Transplantation stéréotaxique d’une suspension de cellules neurales chez une souris atteinte d’un traumatisme crânien

Commencez avec une seringue préremplie attachée à un pousse-seringue stéréotaxique.

La seringue contient une suspension de cellules neurales dérivées de cellules souches pluripotentes induites par l’homme.

Placez l’aiguille au-dessus du cortex cérébral d’une souris souffrant d’un traumatisme crânien.

Abaissez la seringue pour toucher la dure-mère avec la pointe de l’aiguille, ajustez les coordonnées pour cibler le site de la blessure et rétractez-la légèrement. Maintenant,

créez une petite incision, établissant un point d’entrée pour l’aiguille.

Ensuite, abaissez le piston pour permettre l’écoulement de la suspension de la cellule.

Abaissez l’aiguille et pénétrez dans le cerveau pour atteindre la frontière matière grise-matière blanche du cortex profond.

Enfin, infusez lentement la suspension cellulaire tout en irriguant le site chirurgical avec une solution saline pour maintenir l’hydratation.

Une fois l’opération terminée, retirez l’aiguille, irriguez à nouveau et fermez l’incision.

Au fil du temps, les cellules transplantées mûrissent, restaurent les circuits neuronaux et réparent les lésions cérébrales.

Environ 24 heures après la craniectomie, replacez la souris dans le cadre stéréotaxique.

Couvrez la souris avec le champ chirurgical fenêtré. Lavez le site d’incision avec une solution saline stérile pour nettoyer le site et desserrer les sutures. Utilisez un coton-tige imbibé à 70 % d’éthanol pour stériliser doucement le site d’incision et utilisez une pince à épiler fine et des ciseaux ophtalmiques pour retirer les sutures.

Ensuite, irriguez le site de chirurgie et de craniectomie avec une solution saline stérile abondante. Dans un capot de biosécurité pour culture cellulaire, faites tourner ou tapotez doucement le tube de cellules pour assurer une suspension cellulaire homogène. À l’aide d’une micropipette, chargez environ 7,5 microlitres de cellules dans une seringue Hamilton par l’extrémité du piston.

En tenant la seringue à un angle de 120 degrés avec l’extrémité du piston vers le bas, insérez le piston en prenant soin de ne pas introduire de bulle d’air entre la suspension et l’embout du piston. Fixez l’ensemble de joint à l’aiguille de la pipette et fixez l’aiguille à la seringue. Poussez le piston pour déplacer la suspension cellulaire dans l’aiguille de la pipette et fixez la seringue au pousse-seringue stéréotaxique.

Avancez le piston pour vous assurer que l’ensemble de la pompe à seringue fonctionne correctement et déplacez l’aiguille dans les coordonnées pour l’injection. Alignez la pointe de l’aiguille sur bregma et réglez les coordonnées x et y à zéro. Déplacez la pointe de l’aiguille sur la craniectomie à deux millimètres sur le côté et moins un millimètre vers l’arrière du bregma et touchez la pointe de l’aiguille à la surface de la dure-mère.

Soulevez légèrement l’aiguille puis faites une petite incision dans la dure-mère à l’endroit où l’aiguille est entrée en contact. Réglez la coordonnée stéréotaxique sur z égale zéro et poussez le piston pour confirmer que la suspension cellulaire s’écoule correctement avant d’introduire l’aiguille dans le cerveau. Introduisez l’aiguille dans le cerveau à une profondeur de z égale moins 1,4 millimètre pour placer le greffon à la frontière matière grise/matière blanche du cortex profond.

Démarrez le pousse-seringue pour perfuser la suspension cellulaire sur une période de 15 minutes. Utilisez un microscope à longue distance pour surveiller l’écoulement de la suspension cellulaire, en irriguant le site de chirurgie avec une solution saline stérile pendant l’injection afin de maintenir l’hydratation des tissus. Lorsque toutes les cellules ont été libérées, retirez lentement l’aiguille de transplantation et irriguez le site de la chirurgie avec une solution saline supplémentaire avant de fermer l’incision avec de nouvelles sutures.

Ensuite, prodiguez les soins postopératoires comme démontré.