Isolement des bactéries à partir du milieu intestinal du moustique

Commencez par une lame contenant un moustique adulte anesthésié dans une goutte de solution physiologique ou PBS tamponnée au phosphate.

Au microscope disséqueur, retirez les pattes, les ailes et la tête du moustique.

Coupez la pointe de l’abdomen pour éviter d’endommager le tube digestif.

Sécurisez le thorax et l’extrémité de l’abdomen, puis retirez doucement le tube digestif pour l’extraire.

Le tube digestif extrait comprend le milieu de l’intestin, responsable de la digestion et abrite diverses bactéries intestinales influençant la physiologie des moustiques.

Sous un grossissement plus élevé, retirez soigneusement les structures environnantes pour isoler le milieu de l’intestin.

Transférez le tube isolé de l’intestin moyen dans un nouveau tube contenant du PBS.

Homogénéisez le milieu de l’intestin pour libérer les bactéries dans le PBS.

Étalez l’homogénate dilué sur une plaque d’agar nutritif.

Incubez la plaque pour permettre la croissance des colonies bactériennes, représentant la flore microbienne du milieu intestinal du moustique.

Disséquez le moustique séparément sur une lame en verre stérile contenant une goutte de PBS. Retirez soigneusement les pattes, les ailes et la tête du moustique à l’aide d’une pince.

Pincez la poitrine du moustique et la dernière section de l’abdomen avec une pince et écartez pour isoler le tube digestif.

Utilisez des pinces pour retirer la culture et la trompe de Malpighi du tube digestif. La culture est positionnée à l’avant du milieu de l’intestin et se bombe après avoir bu de l’eau sucrée. Les trompes de Malpighi sont un groupe de tubes excréteurs fins situés à la jonction de l’intestin moyen et de l’intestin postérieur.

Placez le tube central disséqué dans un tube EP avec un tampon PBS stérile de 200 microlitres et broyez-le avec le pilon stérile sur un établi très propre. Diluer en série l’homogénéat en trois dilutions de 10 fois à 50 microlitres de chaque dilution vers la plaque agar LB, puis étendre la plaque.

Incubez la plaque à 37 degrés pendant un à deux jours jusqu’à ce que des colonies individuelles soient visibles.