Quantification de la polarité et de la dynamique d’un composant du système de sécrétion chez Legionella pneumophila

Commençons par Legionella pneumophila, un agent pathogène respiratoire exprimant un composant du système de sécrétion marqué par fluorescence nécessaire à l’infection de l’hôte.

Pour quantifier la polarité de ces composants, acquérez des images de fluorescence et ajustez le contraste pour distinguer les cellules individuelles.

Placez des régions rectangulaires du pôle cellulaire vers le cytoplasme pour mesurer les gradients de fluorescence.

Masquez ces régions pour extraire l’intensité moyenne et la variance, puis calculez les scores de polarité sous forme de rapports de variance/intensité moyenne.

Des scores de polarité élevés indiquent un recrutement ciblé des composants aux pôles bactériens.

Pour les mesures dynamiques, capturez deux images en accéléré et ajustez le contraste pour visualiser clairement les cellules.

Placez des régions carrées au centre de la cellule pour mesurer la fluorescence cytosolique.

Masquez des cellules entières pour corriger le photoblanchiment et définissez des régions d’arrière-plan entre les cellules pour la soustraction du bruit.

Exportez toutes les intensités et calculez l’évolution de la fluorescence au fil du temps.

L’augmentation de l’intensité indique l