Name: Une procédure pour létude de lRétablissement choc électrique induite par la cocaïne dCherchant des rats de laboratoire (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-01-06T18:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 54 s
Description: Découvrez une méthode pour étudier la recherche de cocaïne induite par le stress chez le rat de laboratoire. Cette procédure optimise les paramètres de choc électrique pour explorer les mécanismes neurobiologiques de la rechute.

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1. Animaux procédures d'hébergement et d'acclimatation <ol><li> Homme rats Long Evans, pesant 300-325 g au moment de l'arrivée dans le vivarium, sont logés individuellement dans des cages standard de plastique contenant du papier recyclé granulés literie, avec des couvercles de grille de fil pour accueillir des bouteilles d'eau et de nourriture. </li><li> Les rats sont maintenus sur un revers de lumière-obscurité calendrier (lumières allumées 19:00-07:00), dans une température et humidité contrôlées vivarium. </li><li> L'alimentation et l'eau sont disponibles ad libitum dans les cages de la maison durant l'expérience. </li><li> Les rats sont autorisés à s'acclimater à la vivarium et les conditions de logement pour une semaine avant la chirurgie. Pendant ce temps les rats sont laissés au repos à l'exception du nettoyage de routine, l'alimentation, et la surveillance du poids. </li></ol> 2. Chirurgie cathétérisme intraveineux <ol><li> Sous anesthésie de gaz isoflurane, et en utilisant des techniques chirurgicales aseptiques standards, les rats sont préparés avec des cathéters en silastic dans la veine jugulaire droite. Les sorties cathéter dans une canule modifiés (Plastics One) à la surface du crâne, et la canule est monté sur le crâne avec des bijoutiers vis et ciment dentaire. Pour plus de détails sur les procédures chirurgicales, voir 7, 8. </li><li> A la fin de la chirurgie, les cathéters sont rincés avec environ 0,2 ml d'une solution contenant de l'héparine de 50% (1000 UI) et de dextrose à 50% (25 g/50 ml). Un bloqueur de plastique est placé sur l'ouverture de la canule afin de protéger le cathéter par des débris externes, et pour maintenir la perméabilité du cathéter. </li><li> Au moment de la chirurgie, et de nouveau le jour après la chirurgie, les rats sont administrés 5 mg / kg, SC, du kétoprofène analgésique. </li><li> Les rats sont autorisés au moins sept jours pour se remettre de la chirurgie avant l'expérimentation. Pendant ce temps, les rats sont laissés au repos dans les cages de la maison, à l'exception de la routine de nettoyage et d'alimentation, et un suivi quotidien de poids et la santé générale. Le dernier jour de la période de récupération, les cathéters sont rincés avec la solution d'héparine / dextrose (section 2.2) afin de vérifier la perméabilité du cathéter. </li></ol> 3. Procédures comportementales Toutes les procédures comportementales sont réalisées en utilisant l'équipement fourni par Associates Inc Med (St Albans, VT). L'équipement, installé dans une salle dédiée, comprend un ensemble de standards chambres opérant, chacun contenu dans une enceinte acoustique atténuantes. Chaque chambre est équipée opérant deux leviers escamotables, deux 6,5 cm élevées au dessus d'un rez-tige en acier inoxydable. Une lumière blanche est situé relance juste au-dessus un levier, et les réponses sur ce levier (le soi-disant «actifs» de levier) résulte de l'éclairage simultané de la lumière de relance et l'activation d'une pompe à perfusion (Razel Scientific Instruments, St. Albans, VT). La pompe est située sur une étagère juste à l'extérieur de la chambre de conditionnement opérant, mais dans l'enceinte atténuation sonore. L'autre levier (le soi-disant "inactif" levier) est laissé étendu dans la chambre à travers toutes les procédures expérimentales; de répondre sur ce levier est sans conséquence. Enfin, chaque chambre est équipée pour offrir à courant constant, par intermittence, incontournable, choc électrique électrique à travers un brouilleur à l'étage tige d'acier. Toutes les conditions expérimentales (par exemple, des présentations de relance, les perfusions de médicaments, la délivrance du choc), ainsi que l'enregistrement des données et de consolidation, sont réalisés via des interfaces entre les chambres d'essai et un centre d'exploitation informatique Associés Med logiciels (MED-IV). L'expérience est réalisée en 5 phases: 1) L'habituation; 2) La cocaïne SA; 3) sans drogue période; 4) l'extinction, et 5) Essai de réintégration. Dans toutes les phases (sauf pour la période sans médicament), les rats sont transférés pour des séances quotidiennes de la salle de logement pour les chambres d'essai opérant. Les animaux sont transférées individuellement, en petits contenants de plastique. L'alimentation et l'eau ne sont pas disponibles dans les chambres opérant. <ol><li> Accoutumance <ol><li> Vingt-quatre heures précédant la première session de la cocaïne SA (. Voir section 3.2), les rats sont autorisés à s'habituer aux chambres opérant durant une seule séance de 2 h; au cours de cette session, le levier actif est rétracté. </li></ol></li><li> Cocaïne SA de formation <ol><li> Avant chaque séance d'entraînement quotidienne, les rats sont pesés dans la salle de l'habitation. Par la suite, ils sont transférés dans les chambres opérant. </li><li> Après avoir été placés dans les chambres opérant, un printemps et un tube de montage (qui s'étend de la pompe à perfusion de médicaments) est relié à la canule du crâne monté. </li><li> Les rats sont autorisés à s'auto-administrer de la cocaïne chlorhydrate cours quotidiens de 3 heures des séances, pour un total de 8-10 jours (soit consécutivement ou avec deux intervenants «jours de repos" entre les sessions 5 et 6). </li><li> Séances SA alterner entre le matin (9:00-12:00) et après-midi (13h00-16h00). Le calendrier des sessions SA est alterné parce que les procédures dans les phases ultérieures de l'expérience (à savoir l'extinction et de test) se produisent à la fois tLe moment de la journée pour tous les animaux (voir Sections 3.4 et 3.5); Ainsi, cet agencement empêche tous les effets confondants de l'heure de la journée sur la suite de drogue comportement de recherche. </li><li> Chaque session de formation est précédée par une période d'acclimatation de 5 min, pendant laquelle les animaux sont placés dans les chambres opérant avec le levier actif rétracté. </li><li> Au début de la session de formation, le levier actif est étendue dans la chambre et la lumière de relance (situé au-dessus du levier actif) est allumé pendant 30 s. En outre, la Light House est activé à ce moment, et reste allumé pendant toute la session. Ensemble, ces événements de signal de la disponibilité de la cocaïne. </li><li> Pendant la session, des réponses sur le levier actif sont renforcées par une perfusion de 3 s de la cocaïne (0,23 mg/65 uL, iv) sur un ratio fixe-1 horaire de renfort. Parallèlement à l'activation de la pompe à perfusion et la livraison de drogue est une activation de 20 s de la lumière au-dessus du levier de relance active. Cette présentation de lumière de 20 s correspond à un «time-out" période pendant laquelle les réponses supplémentaires levier actif sont enregistrées mais non armé. </li><li> Les animaux sont admis un maximum de 50 perfusions par 3-H session. Nous avons régulièrement d'imposer ce critère dans notre travail et, dans notre expérience, ont constaté que cela réduit considérablement, voire élimine, les incidents de décès dus à une surdose. </li><li> A la fin de chaque séance quotidienne, les cathéters rats sont rincées avec 0,2 à 0,3 ml de solution de dextrose à l'héparine (voir section 2.2) et les rats sont retournés dans leur cage. </li></ol></li><li> Drug période sans <ol><li> Après la séance de la cocaïne SA finale, les rats sont laissés au repos (à l'exception du nettoyage de routine, l'alimentation, et la surveillance du poids) dans leur cage pour une période minimale de sept jours. </li></ol></li><li> Extinction de la cocaïne formés comportements <ol><li> Les rats sont transférés aux chambres opérant entre 9:00-10:00 pour la formation d'extinction. </li><li> Le printemps et l'assemblage tube est relié à la canule du crâne monté. </li><li> Conformément aux conditions de formation SA, chaque jour de la formation d'extinction est précédée par une période d'acclimatation de 5 min, pendant laquelle les animaux sont placés dans les chambres opérant avec le levier actif rétracté. </li><li> Les rats sont ensuite donné quatre séances de 60 minutes d'extinction, séparés par des intervalles de 30 min. Chaque session de 60 min est initiée par les mêmes événements qui se produisent au début des sessions de formation (par exemple, l'éclairage de la maison de la lumière, l'extension du levier actif, et de 30 secondes d'illumination de la lumière au-dessus du levier de relance active). Tout au long des séances, toutes les conditions qui étaient présents lors de l'entraînement SA sont maintenues (c'est à dire, la réponse contingente-illumination de la lumière de relance pendant 20 sec et 3-s l'activation de la pompe à perfusion), sauf que les réponses levier actif ne sont plus renforcées par des perfusions de la cocaïne . Pendant les intervalles de 30 min qui séparent chaque session d'extinction de 60 min, le levier actif est rétracté et la lumière maison est éteinte. </li><li> A la fin de la dernière session de 60 minutes, les rats sont retournés dans leur cage. </li><li> Étapes 3.4.1. à 3.4.5. sont répétés pendant 3 jours consécutifs. </li></ol></li><li> Rétablissement de la cocaïne formés comportements par le stress choc électrique <ol><li> Les rats sont transférés aux chambres opérant entre 9:00-10:00 </li><li> Après avoir été placés dans les chambres opérant, au printemps et à l'assemblage tube est relié à la canule du crâne monté. </li><li> Conformément aux conditions de formation et de l'extinction, une période d'acclimatation de 5 min est fourni, au cours de laquelle les rats sont placés dans les chambres opérant avec le levier actif rétracté. </li><li> Les rats sont ensuite donné deux séances de 60 min d'extinction (voir 3.4.4.) Séparés par un intervalle de 30 min, identiques à ceux donnés lors de la phase d'extinction. </li><li> Si après la deuxième session de 60 minutes le nombre total de réponses sur le levier précédemment actif est inférieur à 15, les animaux sont soumis à un test de rétablissement après une supplémentaire de 30 min d'intervalle. Dans cet intervalle de 30 min, choc électrique ou fictive choc électrique (c'est à dire, aucun choc électrique) est administré (voir 3.5.6.). Si un critère de 15 ou moins de réponses sur le levier actif n'est pas atteint après la deuxième session, une session d'extinction (s) supplémentaire est donné avant les essais de réintégration. </li><li> Dix minutes après la séance de l'extinction de 60 secondes min (ou après une séance de 60 min d'extinction (s) supplémentaire nécessaire pour établir le critère de l'extinction de 15 ou moins de réponses), les animaux sont exposés à 20 min de stress choc électrique intermittente électrique (ou imposture choc électrique) dans la chambre de conditionnement opérant. Choc électrique est donnée à un moment où le levier actif est rentré et lumières de la maison et de relance sont éteints. Choc électrique est livré selon un calendrier variable à un intervalle moyen de 40 s (10-70 s large). Chaque choc est délivré à une intensité de 0,9 mA, et est de 0,5 s dans la durée. Ces paramètres du choc électrique sont basées sur des travaux pilotes vasteréalisées dans notre laboratoire pour établir la réintégration fiables de cocaïne cherchant, avec le minimum d'intensité et la durée de l'exposition choc électrique. Dans ces paramètres, les animaux présentent une réaction saut réflexif au choc 0,5 s et, occasionnellement, émettent une vocalisation brève. Bien que les animaux sont observés pendant la période de choc, l'intensité du choc n'est pas d'une ampleur suffisante pour induire des signes plus marqués de détresse. </li><li> Immédiatement après la résiliation de la session choc électrique, le levier actif est étendue et les rats sont autorisés à levier de la presse dans des conditions d'extinction (c'est à dire, les réponses ne sont pas renforcés avec de la cocaïne, mais ne continuent d'entraîner dans l'illumination de la lumière de relance et l'activation de la pompe à perfusion ). Cette période de temps est défini comme le test de réintégration et est typiquement 1-3 heures dans la durée. La plupart répondent survient dans la première partie de la session de test (30 premières min-1 h), et éteint par la suite au cours des périodes d'essai plus étendu. Ainsi, un test de 1 h est suffisant pour saisir l'effet de réintégration, avec des périodes d'essai plus fournir un profil d'extinction plus complète de l'effet. </li><li> Quand une conception de mesures répétées est employé, chaque rat est testé dans des conditions choc électrique choc électrique et d'imposture. Étapes 3.5.1. à 3.5.8 sont répétées sur une journée d'essais ultérieurs, et le test alternatif de réintégration (choc électrique ou fictive choc électrique) est administré. </li></ol></li></ol> 4. Les résultats représentatifs: <img src="/files/ftp_upload/2265/2265fig1.jpg" alt="Figure 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figure 1"> Figure 1. Profils de réponse stylisé de l'activité sur les leviers actifs et inactifs pendant l'auto-administration de la formation, l'extinction, et des essais de réintégration. La figure 1 présente stylisée profils de réponse opérant, typiques de ceux obtenus lors des différentes phases du protocole expérimental décrit aux présentes. 1. Réponses levier actif <ol><li> Cocaïne SA de formation. La figure 1 (gauche) montre une courbe typique de la cocaïne de formation SA qui comprend à la fois nombre de perfusions et le nombre total de presses levier actif. Les rats acquièrent généralement la cocaïne SA dans les sessions 1-3 et, lorsque le comportement est établie, de maintenir un taux stable de la consommation de drogue (généralement moins de 20% entre les sessions de variance) sur les sessions ultérieures. </li><li> Extinction de la cocaïne formés comportement. Il peut être vu dans la figure 1 (panneau du milieu) que le 1er jour de l'extinction, quand les réponses ne sont pas renforcés pour la première fois, le nombre total de réponses sur le levier actif est initialement supérieur à la fin de la phase de formation (correspondant à une "rafale d'extinction" soi-disant); progressivement, au cours des quatre séances d'extinction, en réponse diminue. Sur Jours 2 et 3 de l'extinction, une certaine reprise de répondre (par rapport à celle observée au cours de la dernière session de la journée précédente) peuvent être observées, mais les réponses sont généralement moins au début de la journée précédente de l'extinction, et l'extinction générale produit plus rapidement au cours des quatre séances de cette journée. </li><li> Rétablissement de la cocaïne cherchent. Il peut être vu dans la figure 1 (droite), 20 min d'exposition à choc électrique intermittente induit une augmentation non armé de répondre sur le levier actif, par rapport à celle observée à la fin de la session d'extinction précédente. Choc électrique induit également une augmentation de la réponse par rapport à celle observée dans des conditions où simulacre choc électrique est administré. Ainsi, la réintégration de la cocaïne cherchant par le stress choc électrique peut être exprimée soit en tant que: 1) l'augmentation du nombre de non-réponses renforcée après l'exposition au choc électrique, par rapport aux réponses à la session de l'extinction avant choc électrique ou 2) l'augmentation du nombre de non armé réponses après relatifs à choc électrique choc électrique imposture. </li></ol> 2. Réponses levier inactif Il peut être vu dans la figure 1 (ligne rouge) qui, durant toutes les phases d'expérimentation, il ya des niveaux de réponse très faible associée avec le levier inactif. Cependant, une augmentation modeste de répondre sur ce levier est parfois observé après l'exposition au stress choc électrique. Même dans les cas où une telle augmentation dans la réponse survient, l'augmentation du levier actif répondant tend à être proportionnellement beaucoup plus élevé.

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Expériences sur les animaux ont été effectuées en conformité avec les directives et les règlements énoncés par le Conseil canadien de protection des animaux et de l&#39;Université de Toronto du comité de soins aux animaux. La production de cette vidéo a été parrainé par Associates Med, Inc qui produit l&#39;instrument utilisé dans cet article.

Au cours des dernières décennies, trois variantes de la procédure de réintégration SA ont été développées pour étudier le rétablissement de la recherche de drogue chez des rats de laboratoire et des singes. Les différences qui définissent les variations procédurales se rapportent principalement à savoir si le médicament SA, l&#39;extinction, et des sessions de test se produisent dans la même journée ou sur plusieurs jours 1. La procédure que nous avons décrites dans ce document est communément appelé le «sein entre« variation session, car la drogue SA se produit pendant les sessions par jour (soit, en quelque sorte entre-session) qui sont séparés de l&#39;extinction et des sessions de test, mais l&#39;extinction et les tests se produisent le jour même (à savoir, d&#39;une manière au sein de session) [par exemple, 7, 9]. Alternativement, dans ce qu&#39;on appelle &quot;entre deux sessions&quot; procédures, toutes les phases de l&#39;expérimentation se produisent séquentiellement, tels que la SA, l&#39;extinction, et des sessions de tests sont donnés à des jours différents (ie, toutes les phases sont entre les sessions) [par exemple, 8, 10, 11]. En revanche, dans les procédures de terminer &quot;dans les sessions&quot;, la formation SA, l&#39;extinction, et des séances de test se produisent tous dans la même journée [par exemple, 12]. Bien qu&#39;il existe des rapports publiés choc électrique induite par la réintégration de la recherche de drogue en utilisant différentes variantes de la procédure de réintégration, nous avons trouvé cela stressant (au moins chez les animaux avec une histoire de cocaïne SA) pour être plus efficace quand l&#39;extinction et les tests se produire sur les mêmes jour (c&#39;est à dire, dans un «entre-deux au sein de« manière séances). Sinon, nous avons eu du succès avec l&#39;obtention de choc électrique fiable induite par la réintégration de la cocaïne cherchant l&#39;aide d&#39;un complètement &quot;entre deux sessions&quot; procédure, mais seulement dans des conditions où les animaux sont logés dans les chambres SA long de l&#39;expérience 8, ou tout au moins pendant l&#39;extinction et le test 13. L&#39;inconvénient de cette approche entre les sessions, au cours de cette décrits dans le présent protocole, est qu&#39;elle limite le nombre de sujets qui peuvent être formés et testés en une seule fois et, par conséquent, diminue l&#39;efficacité de la collecte de données. Bien que dans les conditions du présent protocole un seul groupe d&#39;animaux peut être éteint et testé à un moment donné, un plus grand débit peut être réalisé en décalant d&#39;une semaine le temps de démarrage de la phase de formation SA pour deux groupes de rats. Dans ce scénario, un premier groupe de rats peuvent entrer dans la phase sans drogue que le deuxième groupe entre dans la semaine 2 de la formation SA, et, par la suite, l&#39;extinction et le test peut être effectué dans le premier groupe tandis que le deuxième groupe en est à ses médicaments sans phase. Cette approche permet une utilisation plus efficace des ressources et accélère le rythme d&#39;acquisition de données, tout en menant à très efficace et fiable choc électrique induite par la réintégration. Fait important, dans notre procédure, l&#39;extinction du comportement préalablement renforcé drogue et d&#39;essai pour la réintégration se fait en présence du médicament associé indices. Bien que nous ayons jamais réalisé de formation ou de l&#39;extinction des tests en l&#39;absence d&#39;indices de drogue associé, il est de notre compréhension, basée sur des communications personnelles, que le stress peut en effet être inefficaces dans l&#39;induction de la réintégration lors du test survient en l&#39;absence d&#39;indices éteinte ( au moins dans le cas des animaux ayant des antécédents de la cocaïne SA). Un examen systématique de cette variable, et les implications théoriques qu&#39;elle pose, est une question importante pour les recherches futures. Un dernier facteur de procédure qui garantit commentaires, c&#39;est que l&#39;effet du stress choc électrique sur la réintégration semble être très sensible aux manipulations du contexte. Par exemple, le stress choc électrique n&#39;est efficace que dans l&#39;induction de la réintégration de recherche de drogue, si elle est administrée dans l&#39;environnement dans lequel la drogue SA et l&#39;extinction se produit, c&#39;est-à choc électrique ne rétablit pas la drogue cherchent si l&#39;exposition à l&#39;agent stressant survient dans un contexte nouveau, suggérant une interaction importante entre le stress et l&#39;environnement de drogue dans ses effets sur la réintégration 14. En conclusion, les procédures de réintégration choc électrique, comme ceux décrits dans ce document, ont été utilisés avec succès considérable pour élucider les mécanismes de base du comportement et neurobiologiques qui régissent la relation entre le stress et la rechute de drogue. En effet, ces procédures, lorsqu&#39;ils sont modifiés pour accueillir des prétraitements ou des manipulations pharmacologiques neurochimique ciblage spécifique des substrats neuronaux, peuvent servir d&#39;outils puissants pour la caractérisation de la neurobiologie de la réintégration à la recherche de drogue par le stress.

<table><tbody><tr><td>Kit de base pour le test d'auto-administration de drogue chez le rat</td><td></td><td><a href="http://www.med-associates.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Med Associates, Inc.</a></td><td>MED-008-CT-B1</td><td></td></tr><tr><td>Cubicle d'atténuation sonore en MDF extra haut et profond</td><td>Composant du kit de base pour le test d'auto-administration de drogue chez le rat</td><td><a href="http://www.med-associates.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Med Associates, Inc.</a></td><td>ENV-018MD</td><td></td></tr><tr><td>Chambre de test modulaire standard avec couvercle pour perfusion de drogue et bac de récupération</td><td>Composant du kit de base pour le test d'auto-administration de drogue chez le rat</td><td><a href="http://www.med-associates.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Med Associates, Inc.</a></td><td>ENV-008CT</td><td></td></tr><tr><td>Plancher en grille d'acier inoxydable</td><td>Composant du kit de base pour le test d'auto-administration de drogue chez le rat</td><td><a href="http://www.med-associates.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Med Associates, Inc.</a></td><td>ENV-005</td><td></td></tr><tr><td>Lampe témoin, avec cache, 28 V</td><td>Composant du kit de base pour le test d'auto-administration de drogue chez le rat</td><td><a href="http://www.med-associates.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Med Associates, Inc.</a></td><td>ENV-215M</td><td></td></tr><tr><td>Lampe signalétique 1&amp;#8221; avec lentille blanche</td><td>Composant du kit de base pour le test d'auto-administration de drogue chez le rat</td><td><a href="http://www.med-associates.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Med Associates, Inc.</a></td><td>ENV-221M</td><td></td></tr><tr><td>Levier de réponse escamotable à profil bas</td><td>Composant du kit de base pour le test d'auto-administration de drogue chez le rat</td><td><a href="http://www.med-associates.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Med Associates, Inc.</a></td><td>ENV-112CM</td><td></td></tr><tr><td>Kit SmartCtrl 8 entrées/16 sorties</td><td>Composant du kit de base pour le test d'auto-administration de drogue chez le rat</td><td><a href="http://www.med-associates.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Med Associates, Inc.</a></td><td>DIG-716P2</td><td></td></tr><tr><td>Pompe à seringue à vitesse unique, 3,33 tr/min</td><td>Composant du kit de base pour le test d'auto-administration de drogue chez le rat</td><td><a href="http://www.med-associates.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Med Associates, Inc.</a></td><td>PHM-100</td><td></td></tr><tr><td>Kit d'auto-perfusion pour rat</td><td>Composant du kit de base pour le test d'auto-administration de drogue chez le rat</td><td><a href="http://www.med-associates.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Med Associates, Inc.</a></td><td>PHM-119B-23-D</td><td></td></tr><tr><td>Assemblage du bras de distribution de médicament</td><td>Composant du kit de base pour le test d'auto-administration de drogue chez le rat</td><td><a href="http://www.med-associates.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Med Associates, Inc.</a></td><td>PHM-110-SAI</td><td></td></tr><tr><td>Stimulateur aversif à onde carrée</td><td>Composant du stress par choc électrique</td><td><a href="http://www.med-associates.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Med Associates, Inc.</a></td><td>ENV-414S</td><td></td></tr><tr><td>Harnais breveté à déconnexion rapide pour plancher en grille d'acier inoxydable</td><td>Composant du stress par choc électrique</td><td><a href="http://www.med-associates.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Med Associates, Inc.</a></td><td>ENV-005-QD</td><td></td></tr><tr><td>Câble de sortie de choc</td><td>Composant du stress par choc électrique</td><td><a href="http://www.med-associates.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Med Associates, Inc.</a></td><td>SG-219G-10</td><td></td></tr><tr><td>Logiciel MED-PC IV</td><td>Logiciel</td><td><a href="http://www.med-associates.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Med Associates, Inc.</a></td><td>SOF-735</td><td></td></tr></tbody></table>

une procédure pour l&#39;étude de l&#39;rétablissement choc électrique induite par la cocaïne d&#39;cherchant des rats de laboratoire

A Procedure for Studying the Footshock-Induced Reinstatement of Cocaine Seeking in Laboratory Rats 

L&#39;aspect le plus insidieux de la toxicomanie est la forte propension à la rechute. Les modèles animaux de la rechute, connu sous le nom des procédures de réintégration, ont été largement utilisées pour étudier la neurobiologie et phénoménologie de rechute à l&#39;usage de drogues. Bien que les écarts de procédure ont émergé au cours des dernières décennies, les procédures de rétablissement les plus conventionnels sont basés sur l&#39;auto-administration de médicaments (SA) modèle. Dans ce modèle, un animal est formé pour effectuer une réaction opérant pour obtenir des médicaments. Par la suite, le comportement est éteinte par la retenue de réponse contingente renfort. Rétablissement de la recherche de médicaments est alors déclenché par un événement distinct, comme une injection de la drogue de formation, ré-exposition à la drogue associée indices, ou l&#39;exposition à un facteur de stress 1. Rétablissement des procédures ont été initialement développés pour étudier la capacité des aigus non contingent exposition à la drogue de formation pour rétablir la drogue cherchent des rats et des singes 1, 2. Rétablissement des procédures ont depuis été modifiées pour étudier le rôle des stimuli environnementaux, y compris les médicaments associés des indices et l&#39;exposition à différentes formes de stress, en rechute de recherche de drogue 1, 3, 4. Au cours des 15 dernières années, un axe majeur de la littérature sur la réintégration a été le rôle du stress dans la rechute de drogue. Une des formes les plus couramment utilisés de stress pour étudier cette relation est une exposition aiguë à la légère, intermittente, footshocks électrique. La capacité du stress choc électrique pour induire le rétablissement de la recherche de drogue a été démontré par Shaham et ses collègues (1995) chez des rats présentant une histoire de l&#39;héroïne par voie intraveineuse SA 5. Par la suite, l&#39;effet a été généralisé à des rats avec des histoires de cocaïne par voie intraveineuse, la méthamphétamine, et la nicotine SA, ainsi que de l&#39;éthanol par voie orale SA 3, 6. Bien choc électrique induite par le rétablissement de la recherche de drogue peut être réalisé de manière fiable et robuste, il est un effet qui tend à être sensible à certaines variables paramétriques. Il s&#39;agit notamment de l&#39;agencement des séances d&#39;essais d&#39;extinction et de réintégration, l&#39;intensité et la durée du stress choc électrique, et la présence de drogue associé indices lors de l&#39;extinction et l&#39;essai de réintégration. Nous présentons ici un protocole de choc électrique induite par la réintégration de la cocaïne cherchant que nous avons utilisé avec succès constant pour étudier la relation entre le stress et la cocaïne cherchent.

Les modèles animaux de la rechute, connu sous le nom des procédures de réintégration, ont été largement utilisées pour étudier le rôle du stress dans la rechute à la recherche de drogue. Ici, nous présentons une méthode pour induire le rétablissement de la cocaïne cherchant des rats de laboratoire par l&#39;intermédiaire d&#39;expositions aiguës à légère, choc électrique électriques intermittents.

Une procédure pour l&#39;étude de l&#39;Rétablissement choc électrique induite par la cocaïne d&#39;Cherchant des rats de laboratoire

L'aspect le plus insidieux de la toxicomanie est la propension élevée à la rechute. Les modèles animaux de rechute, connus sous le nom de procédures de rétablissement, ont été...

Ce vidéo montre une procédure permettant d'étudier systématiquement la relation entre le stress et la rechute dans la recherche de cocaïne. Chez des rats de laboratoire, les animaux sont d'abord entraînés à s'autoadministrer de la cocaïne par voie intraveineuse en effectuant une pression sur un levier au cours de plusieurs séances quotidiennes durant la phase sombre ou active d'un cycle lumière-obscurité de 12 heures. Ensuite, la réponse de pression sur le levier renforcée par la cocaïne est éteinte au cours de plusieurs séances en supprimant le renforcement contingent à la réponse.Le comportement d'appui sur le levier éteint est ensuite rétabli en exposant les animaux à des chocs plantaires intermittents juste avant de leur donner accès au levier précédemment associé à la cocaïne. Bien que le rétablissement induit par choc plantaire de la recherche de cocaïne soit un effet régulièrement obtenu par plusieurs équipes de recherche, il peut être sensible à certaines variables paramétriques. Le protocole que nous décrirons reflète nos efforts réussis visant à optimiser ces paramètres afin d'obtenir un rétablissement fiable et marqué du comportement de recherche de cocaïne induit par choc plantaire chez le rat.Les méthodes que nous décrivons ici aujourd'hui et leurs variantes peuvent être utilisées pour examiner des questions essentielles dans le domaine de la toxicomanie, et en particulier, pour étudier les mécanismes comportementaux et neurobiologiques fondamentaux qui sous-tendent la relation entre le stress et la rechute dans la recherche de drogues. Le matériel utilisé pour étudier la reprise induite par des chocs plantaires dans la recherche de cocaïne comprend un ensemble de chambres opérantes standard, chacune placée dans une enceinte insonorisée. Tout le matériel est fourni par Med Associates Incorporated berated.Chaque chambre opérante est équipée de deux leviers escamotables, tous deux surélevés de 6,5 centimètres au-dessus d'un plancher en barreaux d'acier inoxydable. Une lumière de stimulus blanche est située juste au-dessus d'un des leviers. Ce levier, appelé levier actif, génère en réponse l'illumination simultanée de la lumière de stimulus et l'activation d'une pompe à perfusion placée sur une étagère juste à l'extérieur de l'extrémité supérieure de la chambre.Dans l'enceinte insonorisée, l'autre levier, appelé levier inactif, reste étendu dans la chambre. Tout au long des procédures expérimentales, les réponses sur ce levier sont sans conséquence. Enfin, chaque chambre est équipée pour délivrer, par l'intermédiaire d'un mélangeur, un choc électrique intermittent et évitable par courant constant à travers le plancher en barres d'acier.Toutes les conditions expérimentales ainsi que l’enregistrement et la consolidation des données sont réalisés par l’intermédiaire d’interfaces entre les chambres de test et un ordinateur central. Logiciel associé au fonctionnement intermédiaire. Avant chaque session quotidienne, qui a lieu pendant la phase sombre ou active du cycle clair-obscur, peser les rats dans la salle d’hébergement, puis les transférer vers les chambres operantes.24 heures avant la première séance d'auto-administration de cocaïne, laissez les rats s'habituer aux chambres opérantes pendant une seule séance de deux heures. Pendant cette séance, le levier actif est rentré et le levier inactif est étendu au début des séances d'entraînement quotidiennes ; connectez un ensemble ressort-tuyau à la canule fixée au crâne et placez le rat dans la chambre opérante. La canule est reliée à un cathéter célesta qui a été implanté chirurgicalement dans la veine jugulaire droite afin de permettre l'administration intraveineuse du médicament.Laisser les rats s'autoadministrer de la cocaïne pendant des séances quotidiennes de trois heures, pendant un total de huit à dix jours. Avant chaque séance d'entraînement, prévoir une période d'acclimatation de cinq minutes, durant laquelle les animaux sont placés dans les compartiments operants avec le levier actif rentré. Pour commencer une séance d'entraînement, sortir le levier actif dans le compartiment et allumer la lumière-stimulus pendant 30 secondes.En outre, activez la lumière de la cage à ce moment-là et laissez-la allumée pendant toute la durée de la session. L'ensemble de ces événements signale la disponibilité de la cocaïne durant la session. Les réponses sur le levier actif sont renforcées par une perfusion de cocaïne d'une durée de trois secondes selon un ratio fixe, un programme de renforcement simultané à l'activation de la perfusion, la pompe et la délivrance du médicament correspondent à une 22e activation de la lumière-stimulus située au-dessus du levier actif.Cette présentation lumineuse n°22 correspond à une période d'arrêt pendant laquelle des réponses supplémentaires sur le levier actif sont enregistrées mais non renforcées. Au cours de chaque séance de trois heures, un maximum de 50 perfusions est autorisé chez les animaux afin de réduire le risque de surdose. À la fin de chaque séance quotidienne, rincez les cathéters du rat avec 0,2 à 0,3 millilitres de solution de dextrose héparinée, puis remettez-les dans leur cage d'origine.Après la dernière séance d'auto-administration de cocaïne, laisser les rats au repos dans leur cage d'origine pendant un minimum de cinq à sept jours. Une fois cette période écoulée, transférer les rats dans les chambres operantes pour une formation à l'extinction conforme aux conditions d'entraînement. Chaque journée de formation à l'extinction doit être précédée d'une période d'acclimatation de cinq minutes, durant laquelle les animaux sont placés dans les chambres operantes avec le levier actif rétracté.Ensuite, soumettez les rats à quatre séances d'extinction de 60 minutes chacune, séparées par des intervalles de 30 minutes. Chaque séance de 60 minutes est initiée par les mêmes événements qui se produisent au début des séances d'entraînement tout au long des sessions. Conservez toutes les conditions présentes pendant l'entraînement, sauf qu'il ne faut plus renforcer les pressions sur le levier actif par des perfusions de cocaïne pendant les intervalles de 30 minutes séparant chaque séance d'extinction de 60 minutes.Ramener le levier actif en position initiale et éteindre la lumière de la chambre à la fin de la dernière session de 60 minutes. Ramener les rats dans leur cage d'origine. Ces étapes sont répétées pendant trois jours consécutifs.Transférez les rats dans les chambres opérantes comme cela est fait pendant la phase d'extinction, en respectant les conditions utilisées pour l'entraînement et l'extinction. Accordez une période d'acclimatation de cinq minutes, durant laquelle les rats sont placés dans les chambres opérantes avec le levier actif rétracté. Ensuite, soumettez les rats à deux sessions d'extinction de 60 minutes chacune, séparées par un intervalle de 30 minutes, identique à celui appliqué durant la phase d'extinction.Si, après la deuxième séance de 60 minutes, le nombre total de réponses sur le levier précédemment actif est inférieur à 15, soumettez les animaux à un test de reprise après un intervalle supplémentaire de 30 minutes au cours duquel une secousse électrique aux pattes ou une fausse secousse électrique aux pattes est administrée. Commencez 10 minutes après la deuxième séance d'extinction de 60 minutes, exposez les animaux à 20 minutes de secousses électriques intermittentes aux pattes, à un stress ou à une fausse secousse électrique aux pattes dans la chambre opérante. Administrez la secousse électrique aux pattes pendant une période où le levier actif est rétracté et où les lumières de la cabine et les lumières stimuli sont éteintes.Immédiatement après la fin de la session de choc aux pattes, étendez le levier actif et permettez au rat d'appuyer sur le levier dans des conditions d'extinction. Cette période est définie comme la session de test de rechute et dure généralement de une à trois heures. À la fin de la session de test, retirez le rat de la chambre et remettez-le dans sa cage d'origine.Nous allons maintenant présenter quelques résultats représentatifs. On observe ici une courbe typique d'entraînement à l'auto-administration de cocaïne, incluant le nombre total d'infusions ainsi que le nombre total d'appuis sur le levier actif et inactif. Les rats acquièrent généralement l'auto-administration de cocaïne en une à trois séances, et une fois ce comportement établi, maintiennent un taux stable d'absorption de drogue au cours des séances suivantes, le jour un de l'extinction.Lorsque les réponses ne sont pas renforcées pour la première fois, le nombre total de réponses sur le levier actif est initialement très élevé, mais diminue progressivement au cours des quatre séances d'extinction des jours deux et trois. Une certaine récupération des réponses peut être observée ; toutefois, les réponses sont généralement moins nombreuses qu'au début de la journée d'extinction précédente, et l'extinction progresse généralement plus rapidement au cours des quatre séances de cette journée. Réponses non renforcées sur le levier actif.Après 20 minutes d'exposition à des chocs plantaires intermittents, le stress induit une augmentation de la réponse sur le levier précédemment actif par rapport au levier inactif. Le choc plantaire induit également une augmentation de la réponse par rapport à celle observée. Dans des conditions où un faux choc plantaire est administré, une fois les procédures maîtrisées, celles-ci peuvent être réalisées en environ six semaines.D'après notre expérience, la réussite est optimisée lorsque la procédure est effectuée de manière systématique et par des mains bien formées. Les procédures que nous avons décrites ici peuvent être facilement adaptées pour intégrer diverses manipulations pharmacologiques ou neurochimiques ciblant des substrats neuronaux spécifiques. Grâce à l'ajout de telles manipulations, la procédure d'induction et d'évaluation par choc plantaire peut constituer un outil puissant pour caractériser la neurobiologie de l'extinction de la prise de drogue et de la rechute dans la recherche de drogue induite par le stress.

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JoVE Journal

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Opérant de médicaments auto-administration et de préférence de place conditionnée (RPC) des procédures sont expansive utilisé en recherche pour le modèle diverses composantes de renforcement de drogue, la consommation et la dépendance chez l'homme. Dans ce rapport, nous avons combiné des méthodes traditionnelles de RPC et de l'auto-administration que d'une nouvelle approche pour étudier le renforcement de drogue et la toxicomanie chez les rats.

Appareil et méthode pour Novel Drug Renforcement

Répondant aux signaux alimentaires ou de médicaments augmente jumelé au cours d'une période d'abstinence et cela peut rapporter à une susceptibilité accrue aux comportements rechute. Ici, nous en détail une procédure d'évaluation de cette «soif d'incubation de" chez les rats qui se sont auto-administrés saccharose.

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Source : Rich, M. T., et al. Utilisation de l’optogénétique pour inverser la neuroplasticité et inhiber la recherche de cocaïne chez les rats. J. Vis. Exp. (2021)Cette vidéo démontre l’utilisation de l’optogénétique pour induire une dépression à long terme (DLT) au niveau des synapses du noyau géniculé médial à l’amygdale latérale (MGN-LA), affaiblissant le comportement de recherche de narcotiques induit par des signaux dans un modèle de rat. Le rat, implanté chirurgicalement avec des fibres...

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Cet article décrit comment micro-injection de vecteurs viraux dans le cerveau de la souris, puis tester dans un endroit paradigme de préférence conditionné qui comprend une phase d'acquisition, l'extinction et la réintégration.

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Une procédure d&#39;étudier l&#39;effet de la restriction alimentaire prolongée sur l&#39;héroïne cherche à rats abstinents

Ce protocole est destiné à permettre aux chercheurs de mener des expériences conçues pour tester ces aspects de la dépendance en utilisant les tests de préférence de lieu conditionné et de sensibilisation comportementale locomotrice.

Évaluation de la sensibilisation comportementale induite par la cocaïne et de préférence de place conditionnée chez la souris

Réactivité de CUE est conceptualisée comme la sensibilité aux signaux liés à des expériences de drogues qui contribuent à la soif et de rechutent chez l’homme elle s’abstenait. Réactivité de CUE est modélisée chez le rat par mesure attentionnelle orientation vers des indices associés aux drogues qui se traduit par le comportement d’approche appétence lors d’un test de réactivité de repère après une administration autonome et contraint à l’abstinence.

Un protocole permettant de mesurer la réactivité de Cue dans un modèle de Rat de cocaïne trouble

Ce protocole décrit la préférence de Place conditionnée (RPC) comme un modèle de rechute. Cette procédure permet de mesurer des rechutes chez les animaux de laboratoire, compte tenu de l’impact des signaux environnementaux associés aux drogues comme la soif et la rechute chez les toxicomanes abstentionnistes est actuellement la mise au point des programmes de traitement de toxicomanie.

Rétablissement de la recherche de drogue chez les souris en utilisant le paradigme de préférence de Place conditionnée

Les méthodes décrites ici décrivent une procédure utilisée pour inverser optogénétiquement la plasticité induite par la cocaïne dans un circuit comportementalement pertinent chez le rat. La stimulation optique soutenue à basse fréquence des synapses thalamo-amygdales induit une dépression à long terme (LTD). La DLT optogénétique in vivo induite chez des rats ayant consommé de la cocaïne a entraîné une atténuation subséquente de la recherche de drogue motivée par des signaux.

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Une procédure qui démontre une forte rechute aiguë induite par la privation alimentaire à l’héroïne à la recherche d’abstinence imposée par la punition est décrite. Un modèle d’abstinence imposé à la punition a été mis en œuvre avec succès en utilisant le calendrier de recherche et de prise pour l’auto-administration d’héroïne. Des tests de recherche d’héroïne sont ensuite effectués après 24 heures de stress lié à la privation alimentaire.

Une procédure pour étudier la rechute de l’héroïne induite par le stress après l’abstinence imposée par la punition

Découvrez une méthode pour étudier la recherche de cocaïne induite par le stress chez le rat de laboratoire. Cette procédure optimise les paramètres de choc électrique pour explorer les mécanismes neurobiologiques de la rechute.

Une procédure pour l'étude de l'Rétablissement choc électrique induite par la cocaïne d'Cherchant des rats de laboratoire

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