Name: Modèle de souris complète stase de la veine cave inférieure thrombose (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-06-15T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 34 s
Description: Découvrez un modèle de thrombose de la veine cave inférieure chez la souris pour étudier la thrombogénèse et la résolution du thrombus. Cette méthode permet d'analyser les interactions entre la paroi veineuse et le caillot sanguin.

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1. Procédures d&#39;anesthésie de la souris <ol><li> Les animaux sont retirés de leur cage et placé dans une chambre d&#39;induction anesthésique pré-opératoire pour l&#39;induction de gaz à 5% d&#39;isoflurane et de l&#39;oxygène à 100%, à un débit de 0,5 litres par minute (vaporisateur contrôlée). </li><li> Les souris sont sous sédation dans la chambre de l&#39;induction anesthésique, retiré de la chambre et l&#39;abdomen ventral est rasée avec une tondeuse électrique, ou maintenu dans la chambre si une épilation des cheveux est utilisé (1min). </li><li> Alors qu&#39;il était encore sous sédation, ils sont pesés, les yeux sont lubrifiés avec de la pommade ophtalmique stérile, puis placé dans un décubitus dorsal sur une eau chaude circulant dispositif de chauffage sous anesthésie générale, avec un cône de nez, en utilisant l&#39;isoflurane et de l&#39;oxygène. A ce point du taux d&#39;oxygène est réduit à 0,2 litres par minute. </li><li> L&#39;abdomen est pulvérisé avec une solution de chlorhexidine (diacétate de chlorhexidine est rapidement bacterialcidal et persistante) et essuyé avec une gaze stérile à trois reprises ou jusqu&#39;à ce que le site chirurgical est propre. </li></ol> 2. Souris micro-chirurgicales et les procédures de récupération <ol><li> Une incision médiane ventrale (2cm) est faite avec des ciseaux iris à travers la peau et la paroi abdominale exposer l&#39;abdomen. Un stériles de gaze imbibée salines 2x2in est utilisé pour refléter les intestins à gauche de l&#39;animal. Un dispositif de retenue de la souris est mis en place, permettant la visualisation de la veine cave inférieure (VCI). </li><li> A ce point, un niveau d&#39;entretien des isoflurance 2% et le taux d&#39;oxygène à 100% de 0,2 litres / min est utilisée pour le reste de la procédure chirurgicale. </li><li> Dissection est facilitée à l&#39;aide d&#39;un écouvillon applicateur stérile et extra délicats iris pince moitié tissus courbes. Des précautions doivent être prises dans la manipulation des tissus de souris car elles sont extrêmement fragiles. En entrant dans la cavité abdominale, de façon stérile imprégnée de sérum physiologique 4x4in trempés à réfléchir et à extérioriser les intestins sur un champ stérile, permettant ainsi la visualisation de la VCI. </li><li> Toutes les branches de retour IVC, des veines rénales à la bifurcation iliaque, sont cautérisées tandis que les branches latérales sont ligués avec 7-0 points de suture Prolène non réactif. </li><li> L&#39;IVC est séparée de l&#39;aorte, juste inférieur aux veines rénales. 7-0 prolène est utilisé pour ligaturer la veine cave inférieure. </li><li> Le site est fermé laparotomie dans un mode bi-couche. Notre laboratoire utilise 5-0 Vicryl, une suture synthétique, dans un motif continu de fermer la paroi abdominale. Colle de peau adhésif est utilisé pour fermer la peau. Il n&#39;y a pas sutures externes pour l&#39;enlèvement. </li><li> Les souris sont ensuite récupérés dans une cage de souris individuelle, observée en post-opératoire (45 minutes à 2 heures) sous une lampe chauffante (distance minimum de 24-pouces loin de la cage), puis retournèrent à leurs unités de logement d&#39;origine. Médicaments contre la douleur et les agents anti-inflammatoires peuvent être utilisés si elle n&#39;interfère pas avec l&#39;objectif de l&#39;étude. Justification scientifique à retenir médicaments contre la douleur, vétérinaire, et l&#39;approbation ICUCA sont nécessaires. Notre laboratoire a montré que la buprénorphine, 0,05-0,1 mg / kg SQ est un excellent analgésique pré-et post-opératoire pour les souris. En outre, lidocaïne au 4mg/kg (0,4 ml / kg d&#39;une solution à 1%) peuvent être infusés dans le site d&#39;incision lors analgésiques systémiques peuvent brouiller les résultats expérimentaux. </li><li> Sham animaux de chaque groupe expérimental soumis à la dissection plus, utilisés pour l&#39;approche chirurgicale, sauf la VCI ou les branches de drainage ne sont pas ligaturées ou cautérisée. </li><li> L&#39;euthanasie est effectuée en conformité avec les recommandations énoncées par l&#39;American Veterinary Medical Association Directives sur l&#39;euthanasie pour les rongeurs. </li></ol>

<ol><li>Naess, I. A., Christiansen, S. C., Romundstad, P., Cannegieter, S. C., Rosendaal, F. R., Hammerstrom, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incidence+and+mortality+of+venous+thrombosis%3A+a+population-based+study%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Incidence and mortality of venous thrombosis: a population-based study.</a> J Thromb Haemost. 5, 692-699 (2007).</li>
<li>White, R. H., Keenan, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+race+and+ethnicity+on+the+incidence+of+venous+thromboembolism%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Res%22%5BJournal%5D)">Effects of race and ethnicity on the incidence of venous thromboembolism.</a> Thromb Res. 123, Suppl 4. S11-S17 (2009).</li>
<li>Heit, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+epidemiology+of+venous+thromboembolism+in+the+community%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">The epidemiology of venous thromboembolism in the community.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 28, 370-372 (2008).</li>
<li>Henke, P. K., Varga, A., De, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deep+vein+thrombosis+resolution+is+modulated+by+monocyte+CXCR2-mediated+activity+in+a+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Deep vein thrombosis resolution is modulated by monocyte CXCR2-mediated activity in a mouse model.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 24, 1130-1137 (2004).</li>
<li>McDonald, A. P., Meier, T. R., Hawley, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aging+is+associated+with+impaired+thrombus+resolution+in+a+mouse+model+of+stasis+induced+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Res%22%5BJournal%5D)">Aging is associated with impaired thrombus resolution in a mouse model of stasis induced thrombosis.</a> Thromb Res. 125, 72-78 (2010).</li>
<li>Myers, D., Farris, D., Hawley, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selectins+influence+thrombosis+in+a+mouse+model+of+experimental+deep+venous+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Selectins influence thrombosis in a mouse model of experimental deep venous thrombosis.</a> J Surg Res. 108, 212-221 (2002).</li>
<li>Myers, D. D., Hawley, A. E., Farris, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((P-selectin+and+leukocyte+microparticles+are+associated+with+venous+thrombogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Surg%22%5BJournal%5D)">P-selectin and leukocyte microparticles are associated with venous thrombogenesis.</a> J Vasc Surg. 38, 1075-1089 (2003).</li>
<li>Myers, D. D. J. r, Rectenwald, J. E., Bedard, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decreased+venous+thrombosis+with+an+oral+inhibitor+of+P+selectin%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Decreased venous thrombosis with an oral inhibitor of P selectin.</a> J Vasc Surg. 42, 329-336 (2005).</li>
</ol>

Le modèle de souris complète stase de la veine cave inférieure thrombose peut être effectué sur plusieurs souches de souris d&#39;âges différents. Le modèle est le plus adapté à la souris d&#39;au moins 20 grammes en poids. Ce modèle animal de thrombose veineuse permet aux enquêteurs d&#39;étudier les interactions entre les inflammatoire de la paroi veineuse et le thrombus veino-occlusive. De notre expérience, nous avons constaté que plus de 10 animaux par groupe sont nécessaires pour obtenir une signification statistiq...

<table border="1"><tbody><tr><td> Fournitures et équipement </td></tr><tr><td> De gaz isoflurane </td></tr><tr><td> Prolène 7-0 de suture </td></tr><tr><td> Vicryl 5-0 </td></tr><tr><td> Colle de peau </td></tr><tr><td> Eye lubrifiant </td></tr><tr><td> Solution Nolvasan ou une solution bactériostatique </td></tr><tr><td> Champ Stéréomicroscope </td></tr><tr><td> MediCapture </td></tr><tr><td> Les applicateurs de coton </td></tr><tr><td> Gaze 2x2 </td></tr><tr><td> Coussin chauffant </td></tr><tr><td> Appareil d&#39;anesthésie </td></tr><tr><td> Stérilisateur à billes de verre instrument </td></tr><tr><td> Micro instruments chirurgicaux </td></tr><tr><td> Contention abdominale </td></tr></tbody></table>

modèle de souris complète stase de la veine cave inférieure thrombose

Mouse Complete Stasis Model of Inferior Vena Cava Thrombosis

La thromboembolie veineuse (TEV) comprend à la fois la thrombose veineuse profonde (TVP) et embolie pulmonaire (EP). Aux Etats-Unis (É.-U.), le taux élevé de morbidité et de mortalité font TEV une sérieuse préoccupation de santé 1-2. Après les maladies cardiaques et accidents vasculaires cérébraux, la TEV est la troisième 3 plus commune des maladies vasculaires. Aux États-Unis seulement, il ya un estimé 900 000 personnes touchées chaque année, avec 300 000 décès survenant chaque année 3. Une fiabilité dans un modèle animal in vivo pour étudier les mécanismes de cette maladie est nécessaire. Les avantages d&#39;utiliser la souris modèle complet stase de la veine cave inférieure thrombose sont multiples. Le modèle de souris permet de l&#39;administration de très petits volumes de tester la disponibilité limitée des agents, réduisant considérablement les coûts. La plus prometteuse est le potentiel de souris avec KO du gène qui permettent les fonctions spécifiques des facteurs inflammatoires et de coagulation à être délimitées. Courant tests moléculaires permettant la quantification de la paroi veineuse, thrombose, le sang total, plasma et pour les dosages. Toutefois, une préoccupation majeure impliquant ce modèle est la taille de contraintes opérationnelles et la friabilité des vaisseaux. En outre, en raison du poids IVC petit échantillon (moyenne 0.005 grammes), il est nécessaire d&#39;augmenter le nombre d&#39;animaux pour l&#39;analyse statistique exacte pour les tissus, thrombus, et des dosages sanguins tels que en temps réel la réaction en chaîne par polymérase (RT-PCR), Western Blot, immuno-enzymatique (ELISA), paroi de la veine zymographie, thrombus et l&#39;analyse cellulaire, et le sang total et des dosages plasmatiques 4-8. L&#39;inconvénient majeur avec le modèle de stase, c&#39;est que le manque de circulation sanguine inhibe l&#39;effet maximal des administrés systémique agents thérapeutiques sur le thrombus et la paroi veineuse.

La souris modèle complet stase de la veine cave inférieure thromboses rendements quantités mesurables de tissu paroi veineuse et thrombose. Il s&#39;est avéré utile pour évaluer les interactions entre la paroi de la veine et le thrombus occlusif et à évaluer la progression de l&#39;aiguë de l&#39;inflammation chronique.

Modèle de souris complète stase de la veine cave inférieure thrombose

La thromboembolie veineuse (TEV) comprend à la fois la thrombose veineuse profonde (TVP) et l'embolie pulmonaire (EP). Aux États-Unis, la morbidité élevée et...

L'objectif général de cette procédure est de ligaturer la VCI, provoquant une stase complète aboutissant à un thrombus, afin d'étudier la thrombogenèse et sa résolution. Cela est réalisé en exposant d'abord la VCI par une incision médiane ventrale. Ensuite, toutes les branches drainantes latérales et postérieures sont localisées et soit cautérisées, soit ligaturées.Ensuite, la VCI est séparée de l'aorte en dessous des veines rénales et ligaturée. Enfin, la VCI et le thrombus sont prélevés à différents moments pour une évaluation moléculaire. En définitive, des résultats peuvent être obtenus, montrant le degré de charge thrombotique jusqu'au sixième jour.Le modèle murin de ligature de la veine cave inférieure a été mis au point dans notre laboratoire afin d'étudier des souris présentant des gènes supprimés. La démonstration visuelle de ce modèle chirurgical est essentielle, car les étapes du protocole sont difficiles à apprendre en raison des techniques microchirurgicales nécessaires à sa réalisation. Commencez par anesthésier l'animal dans une chambre d'induction anesthésique préopératoire avec 5 % d'isoflurane et 100 % d'oxygène à un débit de 0,5 litre par minute.Retirer l'animal de la chambre, maintenir l'animal sur le dos et raser l'abdomen ventral à l'aide d'une tondeuse électrique. Ensuite, peser l'animal. Puis lubrifier les yeux avec une pommade ophtalmique stérile.Placer l'animal en décubitus dorsal sur un tapis chauffant à eau chaude sous anesthésie générale à l'isoflurane et à l'oxygène. Pulvériser l'abdomen avec une solution de chlorhexidine et essuyer avec une compresse stérile. Désinfecter l'abdomen jusqu'à ce que le site chirurgical soit propre pour commencer l'intervention chirurgicale.À l’aide de ciseaux à iridectomie, pratiquer une incision médiane ventrale à travers la peau et la paroi abdominale, en exposant l’abdomen à l’aide d’un pansement stérile imbibé de sérum physiologique. Déplacer les intestins de l’animal vers son côté gauche. Utiliser un dispositif de contention pour souris afin d’exposer la veine cave inférieure ou VCI.À partir de cette étape et jusqu’à la fin de la chirurgie, maintenir l’anesthésie avec 2 % d’isoflurane, 100 % d’oxygène à un débit de 0,2 litre par minute. À l’aide d’un coton-tige stérile et de pinces à tissus oculaires extra-délicates, réaliser une dissection émoussée de la fascia abdominale afin d’exposer la VCI et toutes ses branches.Commencez par cautériser toutes les branches postérieures de la VCI depuis les veines rénales jusqu'à la bifurcation iliaque. Ensuite, ligaturez les branches latérales à l'aide de sept sutures en proline non réactives. Séparez la VCI de l'aorte juste en dessous des veines rénales.Utilisez des sutures en proline 7/0 pour ligaturer la veine cave inférieure. Fermez la paroi abdominale à l’aide de sutures synthétiques en Vicryl 5/0. Appliquez ensuite une colle adhésive cutanée pour fermer la peau.Surveiller l'animal dans une cage de récupération sous une lampe chauffante, puis réintroduire l'animal dans son unité d'hébergement d'origine. Cette analyse compare des souris témoins et des animaux ayant subi une ligature de la veine cave inférieure et une thrombose au moment de l'euthanasie. Au deuxième ou au sixième jour, le thrombus de la veine cave inférieure ainsi que la paroi veineuse associée ont été prélevés et pesés.La mesure du poids du thrombus permet à l'investigateur de documenter le degré de thrombose et son degré de résolution au fil du temps. Il s'agit d'un indicateur de l'événement inflammatoire associé à l'activation des cellules endothéliales. Cette mesure constitue également une indication utile de l'efficacité d'un agent thérapeutique dans la réduction de l'inflammation et de la quantité de thrombus pariétal veineux. Ici, la veine cave inférieure ainsi que l'aorte ont été retirées.Coupe incluse dans la paraffine et déposée sur des lames, colorée à l'hématine et à l'éosine. Ce graphique représente le nombre de cellules polymorphonucléées, ou PMN, dans les tissus provenant de souris témoins par rapport à des souris expérimentales. La mesure des populations de cellules inflammatoires dans la paroi veineuse sert à documenter la réponse inflammatoire aiguë naturelle évoluant vers une inflammation chronique dans la paroi veineuse en présence de thrombi veineux chez un animal normal ; une réponse inflammatoire aiguë au deuxième jour devrait être principalement constituée de neutrophiles.Comme indiqué sur cette figure, en l'absence d'infection, la population de neutrophiles dans la paroi veineuse devrait diminuer après le deuxième jour. Dans notre modèle murin de thrombose veineuse. Ici, le nombre de monocytes de la paroi veineuse est comparé.Une réponse inflammatoire pariétale veineuse plus subaiguë et chronique montrera des augmentations. Au sein des populations de monocytes de la paroi veineuse, les monocytes sécrètent des enzymes protéolytiques, qui ont démontré favoriser la résolution naturelle du thrombus veineux. Avec le temps, en l'absence d'infection, vous devriez à présent avoir une bonne compréhension de la manière d'effectuer notre modèle de ligature de la veine cave inférieure d'après cette vidéo.Ce modèle est excellent pour l'étude de la thrombogenèse et de la résolution du thrombus au fil du temps.

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L'induction d'électrolyse de l'activation endothéliale à la surface interne de la veine cave inférieure des résultats dans la formation de thrombus veineux de type due à l'activation endothéliale et de sang partielle stase, deux composantes de la triade de Virchow.

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Cette vidéo montre la procédure de reproduction d’un AVC thrombotique dans un modèle murin en bloquant l’artère carotide commune droite et en exposant la souris à un environnement pauvre en oxygène. Ce processus réduit le flux de sang et d’oxygène vers le cerveau, provoquant la formation de caillots sanguins et des lésions cérébrales.

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Nous décrivons ici la sténose de la veine cave inférieure dans un modèle murin de la thrombose veineuse profonde. Ce modèle reprend la restriction du flux sanguin, un des principaux déclencheurs de thrombose veineuse profonde chez les humains.

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Ici, nous établissons un modèle original de rat de Sprague-Dawley (écart-type) de la thrombose supérieure du sinus sagittal (SSS) par l’intermédiaire d’une méthode de fil-embolization, et la stabilité et la fiabilité du modèle ont été vérifiées.<br...

Établissement d’un modèle de rat d’occlusion sagittale-sinus supérieure par l’intermédiaire d’une méthode d’embolie filimatique

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