Préparation d’un inoculum bactérien unicellulaire
Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 2:30 min • September 26th, 2025
Prenez une culture métaboliquement active de Mycobacterium marinum. Cela garantit une viabilité bactérienne élevée et un état physiologique optimal.
Centrifugez la culture pour granuler les bactéries.
Jetez l’excès de surnageant et remettez la pastille en suspension dans un milieu frais contenant un agent dispersant.
Transférez la suspension dans des tubes de microcentrifugation et sonifiez dans des conditions contrôlées.
La sonication perturbe les agrégats bactériens et disperse les cellules, ce qui permet d’obtenir une suspension unicellulaire viable.
Prélevez la suspension soniquée dans une seringue et passez-la à travers un filtre à membrane pour éliminer tous les amas restants, assurant ainsi une population unicellulaire uniforme.
À l’aide d’un spectrophotomètre, mesurez la densité optique de la suspension bactérienne.
Diluer la suspension avec un milieu frais contenant un cryoprotecteur pour atteindre la concentration bactérienne souhaitée tout en préservant la viabilité cellulaire.
Aliquote la suspension monocellulaire finale et stockez-la à des températures ultra-basses. Le cryoprotecteur aide à maintenir la viabilité bactérienne pendant le stockage à long terme.
Après l’inoculation
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