Évaluation de la mortalité induite par des bactéries pathogènes chez les larves de C. elegans

Commencer avec une bactérie pathogène cultivée sur de la gélose.

Grattez les bactéries, suspendez-les dans un tampon et ajoutez un milieu pour maintenir la viabilité bactérienne.

Versez la suspension dans une microplaque.

Ensuite, prenez des souches distinctes de larves de C. elegans , soit avec une sensibilité accrue aux agents pathogènes, soit avec une résistance accrue, et laissez-les s’installer.

Retirez le surnageant, remettez les larves en suspension dans un milieu frais et transférez-les dans la microplaque contenant les bactéries.

Scellez la microplaque avec une membrane perméable aux gaz et incuber. Les bactéries sécrètent des métabolites toxiques qui activent les voies de stress et conduisent à la mort cellulaire.

Lavez les puits pour éliminer les bactéries, ajoutez un colorant fluorescent imperméable aux cellules et incuber.

Le colorant ne pénètre que dans les cellules larvaires mortes dont les membranes sont perturbées et se lie à leurs acides nucléiques.

Laver pour enlever l’excès de colorant et imager les vers colorés par fluorescence afin d’évaluer la mortalité des souches sensibles et résistantes.

Pour effectuer un test de destruction liquide, utilisez un grattoir cellulaire