Expression génique par électroporation de cellule unique dans des cultures de tranches d’hippocampe de souris

Commencez par une tranche d’hippocampe d’un cerveau de souris cultivée sur un insert de culture dans un plat.

Découpez l’insert contenant la tranche et fixez-le dans une chambre d’électroporation au microscope.

Perfuser la chambre avec un tampon contenant un bloqueur des canaux sodiques voltage-dépendant pour inhiber la surexcitation et prévenir la toxicité cellulaire.

Placez une pipette contenant des plasmides avec le gène d’intérêt près de la tranche.

Maintenez une pression positive pour éviter l’obstruction de la pipette à l’approche d’un neurone de l’hippocampe cible jusqu’à ce qu’une fossette membranaire se forme.

Passez en pression négative pour créer une étanchéité avec la membrane.

Alternez entre la pression positive et négative pour minimiser les dommages cellulaires.

Appliquez une impulsion d’électroporation pour perméabiliser transitoirement la membrane, facilitant ainsi l’entrée du plasmide.

Retirez la pipette tout en maintenant une pression positive, et répétez l’électroporation pour les neurones cibles voisins.

Transférez la tranche électroporée dans un insert frais et incubez-la pour permettre l’expression du gène d’intérêt.

Pour préparer les cultures en tranches pour l’électr