Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
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Commencez par des cultures nocturnes de souches de Vibrio cholérae , des bactéries pathogènes cultivées dans un milieu riche en nutriments.
Centrifugez les cultures pour pelleter les cellules. Retirez le surnageant contenant des composés extracellulaires et remettez le pellet en suspension dans du sérum physiologique.
Ensuite, trempez un inoculateur stérile à fil dans la culture et plantez-le verticalement dans l’agar de motilité pour déposer les bactéries sous la surface sans propagation latérale.
Stériliser l’inoculateur à la flamme entre chaque souche afin d’éviter la contamination croisée.
Incubez la plaque pour permettre aux bactéries de migrer à travers l’agar de motilité.
L’agar contient du chlorure de triphényltérazolium, ou TTC, un indicateur redox qui devient rouge lors de la réduction par les cellules métaboliquement actives.
Les souches mobiles réduisent la TTC sur une large zone, formant une grande zone rouge, tandis que les souches non mobiles présentent des taches confinées à la ligne de stache.
La taille et la dispersion des zones rouges indiquent la motilité de chaque souche.
Lavez la granule de cellules obtenue à partir de culture nocturne. Inoculez les plaques d’agar de motilité en insérant une piqûre inoculante dans la culture liquide lavée et piquez verticalement dans le milieu.
Assurez-vous que le poignard inoculateur ne se plie pas lors de la piqûre de l’agar. Entre chaque inoculation, stériliser le fil de fer à l’aide d’un bec Bunsen. Écouvez les plaques face au couvercle vers le haut pendant 14 à 24 heures à 37 degrés Celsius.
Après 14 heures, surveillez de près les plaques de motilité pour éviter la prolifération excessive des cultures.