td>insectarium</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

protocole pour l&#39;élevage des moustiques (a. gambiae)

Protocol for Mosquito Rearing (A. gambiae)

Ce protocole décrit l&#39;élevage de moustiques dans l&#39;insectarium. Les chambres insectarium sont maintenus à 28 ° C et ~ 80% d&#39;humidité, avec un HR 12. cycle jour / nuit. Pour cette procédure, vous aurez besoin de cages de moustiques, 10% d&#39;une solution de saccharose stérile, des serviettes en papier, bécher, papier-filtre Whatman, les mangeoires de verre, le sang humain et le sérum bain d&#39;eau, parafilm, eau distillée, nettoyer des bacs en plastique, de la nourriture contre les moustiques (décrit ci-dessous), déduction faite de couvrir les plateaux, vide, et une chambre de collecte pour recueillir moustiques adultes.

Cette vidéo illustre les techniques générales utilisées pour l&#39;arrière Anopheles gambiae dans le laboratoire. Les méthodes pour prendre soin de moustiques de laboratoire sont démontrées par tous les stades du cycle de vie de l&#39;organisme à partir de larves en pupes au sang maternel adultes.

Protocole pour l&#39;élevage des moustiques (A. gambiae)

Ce protocole décrit l'élevage de moustiques en insectarium. Les salles de l'insectarium sont maintenues à 28 °C et à environ 80 % d'humidité, avec un cycle jour/nuit de 12 h...

Je m'appelle Shish et je suis postdoctorant dans le laboratoire du Dr George OU à la faculté de santé publique de Johns Hopkins, dans le département de microbiologie moléculaire et d'immunologie. Je vais vous montrer comment élever des moustiques de l'espèce *Anopheles gambiae*. En laboratoire, nous les maintenons dans une salle d'insectarium, généralement conservée à 27 degrés Celsius et à 80 % d'humidité.La chambre d'élevage est également maintenue selon un cycle jour-nuit de 12 heures afin de reproduire les conditions naturelles. Voici donc la chambre d'élevage que nous possédons, une installation essentielle ici, destinée à l'élevage de cet insecte. Comme vous pouvez le voir, elle contient divers bacs abritant les moustiques à tous les stades de développement : œufs, différents stades larvaires et pupe. Ces plateaux contiennent des larves âgées d’environ 11 ou 12 jours, et cette cage sert à recueillir les moustiques adultes que nous maintenons avec une solution de saccharose à 10 %. Pour commencer l’élevage des moustiques, nous devons les nourrir de sang, car les moustiques ont besoin des protéines du sang pour pondre des œufs. Le jour 1 correspond au jour suivant la mise des a

Research

Recherche

JoVE Journal

Biology

Biologie

Une fois qu'un gène est identifié comme étant potentiellement réfractaires au paludisme, il doit être évalué pour son rôle dans la prévention des infections à Plasmodium dans le moustique. Ce protocole illustre la façon dont l'étendue des infections à Plasmodium de moustiques peuvent être dosés. Les techniques de préparation de la culture de gamétocytes, se nourrissant de sang humain membrane moustiques, et en dosant les titres viraux dans l'intestin moyen des moustiques sont démontrés.

Protocole pour les infections à Plasmodium falciparum dans la détermination Phénotype moustiques et les infections

Inverse des approches génétiques se sont avérées extrêmement utiles pour déterminer quels gènes de résistance sous-tendent à des agents pathogènes vecteurs de moustiques. Ce protocole vidéo illustre une méthode utilisée par le laboratoire Dimopoulos à injecter dans les ARNdb Anopheles gambiae moustiques, qui abritent le parasite du paludisme. La technique de manipulation de l'installation d'injection et injection ARNdb dans le thorax est illustré.

Protocole pour des essais de l&#39;ARNi dans les moustiques adultes (A. gambiae)

Croisements génétiques des parasites du paludisme chez les rongeurs sont effectuées en alimentant deux des parasites génétiquement distinctes pour les moustiques. Recombinant progéniture clonée à partir de sang de souris après avoir laissé les moustiques de mordre des souris infectées. Cette vidéo montre comment produire des croisements...

Protocole pour la production d&#39;un croisement génétique des parasites du paludisme des rongeurs

Les analyses RNA-Seq deviennent de plus en plus importantes pour identifier les fondements moléculaires des traits adaptatifs dans les organismes non modèles. Ici, un protocole permettant d’identifier les gènes exprimés de manière différentielle entre les moustiques Aedes albopictus diapause et non diapause est décrit, de l’élevage des moustiques au séquençage de l’ARN et aux analyses bioinformatiques des données RNA-Seq.

Un protocole expérimental et de la bioinformatique pour les analyses d'ARN-Seq de la photopériode diapause dans le Asian Tiger Mosquito, Aedes albopictus

Par inoculation avec des billes, la technique décrite permet de stimuler la réponse de mélanisation du moustique dans le système circulant de l’hémolymphe. La quantité de mélanine recouvrant les billes peut être mesurée après la dissection comme mesure de la réponse immunitaire.

inoculant<em&gt; Anopheles gambiae</em&gt; Les moustiques avec perles à induire et mesurer la réponse immunitaire mélanisation

Les moustiques Aedes aegypti infectés par Wolbachia sont libérés dans les populations naturelles de supprimer la transmission des arbovirus. Nous décrivons des méthodes arrière Ae. aegypti Wolbachia infections en laboratoire pour des expériences et sortie de terrain, prendre des précautions pour réduire au minimum la sélection et l’adaptation de laboratoire.

Maintenir les moustiques Aedes aegypti infectés par Wolbachia

Le système bipartite GAL4-UAS est un outil polyvalent pour la modification de l’expression des gènes de manière spatio-temporelle contrôlée qui permet une analyse génétique fonctionnelle chez Anopheles gambiae. Les procédures décrites pour l’utilisation de ce système sont une stratégie de clonage semi-standardisée, le sexage et le dépistage des pupes pour les marqueurs de protéines fluorescentes et la fixation des embryons.

Utilisation du système GAL4-UAS pour la génétique fonctionnelle chez Anopheles gambiae

Le protocole décrit comment obtenir des modifications dirigées par le site dans le génome des moustiques du paludisme anophèles en utilisant le système φC31 . Les modifications décrites comprennent à la fois l’intégration et l’échange de cassettes transgéniques dans le génome des lignes d’amarrage portant attP.

Intégration médiée par φC31 dirigée sur site et échange de cassettes chez les anophèles vecteurs du paludisme

La technique de l’insecte stérile (TS) est utilisée pour contrôler des populations de moustiques spécifiques et importantes sur le plan médical qui peuvent être résistantes aux contrôles chimiques. Ici, nous décrivons une méthode d’élevage de masse et de préparation de moustiques mâles stériles pour la libération dans le cadre d’un programme SIT opérationnel ciblant le moustique Aedes aegypti .

Préparation de moustiques mâles Aedes aegypti irradiés et marqués en vue de leur libération dans le cadre d’un programme opérationnel de techniques d’insectes stériles

Les techniques de micro-injection sont essentielles pour introduire des gènes exogènes dans les génomes des moustiques. Ce protocole explique une méthode utilisée par le laboratoire James pour microinjecter des constructions d’ADN dans des embryons d’Anophèles gambiens afin de générer des moustiques transformés.

Méthode de micro-injection pour les embryons d’anophèles gambiens

Découvrez l'élevage d'Anopheles gambiae en laboratoire pour la recherche sur le paludisme. Cette méthode montre le contrôle de la température, de l'humidité et le cycle jour/nuit nécessaires au développement des moustiques vecteurs.

Protocole pour l'élevage des moustiques (A. gambiae)

Explorer plus de vidéos