Micro-dissection du cerveau de rat pour l'ARN ou de l'extraction de protéines à partir région spécifique du cerveau
30 août 2007
Micro-dissection du cerveau de rat dans différentes régions est extrêmement important pour l'étude de différentes maladies neurodégénératives. Cette vidéo montre des micro-dissection des quatre régions du cerveau majeurs comprennent bulbe olfactif, le cortex frontal, le striatum et l'hippocampe dans les tissus de cerveau de rat frais. Conseils utiles pour un retrait rapide des régions respectives afin d'éviter la dégradation de l'ARN et des protéines du tissu sont donnés.
Bonjour, je suis Quint du Département d'anatomie de l'Université de Hong Kong. Aujourd'hui, je vais présenter comment disséquer au microscope le cerveau rouge en quatre voies principales : le cortex préfrontal, le striatum et l'hippocampe. Voici une image schématique montrant comment nous disséquons le cerveau.
Il y a trois coupes. Le premier plan de coupe se situe au niveau de la jonction entre le bulbe olfactif et le cortex frontal. Le deuxième plan de coupe se situe au niveau du genou du corps calleux.
Le troisième plan de coupe se situe à l'extrémité antérieure des phoniques. Après trois coupes, il y aura quatre trajets cérébraux. À gauche se trouve un facteur.
À droite se trouve l'hippocampe. Le cortex frontal est situé entre la première et la deuxième coupe. La nucléase codante, qui fait partie du stratum, se trouve entre la deuxième et la troisième coupe sur l'hémisphère cérébral frais.
Il est très important de reconnaître d'abord le corps calleux et les voies optiques. Ensuite, nous pouvons facilement localiser les trois coupes. Le premier plan de coupe se situe au niveau de la connexion entre le bulbe olfactif et le cortex frontal.
Le deuxième plan de coupe se situe à une ion du corps calleux, et le troisième plan de coupe se trouve à l'extrémité antérieure des phoniques. Nous allons disséquer le cerveau et le microscope. Les outils de dissection sont conservés en code glace.
Après avoir rincé cette glace avec de l'eau DEPC, nous plaçons un cerveau sur la plaque métallique glacée et le coupons en deux hémisphères, séparant ou isolant la région située au-dessus du cortex frontal, que nous recueillons et stockons dans l'azote liquide. Ensuite, nous commençons à prélever le cortex frontal. Nous incisons autour de l'extrémité antérieure du corps calleux, coupons le cortex triquètre, puis le recueillons et le stockons dans l'azote liquide.
Ensuite, nous disséquons l'élément de paille. Effectuez une incision au niveau du plan antérieur, de la partie phonique et de la fibre antérieure du faisceau de réunion, séparez le noyau de revêtement, collectez-le et stockez-le dans de l'azote liquide. Enfin, nous allons disséquer l'hippocampe.
Tout d'abord, nous devons enlever le mésencéphale afin d'obtenir une bonne exposition de l'hippocampe. Séparer l'hippocampe recueilli et stocké dans de l'azote liquide. Différentes régions cérébrales sont associées à diverses maladies neurodégénératives. Par exemple, le striatum est associé à la maladie de Parkinson, tandis que le cortex frontal et l'hippocampe sont associés à la maladie d'Alzheimer.
La microdissection précise du cerveau nous permet de détecter les modifications de l'ARNm et des protéines dans la région.
Consultez la transcription complète et accédez à des milliers de vidéos scientifiques
Aperçu
Cette vidéo montre la microdissection du tissu cérébral de rat en quatre régions principales : le bulbe olfactif, le cortex frontal, le striatum et l'hippocampe. Elle fournit des conseils utiles pour retirer rapidement ces régions afin d'éviter la dégradation de l'ARN et des protéines.
Composantes clés de l'étude
Domaine scientifique
- Neurosciences
- Neuroanatomie
- Maladies neurodégénératives
Contexte
- La microdissection est essentielle pour l'étude des régions cérébrales.
- L'analyse des différentes maladies neurodégénératives exige des échantillons tissulaires précis.
- Le maintien de l'intégrité de l'ARN et des protéines est fondamental pour une recherche précise.
- Dans cette étude, du tissu cérébral frais de rat est utilisé pour la dissection.
Objectif de l'étude
- Démontrer des techniques efficaces de dissection de régions cérébrales.
- Fournir des informations sur le maintien de la qualité du tissu pendant la dissection.
- Faciliter la recherche sur les maladies neurodégénératives grâce à une collecte adéquate des échantillons.
Méthodes utilisées
- Microdissection du cerveau de rat en régions spécifiées.
- Utilisation d'images schématiques pour guider le processus de dissection.
- Mise en œuvre de plans de coupe spécifiques pour un prélèvement précis des régions.
- Conseils pour minimiser la dégradation de l'ARN et des protéines pendant la dissection.
Résultats principaux
- Disséction réussie du bulbe olfactif, du cortex frontal, du striatum et de l'hippocampe.
- Techniques démontrées permettant de préserver l'intégrité du tissu.
- Aides visuelles fournies pour améliorer la compréhension du processus de dissection.
- Mise en évidence de l'importance d'une extraction rapide afin d'éviter la dégradation.
Conclusions
- La microdissection est une technique précieuse pour la recherche en neurosciences.
- Des méthodes appropriées peuvent améliorer considérablement la qualité des échantillons de tissus.
- Ces techniques peuvent contribuer à l'étude des maladies neurodégénératives.
Questions fréquemment posées
Pertinence professionnelle dans l'industrie
La microdissection précise de régions cérébrales de rat permet une extraction fidèle de l'ARN et des protéines destinées à des analyses moléculaires en aval dans la recherche sur la neurodégénérescence. Cette capacité est essentielle pour la validation des cibles et la réduction des risques mécanistiques dans les phases précoces des pipelines de découverte axés sur des mécanismes pathologiques spécifiques à certaines régions. Un échantillonnage régional fiable soutient la continuité translationnelle et l'aide à la décision dans les portefeuilles de découverte de médicaments du SNC.
Applications stratégiques en recherche et développement en biopharmaceutique
Début de la découverte et validation de la cible
- Permet l'isolement de régions cérébrales pertinentes pour le profilage moléculaire.
- Prend en charge la validation fonctionnelle des cibles en reliant des modifications spécifiques à une région à la pathologie neurodégénérative.
- Facilite la réduction des risques mécanistiques en permettant des tests d'hypothèses précis dans des contextes anatomiques définis.
Développement de criblages et de tests
- Fournit des échantillons tissulaires de haute qualité pour le développement de tests moléculaires reproductibles.
- Garantit l'intégrité de l'ARN et des protéines, soutenant des mesures quantitatives dans les flux de travail en aval.
- Standardise la préparation des échantillons, améliorant la comparabilité des tests et la fiabilité du criblage.
Recherche translationnelle et préclinique
- Aligne les modèles précliniques avec les maladies humaines en ciblant des régions cérébrales homologues.
- Permet la découverte et la validation de biomarqueurs dans des tissus anatomiquement pertinents.
- Facilite un développement adapté au risque en fournissant des données moléculaires solides provenant de régions définies.
Intégration des pipelines et des flux de travail
Ce protocole de microdissection s'inscrit à l'interface entre la phase initiale de découverte et la recherche préclinique, permettant des analyses moléculaires spécifiques à une région donnée qui orientent le choix des cibles et la priorisation des candidats.
- Biologie de la découverte : Permet l'interrogation fondée sur des hypothèses des mécanismes neurodégénératifs dans des régions cérébrales spécifiques.
- Écrans : Fournit des échantillons standardisés et de haute intégrité pour le développement de tests et l'évaluation de composés.
- Analytique : Permet la mesure quantitative des variations d'ARN et de protéines dans différentes régions cérébrales.
- Recherche translationnelle : Relie les découvertes précliniques à leur pertinence clinique en ciblant les régions impliquées dans la maladie.
- Réutilisation institutionnelle : Met en place un protocole reproductible de préparation des tissus applicable à l'ensemble des programmes de recherche sur le système nerveux central.
Impact opérationnel et organisationnel
- Valeur scientifique : Accroît la confiance prédictive dans les résultats moléculaires spécifiques à chaque région.
- Valeur opérationnelle : Renforce la reproductibilité et la standardisation du traitement des tissus.
- Valeur stratégique : Améliore les décisions d'aller/arrêt en réduisant l'ambiguïté biologique dans les flux de travail du SNC.
- Impact sur le portefeuille : Permet une priorisation ajustée au risque des cibles thérapeutiques dans les maladies neurodégénératives.
Considérations relatives à la mise en œuvre
- Nécessite une expertise anatomique pour l'identification précise des régions et la dissection.
- Exige une gestion de la chaîne du froid et un traitement rapide afin de préserver l'intégrité de l'ARN et des protéines.
- Nécessite des protocoles standardisés pour assurer la reproductibilité entre équipes.
- Peut nécessiter des adaptations selon les différents modèles de rongeurs ou régions cérébrales.
- Dépend de l'accès à des outils spécialisés pour la dissection et à une infrastructure de cryoconservation.
