Name: Haute profilage de microARN Débit: Multiplex Optimisé qRT-PCR à léchelle nanolitres sur lIFC de Fluidigm ArrayTM dynamique (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-08-03T12:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 27 s
Description: Découvrez le profilage haut débit des microARN par qRT-PCR multiplex optimisée sur plateforme microfluidique. Cette méthode améliore la précision et la reproductibilité avec des quantités minimales d'ARN.

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Nous tenons à remercier le laboratoire Blelloch pour commenter le texte. Ce travail a été soutenu par des fonds à partir de RB NIH (K08 NS48118 et R01 NS057221), du California Institute of Regenerative Medicine (CIRM) (Subvention de démarrage RS1-00161, New Faculty Award RN2-00906) et le Pew Charitable Trust et à la bande FM de la Wissenschaftlich Urologische Gesellschaft eV.

<ol><li>Mitchell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circulating+microRNAs+as+stable+blood-based+markers+for+cancer+detection%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Circulating microRNAs as stable blood-based markers for cancer detection.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 105, 10513-10518 (2008).</li>
<li>Tang, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((220-plex+microRNA+expression+profile+of+a+single+cell%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">220-plex microRNA expression profile of a single cell.</a> Nat Protoc. 1, 1154-1159 (2006).</li>
<li>Gertsenstein, M., Vintersten, K., Behringer, R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGertsenstein%2C+M+%22Manipulating+the+Mouse+Embryo%3A+A+Laboratory+Manual%22">Manipulating the Mouse Embryo: A Laboratory Manual</a>. 3, Cold Spring Harbor Laboratory Press. 644-645 (2003).</li>
<li>Suh, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MicroRNA+function+is+globally+suppressed+in+mouse+oocytes+and+early+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">MicroRNA function is globally suppressed in mouse oocytes and early embryos.</a> Curr Biol. 20, 271-277 (2010).</li>
<li>Babiarz, J. E., Ruby, J. G., Wang, Y., Bartel, D. P., Blelloch, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+ES+cells+express+endogenous+shRNAs%2C+siRNAs%2C+and+other+Microprocessor-independent%2C+Dicer-dependent+small+RNAs%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">Mouse ES cells express endogenous shRNAs, siRNAs, and other Microprocessor-independent, Dicer-dependent small RNAs.</a> Genes Dev. 22, 2773-2785 (2008).</li>
<li>Babiarz, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+RNAs%3A+their+biogenesis%2C+regulation+and+function+in+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22StemBook%22%5BJournal%5D)">Small RNAs: their biogenesis, regulation and function in embryonic stem cells.</a> StemBook. , (2009).</li>
<li>Friedman, R. C., Farh, K. K., Burge, C. B., Bartel, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Most+mammalian+mRNAs+are+conserved+targets+of+microRNAs%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Res%22%5BJournal%5D)">Most mammalian mRNAs are conserved targets of microRNAs.</a> Genome Res. 19, 92-105 (2008).</li>
<li>Wang, Y., Medvid, R., Melton, C., Jaenisch, R., Blelloch, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DGCR8+is+essential+for+microRNA+biogenesis+and+silencing+of+embryonic+stem+cell+self-renewal%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">DGCR8 is essential for microRNA biogenesis and silencing of embryonic stem cell self-renewal.</a> Nat Genet. 39, 380-385 (2007).</li>
<li>Kanellopoulou, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dicer-deficient+mouse+embryonic+stem+cells+are+defective+in+differentiation+and+centromeric+silencing%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">Dicer-deficient mouse embryonic stem cells are defective in differentiation and centromeric silencing.</a> Genes Dev. 19, 489-501 (2005).</li>
<li>Thomson, J. M., Parker, J., Perou, C. M., Hammond, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+custom+microarray+platform+for+analysis+of+microRNA+gene+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">A custom microarray platform for analysis of microRNA gene expression.</a> Nat Methods. 1, 47-53 (2004).</li>
<li>Moltzahn, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microfluidic+based+multiplex+qRT-PCR+identifies+diagnostic+and+prognostic+microRNA+signatures+in+sera+of+prostate+cancer+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Microfluidic based multiplex qRT-PCR identifies diagnostic and prognostic microRNA signatures in sera of prostate cancer patients.</a> Cancer Res. 71, 550-560 (2011).</li>
<li>Mestdagh, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+and+universal+method+for+microRNA+RT-qPCR+data+normalization%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Biol%22%5BJournal%5D)">A novel and universal method for microRNA RT-qPCR data normalization.</a> Genome Biol. 10, R64-R64 (2009).</li>
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Alan Mir est un employé de Fluidigm Corporation. Sinon, nous n&#39;avons pas d&#39;intérêts financiers à divulguer.

miARN sont courtes (18-24 nucléotides), non-codante miARN ARN qui régulent l&#39;expression génique post-transcriptionnelle par les deux ARN messagers déstabilisant (ARNm) et en inhibant leur traduction. 6 Le fait qu&#39;au moins un tiers des gènes humains contiennent conservé binding-sites dans leur 3&#39;UTR et les interactions avec les miARN évident de gènes de pluripotence, la prolifération et l&#39;apoptose suggère une contribution essentielle dans les décisions du destin cellulaire, l&#39;homéostasie des tissus et des maladies comme le cancer. 6,7 conséquent précise des profils d&#39;expression de microARN sont des grands intérêt. Pour tester le multiplex publié qRT-PCR profilage miARN expression 2, nous avons utilisé des petits ARN MESC déficient comme témoins négatifs. DGCR8 - / - cellules sont déficientes de toutes les microARN canoniques, tandis que Dicer - / -. MicoRNAs cellules manquent tant canoniques et non canoncial 8,9 La comparaison des niveaux de type sauvage MES-à DGCR8 - / - cellules, nous avons découvert un manque de précision que plusieurs ont exprimé 10 microARN n&#39;ont pas été détectés dans les cellules de type sauvage 11. Certains ont même montré des niveaux d&#39;expression plus faible par rapport aux cellules KO (figure 3a). Nous avons supposé que le manque de précision pourrait être causé par l&#39;amorce massifs report de deux étapes consécutives de multiplex (RT-PCR et pré) avant singleplex RT-quantification. Toutefois, multiplex de pré-amplification est nécessaire de renforcer la force du signal, en particulier lorsque la concentration de départ de l&#39;ARN est limité. En purifiant l&#39;écart des produits pré-PCR à partir des amorces par une sélection de taille sur des gels de polyacrylamide natif (figure 2), nous avons pu démontrer une amélioration substantielle de la précision en détectant plus de microARN et une perte de faux signaux positifs dans les deux Dgcr8 - / - et Dicer - / - milieux (figures 3a et 3b) En outre, le modifiés qRT PCR approche a permis pour la catégorisation appropriée des rares Dgcr8 indépendante / dépendante Dicer petits ARN (figure 3B) 11. Par conséquent, une étape supplémentaire pour purifier amorces excessive loin de pré-PCR produit est clairement avantageux, surtout quand en utilisant l&#39;amorce multiplexe de grands ensembles par échantillon. Le nombre optimal de pré-amplification des cycles est déterminée par les concentrations d&#39;ARN d&#39;entrée. Le solde de ne pas sous-ou overamplify devrait être guidé par des indications sur l&#39;expérience spécifique. Avec plus d&#39;un millier de microARN connue, l&#39;utilisation de la norme 384 puits ne peut être optimale pour le profilage de microARN longue, surtout quand on compare plusieurs échantillons. L&#39;IFC de Fluidigm tableaux dynamiques permet, avec une diminution significative des étapes de pipetage et de la chimie nécessaire, des tests jusqu&#39;à 96 échantillons individuels contre 96 microARN différents en une seule expérience (9216 réactions) à l&#39;échelle du nanolitre (6,7 nL). Pour chaque exécution du logiciel d&#39;analyse fournit les courbes d&#39;amplification, des cartes thermiques de couleur et les valeurs seuils de cycle (Ct). Le simultanées à grande échelle de profilage réduit les variances expérimentales et permet pour la normalisation expression de valeur moyenne, ce qui surpasse les autres stratégies de normalisation qui utilisent des contrôles petit ARN. 12 Comparé à 384 plates-formes disponibles dans le commerce bien avec des sondes TaqMan pré-attribué, la combinaison d&#39;une plateforme de profilage à haut débit avec des ensembles d&#39;amorces sur-mesure offre une grande flexibilité expérimentale. Le multiplex optimisé qRT PCR démarche en combinaison avec la plateforme Dynamic Array succès nous a permis de cribler simultanément 48 sérums de patients cancer de la prostate pour les altérations des niveaux de 384 miARN (Figure 4) et pour normaliser les données, sans pic de commandes (ie synthétiques microARN). 11 Malgré la hausse des étapes de la préparation des échantillons à des résultats de profilage, l&#39;approche décrite est un temps et rentable méthode à haut débit fixe au profil large échantillon pour des niveaux d&#39;expression des miRNA, même avec du matériel de départ limité.

haute profilage de microarn débit: multiplex optimisé qrt-pcr à l&#39;échelle nanolitres sur l&#39;ifc de fluidigm arraytm dynamique

High Throughput MicroRNA Profiling: Optimized Multiplex qRT-PCR at Nanoliter Scale on the Fluidigm Dynamic ArrayTM IFCs

La large participation des miARN dans les processus critiques qui sous-tendent le développement, les tissus homéostasie et la maladie a conduit à un intérêt surgi chez les communautés scientifiques et pharmaceutiques. Pour étudier les miRNAs, il est essentiel que la quantification des niveaux microARN est précise et robuste. En comparant type sauvage aux petits ARN des cellules déficientes souches embryonnaires de souris (CESM), nous a révélé un manque de précision et de robustesse dans les précédentes publiées multiplexe qRT-PCR. Ici, nous décrivons une méthode optimisée, y compris la purification de suite amorces excessive à partir des étapes précédentes avant la détection multiplex singleplex temps réel, ce qui augmente considérablement la précision et la robustesse de la technique. Par ailleurs, nous expliquons comment effectuer la technique sur une puce microfluidique à des volumes nanolitre réduit considérablement les coûts de réactif et le temps le permet effective des profils à haut débit l&#39;expression de miRNA.

Nous décrivons ici une inversion optimisé multiplexe transcriptase PCR quantitative (qRT-PCR) en combinaison avec le protocole d&#39;une plateforme microfluidique comme un coût et le temps moyen efficace de dépistage à haut débit pour microARN (miARN) les niveaux d&#39;expression, surtout quand on travaille avec des quantités limitées de l&#39;échantillon.

Haute profilage de microARN Débit: Multiplex Optimisé qRT-PCR à l&#39;échelle nanolitres sur l&#39;IFC de Fluidigm ArrayTM dynamique

L'implication étendue des miARN dans des processus critiques sous-tendant le développement, l'homéostasie tissulaire et la maladie a suscité un intérêt croissant parmi les ...

L'objectif général de cette procédure est de profiler l'expression des microARN de manière efficace, peu coûteuse et avec une quantité minimale de matériel initial, en combinant la R-T-P-C-R quantitative multiplex avec une plateforme microfluidique. Cette procédure commence par la concentration de l'ARN extrait, suivie d'une transcription inverse multiplex et d'une préamplification multiplex. L'étape suivante consiste à purifier l'échantillon en éliminant les amorces en excès.Enfin, l'expression des microARN est profilée en mode simplexe à l'aide d'une plateforme microfluidique. Le résultat fournit des niveaux d'expression des microARN précis et hautement reproductibles entre les échantillons d'intérêt. Le principal avantage de cette technique par rapport aux méthodes existantes réside dans l'étape de purification supplémentaire effectuée après l'amplification pré-EMP, qui améliore la précision et la reproductibilité de la méthode de PCR-Q-R-T-P en mode multiplex.Commencez par un ARN extrait du sérum. En utilisant un kit de purification de l'ARN ou une méthode d'extraction de l'ARN basée sur le phénol-chloroforme à partir de tissus homogénéisés comme le triol, toutes les extractions doivent être suivies d'une étape de lavage, et tous les échantillons sont stockés à moins 80 degrés Celsius. Concentrez la solution d'ARN.Si l'on part d'une quantité limitée d'échantillon, comme par exemple à partir de sérum, insérez un réservoir d'échantillon MicroCon dans un flacon, puis pipetez la solution d'ARN dans le réservoir en prenant bien soin de ne pas toucher la membrane avec la pointe de la pipette. Placez ensuite le flacon et le filtre dans la centrifugeuse avec la bande de repérage orientée vers le rotor, puis effectuez la centrifugation pendant environ trois heures. Après trois heures, l'ARN sera entièrement concentré sur la membrane afin d'éluer l'ARN.Ajoutez une quantité souhaitée d'eau libre d'ARN à la membrane, retournez le réservoir et placez-le dans un nouveau tube. Ensuite, effectuez une centrifugation pendant trois minutes à quatre degrés Celsius avec un maximum de 3000 ×g. Conservez l'ARN concentré à moins 80 degrés Celsius jusqu'à utilisation. Après avoir réalisé une réaction de RT sur l'ARN en utilisant des amorces inverses en boucle palindromique xpl, suivie de 12 à 18 cycles de PCR, les microARN sont représentés par des brins ADNc.On appelle cela le produit pré-PCR. En référence au QPCR à venir. Le produit pré-PCR doit être purifié sur un gel de polyacrylamide à 10 %, en parallèle d'une échelle d'ADN de 10 paires de bases. Charger chaque puits avec 5,5 microlitres de colorant orange G 6x combiné à 27,5 microlitres de produit pré-PCR.Faites migrer le gel à 150 volts pendant 55 à 60 minutes. Le bleu de phénol Romo migre sur ce gel dans la région de 20 paires de bases. Après la migration du gel, révélez-le avec de l'or cyber pendant 25 minutes, à l'abri de la lumière et sur un agitateur, à partir du gel coloré.Prélevez la bande du produit pré-PCR située entre 60 et 80 paires de bases et transférez le morceau de gel dans des tubes étiquetés. Si la concentration du produit est faible, elle peut ne pas être visible, mais le produit sera néanmoins présent dans le gel. Écrasez ensuite la bande de gel par centrifugation tube dans tube et ajoutez 300 microlitres de tampon TEN.Incuber le mélange tampon-gel pendant quatre heures à 37 degrés Celsius avec agitation. Après quatre heures, transférer le liquide dans un nouveau tube et ajouter 300 microlitres supplémentaires de tampon TEN. Incuber ce mélange toute la nuit à quatre degrés Celsius avec agitation.Le lendemain, transférez à nouveau le contenu du tube et procédez à une précipitation à l'éthanol du produit pré-PCR. Lorsqu'une puce est sortie de son emballage, elle doit être amorcée dans les 24 heures suivantes, puis chargée dans les 60 minutes suivant l'amorçage. Commencez l'amorçage du réseau en injectant 150 microlitres de fluide de contrôle dans chacun des accumulateurs de la puce.Veillez à ne renverser aucun liquide sur la puce ou les entrées, sinon la puce deviendra inutilisable. Ensuite, placez la puce dans le circuit fluidique intégré ou le contrôleur IFC et exécutez le script d'amorçage du contrôleur. Dès que le programme démarre, commencez à préparer les échantillons.Commencez par préparer le mélange d'échantillons pres. Mélangez du tack man, du mélange maître universel et des réactifs de chargement. Ensuite, en utilisant le format de chargement en plaque de 96 puits, combinez 2,25 microlitres de chaque échantillon avec 2,75 microlitres du mélange d'échantillons pres pour recueillir le liquide chargé. Vortexez brièvement et centrifugez rapidement la plaque à 4 degrés Celsius.La plaque d'échantillons est désormais prête. Utilisez maintenant une nouvelle plaque de 96 puits pour préparer des concentrations 13 x du mélange d'essai. Cela se fait en mélangeant, par puits, un amorceur universel, un amorceur direct et une sonde TaqMan spécifique au gène.Les concentrations en X sont de un micromolaire pour l'amorce universelle et l'amorce sens, et de 0,2 micromolaire pour la sonde TaqMan. Ajouter ensuite suffisamment de Tween pour obtenir une concentration finale de 0,25 % de Tween dans un volume final par puits de cinq microlitres. Mélanger soigneusement en évitant les bulles et centrifuger brièvement la plaque pour rassembler le liquide.Il s'agit de la plaque de dosage. Commencez le 96.96 Q-R-T-P-C-R en chargeant la puce. Chargez d'abord les échantillons, puis les dosages, avec un volume final de cinq microlitres par entrée dans le IFC.Deuxièmement, exécutez le script de mélange de chargement pour introduire les échantillons et les tests dans la puce. Une fois le script terminé, retirez délicatement le film protecteur de la puce chargée et éliminez toute particule de poussière ou débris présents sur la surface de la puce à l’aide d’un ruban adhésif. Configurez maintenant le programme d’amplification du système biologique.Chargez la puce dans le système et exécutez le programme. Les résultats peuvent être analysés à l'aide du logiciel fluid dime afin d'obtenir des courbes d'amplification, des cartes thermiques de l'ensemble de la puce et des valeurs CT pour chaque puits, en utilisant des produits pré-PCR purifiés par séparation selon la taille sur des gels natifs de polyacrylamide, l'allèle sauvage DG CR huit et le mutant nul d'ER.L'ARN a été préparé par rapport aux protocoles précédents. Un plus grand nombre de microARN et une réduction des signaux faux positifs sont observés dans les deux contextes DGCR huit nul et ER nul grâce à l'étape de purification. De plus, l'approche modifiée de QR TPCR R permet la catégorisation correcte des rares petits ARN indépendants de D gcr huit et dépendants de Dicer.Ici, 48 céra provenant de patients et de témoins ont été analysés afin de détecter des modifications d'expression de 384 microARN différents. Les données ont été normalisées pour chaque échantillon en soustrayant la médiane correspondante, sans utilisation de témoin d'ajout dans les contrôles. Après avoir visionné cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la manière dont la Q-R-T-P-C-R multiplexe sur une plateforme flu line peut être utilisée pour profiler simultanément des centaines de micronases à partir de nombreux échantillons, même lorsque la quantité initiale d'ARN est très faible.

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