Myo-mécanique Analyse des muscles squelettiques isolés

Pour évaluer la

Le but de cette procédure est de déterminer la force générée et la fatigue d’un muscle squelettique isolé afin de quantifier les effets d’une modification génétique ou d’une thérapie. Tout d’abord, le muscle extenseur des doigts le plus long est disséqué à partir du membre postérieur de la souris. Ensuite, le muscle est monté dans une bande musculaire myo.

L’étape suivante consiste à déterminer la tension de stimulation et de prétension du muscle à laquelle la tension de contraction maximale est atteinte. La dernière étape consiste à déterminer la relation force-fréquence pour le muscle, ainsi que l’apparition et le degré de fatigue avec la stimulation basse fréquence à la stimulation tanique. En fin de compte, des résultats peuvent être obtenus qui montrent des changements mesurables dans mes propriétés mécaniques du muscle grâce à la myographie.

Le principal avantage de cette technique par rapport aux méthodes existantes telles que les tests d’effort est que la myographie permet une évaluation quantitative de la force et de la fonction musculaires. Nous avons adopté cette méthode pour la première fois lorsque nous avons réalisé que des mesures quantitatives pour évaluer la fonction musculaire sont nécessaires alors que de nouvelles thérapies basées sur la biologie cellulaire et la bio-ingénierie pour les maladies musculaires sont testées dans des modèles animaux précliniques. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine de la biologie musculaire et de la dystrophie musculaire, par exemple si des thérapies spécifiques ou des modifications génétiques modifient la fonction musculaire.

La démonstration visuelle de cette méthode est essentielle car les étapes nécessaires pour manipuler correctement le muscle sont difficiles à maîtriser. Généralement, les personnes novices dans cette méthode auront du mal car une dissection rapide et traumatique des muscles postérieurs nécessite de la pratique et des compétences acquises. La démonstration de la procédure aura lieu lorsque nous rencontrerons un chercheur scientifique et SAB un étudiant diplômé dans nos laboratoires.

Après l’euthanasie d’une souris, disposer la carcasse côté ventral vers le haut sur un plateau de dissection et épingler la patte sur le plateau sous un microscope de dissection. Ouvrez la peau et ouvrez soigneusement le fascia. Ensuite, pelez le muscle tibial antérieur de la cheville vers le haut pour exposer le muscle long extenseur des doigts ou le muscle EDL.

Utilisez des gouttes de solution de ringer lactate pour garder le muscle humide pendant la récolte. Ensuite, disséquez l’EDL en préservant autant de tendon que possible à chaque extrémité, et en faisant attention de ne pas toucher les fibres musculaires EDL elles-mêmes. Mettez le muscle EDL dans une boîte de Pétri contenant une solution de sonnerie lactée.

Attachez maintenant des sutures à chacun des tendons musculaires. Ces études utilisent un bain de tissus pour maintenir le muscle et un transducteur de force pour mesurer la tension musculaire. De plus, un stimulateur électrique à impulsions carrées et une plate-forme d’acquisition de données sont utilisés pour susciter, enregistrer et analyser mes réponses mécaniques.

L’étape suivante consiste à remplir le bain de myogreffe avec 6,5 millilitres de Krebs, d’où la solution satellite. Réchauffez le bain à 25 degrés Celsius et faites bouillonner la solution Krebs avec 95 % d’oxygène, 5 % de dioxyde de carbone après avoir bouillonné pendant 15 minutes. Utilisez des sutures sur les tendons pour transférer le muscle EDL dans le bain.

Fixez les tendons entre les pinces du myogreffon. Attention à ne pas serrer le muscle lui-même. Maintenez le bain de myogreffe à 25 degrés Celsius.

Pour commencer l’analyse de la tension, ajustez la longueur initiale du muscle de manière à ce qu’elle soit égale à la longueur du muscle inci. En utilisant une durée de stimulus de 0,5 milliseconde. Augmentez progressivement la tension pour déterminer le stimulus nécessaire pour obtenir une tension de contraction maximale.

Ensuite, réglez le stimulus 20 % plus haut pour obtenir un stimulus supra-maximal, qui est généralement d’environ 40 volts. L’étape suivante consiste à étirer progressivement le muscle jusqu’à ce qu’il n’y ait plus d’augmentation de la tension des contractions. Cette longueur est considérée comme la longueur musculaire optimale.

Laissez le muscle s’équilibrer pendant trois minutes, puis maintenez le muscle à sa longueur optimale. Délivrez un stimulus carré supra-maximal et enregistrez la sortie et enregistrez la courbe de tension de contraction. Dans cette figure.

La tension maximale de contraction est appelée pt. Le temps de contraction est étiqueté ct. Le demi-temps de relaxation est étiqueté THS.

La barre représente une seconde après une période de repos de trois minutes. Mesurez la tension titanesque en appliquant une tension de stimuli super maximaux pendant 300 millisecondes à 150 hertz à la longueur optimale. Cette procédure génère une courbe de tension du tétanos.

La tension maximale du Titanic est étiquetée po. La demi-détente Titanic tension est étiquetée HRTT. La barre représente une seconde après une période de repos de trois minutes.

Commencez l’analyse de la fréquence de force en appliquant des trains de 300 millisecondes de stimuli super maximaux à trente soixante et cent, cent quarante et 160 hertz. Prévoyez trois minutes de repos entre chaque série de stimuli après une période de repos de trois minutes. Commencer l’analyse de fatigue en appliquant des trains de 60 hertz courts pendant 300 millisecondes toutes les trois secondes pendant 10 minutes par 10 minutes.

La force du Titanic devrait diminuer à un niveau de plateau d’environ 15 % de la valeur initiale. Après avoir terminé l’enregistrement de la force avec le muscle à la longueur optimale, mesurez le diamètre du muscle à l’aide de l’oculaire au microscope. Ensuite, retirez les sutures et pesez le muscle pour déterminer la masse musculaire.

La dernière étape consiste à peser la souris pour évaluer la masse corporelle. Ces mesures sont utilisées pour les calculs énumérés dans l’article ci-joint. Cette figure montre l’augmentation de la tension générée avec l’augmentation des fréquences de stimulus indiquées.

Voici la réponse du muscle à un train d’impulsions à 30 hertz. Cette figure montre la plus grande force sollicitée à un train d’impulsions de 140 hertz. Ce graphique montre la relation force-fréquence représentée en pourcentage de la force maximale en fonction de la fréquence de stimulation.

La forme de la courbe de fréquence de force est caractéristique de la force musculaire et peut être utilisée pour faire des comparaisons entre les muscles de différents animaux. Cette figure démontre la fatigue musculaire au cours de 10 minutes de stimulation à basse fréquence. Ces chiffres montrent la réponse du muscle au train de stimulus aux points de temps indiqués.

Ce graphique montre la fatigue musculaire à basse fréquence comme un pourcentage plus de la force maximale en fonction du temps. La forme de la courbe de fatigue à basse fréquence est caractéristique de la force musculaire et peut être utilisée pour faire des comparaisons entre les muscles de différents animaux. Une fois maîtrisée, cette technique peut être réalisée en 30 minutes Suite à cette procédure.

D’autres méthodes telles que l’immunohistochimie, le western blot et la PCR quantitative peuvent être effectuées afin de répondre à des questions supplémentaires telles que la question de savoir si des protéines myogéniques spécifiques et des marqueurs de cellules souches spécifiques sont exprimés dans le muscle traité lors de la tentative de cette procédure. Il est important de ne pas oublier d’avoir tout votre équipement prêt pour minimiser le temps entre la récolte musculaire et l’analyse. Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon de disséquer le muscle du membre postérieur, de monter le muscle dans une bande musculaire myo, comme celle que nous vous avons montrée de la technologie myo danoise et de mesurer les changements dans mes propriétés mécaniques.