Name: Trichuris muris Infection: Un modèle de type 2 Immunité et inflammation de lintestin (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-05-24T12:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 5 s
Description: Découvrez comment établir un modèle d'infection intestinale par Trichuris muris chez la souris. Cette méthode permet d'analyser les réponses immunitaires Th2 protectrices et Th1 pathologiques pour étudier l'immunité anti-parasitaire.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Ce travail a été soutenu par les Instituts canadiens de recherche en santé (MSH-95368, 89773 et MOP-MOP-106623 à CZ) et la Fondation canadienne pour l&#39;innovation. SMC est le récipiendaire d&#39;une Association des IRSC / canadienne de gastroentérologie de bourses postdoctorales. CZ est un chercheur des IRSC Nouveau.

1. Propagation Trichuris muris oeufs <ol><li> Pour générer de nouveaux lots d'œufs de Trichuris muris, infecter 20 à 30 des souris immunodéficientes (ex-NOD.Cg Prkdc scid IL2RG tm1Wjl / SZJ (NSG) ou 129S6/SvEvTac-Rag2 tm1Fwa (RAG2 - / -)) ou des souris génétiquement sensibles ( par exemple. AKR / J) qui sont âgées de 6-8 semaines, avec environ 300 oeufs de Trichuris muris par gavage oral. </li><li> Après 32-35 jours le sacrifice de la souris par le CO 2 asphyxie. </li><li> Exposer la partie ventrale de la souris et humide de l'abdomen avec de l'éthanol à 70%. </li><li> En utilisant des pinces saisir la peau de l'abdomen et de faire une petite incision à l'aide des ciseaux. Coupez la peau pour exposer le contenu abdominal. </li><li> Identifier le caecum et l'intestin proximal grande, et les supprimer. </li><li> Placez le caecum et le gros intestin proximal dans un plat de 10 cm de Pétri contenant Eagle modifié par Dulbecco (DMEM) avec 500 U / ml de pénicilline et 500 ug / ml de streptomycine (P / S). Couper le caecum ouverte pour exposer la lumière et les vers. En utilisant une pince cæcum lieu dans un bécher de tampon phosphate salin (PBS) et secouer délicatement pour enlever les excréments. </li><li> Retour au cæcum boîte de Pétri et en utilisant des pinces lisses incurvées (Roboz RS-5047) tirez délicatement vers et les placer dans un puits d'une plaque de 6 puits contenant 5 ml de DMEM + P / S. </li><li> Répétez ce processus pour toutes les souris. </li><li> Mettez la plaque 6 puits dans un contenant Tupperware avec une serviette en papier humide pour maintenir l'humidité et incuber à 37 ° C pendant 4 heures. </li><li> Après 4 heures supprimer un ver utilisant une pince incurvée lisse et les diviser en deux nouveaux puits de la plaque de 6 puits contenant 5 ml de DMEM + P / S. Récolte du contenu de la même origine et le placer dans un tube Falcon de 15 ml. Spin tubes à 3000 tpm et retirez et réservez surnageant comme antigène 4 h (peut être utilisé pour la restimulation des cellules après PBS dialyse, où les rendements en protéines typiques sont de 10-20 mg par 20 souris) et resuspendre œuf contenant le culot dans l'eau du robinet en autoclave. </li><li> Mettez la plaque de 6 puits de retour à 37 ° C pendant la nuit. Retirez et jetez les vers. Récolte du contenu des puits dans un tube Falcon et tournent à 3000 rpm pendant 5 min. Retirer le surnageant et la réserve de l'antigène pendant la nuit (peut être utilisé pour Trichuris Ag ELISA spécifiques d'isotypes d'anticorps après la dialyse PBS, où les rendements en protéines typiques sont de 10-20 mg par 20 souris) et contenant des oeufs Resuspendre le culot dans l'eau du robinet en autoclave. </li><li> Combinez 4 heures et les oeufs une nuit et filtrer les œufs à travers le tamis 70μm de supprimer tout les vers restants, puis transférer dans un flacon de 75 cm2. Gardez ballon dans un endroit sombre et couvert de feuilles pendant 6 semaines à température ambiante (RT). </li><li> Lavez les oeufs dans de l'eau du robinet à l'autoclave et resuspendre à 50 œufs viables dans 50 pi. Pour ce faire, centrifugeuse oeufs à 3000 rpm pendant 5 min et remettre en suspension dans l'eau du robinet ~ 50ml stérile. Retirer 50 oeufs ul et le placer sur une lame de verre. Utiliser le grossissement 40x compter le nombre de viabilité des oeufs embryonnés dans l'ul 50. Diluer les œufs pour donner 50 œufs viables dans 50 pi. Pour les images d'œufs viables s'il vous plaît voir l'étude de Kopper et Mansfield 16. </li></ol> 2. L'infection aiguë des souris expérimentales avec Trichuris muris œufs (200 œufs / souris) <ol><li> Bien resuspendre oeufs et enlever un volume suffisant pour traiter le nombre de souris X 2 (par exemple pour 10 souris prendre 200 x 10 souris ul x 2 = 4 ml d'oeufs) et les placer dans un tube de 14 ml pression bouchon. </li><li> Inverser le tube de 14 ml bouchon pression pour mélanger. Amener 200 pi d'œufs dans une seringue ml sur une aiguille de taille appropriée d'alimentation (pour les souris pesant 25 grammes, nous avons utilisé de calibre 18 1 1 / 2 "d'aiguilles). Dans un Scruff la main de la souris et en utilisant la main d'autres administrent des œufs par gavage oral . </li><li> Attendre 21 jours. </li></ol> 3. De pêche expérimentale <ol><li> Le 21ème jour du sacrifice des souris en utilisant du CO 2. </li><li> Recueillir le sang de souris par ponction cardiaque, dans une seringue non hépariné, et conserver à 4 ° C. Le jour suivant, d'isoler le sérum et le congeler à -20 ° C. Le sérum peut être utilisé pour la détection de Trichuris spécifiques IgG et IgE par ELISA. </li><li> Exposer la partie ventrale de la souris et humide de l'abdomen avec de l'éthanol à 70%. </li><li> En utilisant des pinces saisir la peau de l'abdomen et de faire une petite incision à l'aide des ciseaux. Coupez la peau et la membrane sous-jacente pour exposer le contenu abdominal. </li><li> Identifier l'intestin grêle, le caecum et le colon. Prenez le caecum avec une pince et tirez hors de la cavité abdominale. Avec une autre paire de pinces poussez intestin grêle vers la droite exposer les ganglions mésentériques (mLNs). Retirez le mLNs en faisant attention de ne pas couper dans les intestins et les placer dans un faucon de 15 ml contenant 2 ml de médias. Si désiré, ces peuvent être traitées et restimulées in vitro (4x10 6 / ml dans 1 ml de plaques de 24 puits avec 1 ug / ml αCD3/CD28 ou avec 50μg/ml 4h Ag Trichuris) pendant 72 heures pour l'analyse des cytokines par ELISA et f intracellulairecytométrie en bas. </li><li> Découpez le caecum et le colon. </li><li> En utilisant une pince, sortez pelotes fécales du côlon distal et le placer dans un tube de 2 ml Axygen. Congeler à -20 ° C. Pelotes fécales peuvent être analysés par western blot pour l'expression de la résistine-like molecule-β (β-RELM). </li><li> Enlevez l'extrémité du cæcum (~ 0,5 cm). Pour enlever les excréments maintenir la pointe du cæcum avec une pince et rincer avec du PBS en utilisant une seringue de 3 ml et de calibre 22 aiguille dans une boîte de Pétri. Placer dans du paraformaldéhyde 4% frais dans un tube de 5 ml Falcon bouchon clin d'oeil. Conserver à 4 ° C. Elles peuvent être inclus en paraffine, coupés et montés sur des lames pour l'analyse histologique. </li><li> Supprimer un morceau de côlon proximal (~ 1 cm) pour l'ARN. Mettez l'échantillon dans 2 ml Axygen tube avec 500 ul RNAlater. Conserver à 4 ° C. Ces échantillons peuvent être analysés pour l'expression des ARNm par qPCR. </li><li> Placez le reste du cæcum dans une boîte de Pétri étiquetés et congeler à -20 ° C. </li></ol> 4. Énumération des Trichuris muris ver dans le caecum <ol><li> Retirer du congélateur et le caecum place dans une boîte de Pétri contenant de l'eau ~ 5 ml. </li><li> Avec des ciseaux, couper le caecum ouverte pour exposer la lumière. </li><li> Tenez le caecum avec des pinces et agiter vigoureusement le caecum pour enlever la majorité des matières fécales. </li><li> Transfert cæcum à l'autre boîte de Pétri contenant de l'eau douce et en utilisant une pince incurvée gratter délicatement l'IECS le tissu sous-jacent. </li><li> Transfert cæcum d'un nouveau plat de Pétri contenant de l'eau et vigoureusement grattez tissus restants avec une pince, déchirant le tissu en petits morceaux. </li><li> Utiliser un microscope à dissection pour compter tous les vers dans tous les 3 des boîtes de Pétri. Comme vous trouvez un ver retirez le plat pour assurer le même ver n'est pas comptée deux fois. Si les vers sont endommagé (cassé dans la moitié) ne comptent que se termine fin ou épais pour obtenir un décompte précis. </li></ol> 5. Les résultats représentatifs Le modèle d'infection par Trichuris muris permet aux chercheurs de quantifier la charge parasitaire et des réponses immunitaires systémiques, ainsi que d'examiner histologiquement la réponse inflammatoire dans le cæcum distale. Lorsque la lumière du cæcum récolté est exposé, vers Trichuris peuvent être énumérés en utilisant un microscope à dissection (figure 1A-B). Les paramètres de l'immunité à Trichuris également isotype d'anticorps IgG1 commutation d'(associé à l'immunité de type Th2) chez les animaux résistants, et IgG2a (associé à l'immunité de type Th1) chez les animaux sensibles (figure 1C). Expression de la coupe spécifique des cellules de protéines résistine-like molecule-β (β-RELM) est associée à la clairance de Trichuris et est détectable par Western blot (figure 2). La partie distale du caecum peut être coloré avec l'acide périodique-Schiff (PAS) pour évaluer les réponses des cellules caliciformes et l'étendue de l'inflammation intestinale en réponse à l'infection (figure 3). <img src="/files/ftp_upload/2774/2774fig1.jpg" alt="Figure 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figure 1"> Figure 1. Quantification de l'immunité à Trichuris muris. (A) Résistant (B6) des souris expulser muris Trichuris par jour 21 post-infection. En revanche, sensibles (AKR / J) les souris deviennent chroniquement infectés par Trichuris, résultant en l'établissement du parasite. Chaque barre représente la moyenne ± SEM de 4-8 animaux par groupe. (B) vers sont comptés en utilisant un microscope à dissection. Panneau supérieur montre des vers dans l'isolement, le panneau du bas montre les vers, en présence de l'IECS et les fèces. (C) Trichuris spécifique des titres IgG2a sont déterminés par ELISA de sérum dilué (1:2 dilution, à partir de 01h20 et se terminant à la dilution 1:2560) sur des plaques recouvertes d'antigène Trichuris excréteurs (O / N Ag, 5 ug / ml). Sensible AKR / J souris ont des niveaux considérablement plus élevés de Trichuris spécifiques IgG2a sérum que résistants souris B6. <img src="/files/ftp_upload/2774/2774fig2.jpg" alt="Figure 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figure 2"> Figure 2. Apurement des Trichuris muris est associée à l'expression de la coupe spécifique des cellules β des protéines RELM-7. RELM-β production peut être détectée à partir des pelotes fécales de Trichuris infectés résistants (B6), mais pas sensibles (AKR / J) chez la souris par une analyse Western blot. Chaque voie est représentatif d'un seul animal, (N) = Naive, (Tm) = 21 jours Trichuris souris infectées. <img src="/files/ftp_upload/2774/2774fig3.jpg" alt="Figure 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figure 3"> Figure 3. L'examen histologique de l'infection à Trichuris cæcum distale suivantes. Sections um 5-7 de la distale cæcum colorés avec le PAS. Hyperplasie des cellules caliciformes et de la production de mucus sont évidents dans résistants (B6), mais pas sensibles (AKR / J) des souris suite à une infection par Trichuris.

<ol><li>Cliffe, L. J., Grencis, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Trichuris+muris+system%3A+a+paradigm+of+resistance+and+susceptibility+to+intestinal+nematode+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Parasitol%22%5BJournal%5D)">The Trichuris muris system: a paradigm of resistance and susceptibility to intestinal nematode infection.</a> Adv. Parasitol. 57, 255-307 (2004).</li>
<li>Else, K. J., Finkelman, F. D., Maliszewski, C. R., Grencis, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytokine-mediated+regulation+of+chronic+intestinal+helminth+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Med%22%5BJournal%5D)">Cytokine-mediated regulation of chronic intestinal helminth infection.</a> J. Exp. Med. 179, 347-351 (1994).</li>
<li>Bancroft, A. J., Grencis, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Th1+and+Th2+cells+and+immunity+to+intestinal+helminths%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Th1 and Th2 cells and immunity to intestinal helminths.</a> Chem. Immunol. 71, 192-208 (1998).</li>
<li>Bancroft, A. J., McKenzie, A. N., Grencis, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+critical+role+for+IL-13+in+resistance+to+intestinal+nematode+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">A critical role for IL-13 in resistance to intestinal nematode infection.</a> J. Immunol. 160, 3453-3461 (1998).</li>
<li>Helmby, H., Takeda, K., Akira, S., Grencis, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interleukin+%28IL%29-18+promotes+the+development+of+chronic+gastrointestinal+helminth+infection+by+downregulating+IL-13%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Med%22%5BJournal%5D)">Interleukin (IL)-18 promotes the development of chronic gastrointestinal helminth infection by downregulating IL-13.</a> J. Exp. Med. 194, 355-364 (2001).</li>
<li>Owyang, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interleukin+25+regulates+type+2+cytokine-dependent+immunity+and+limits+chronic+inflammation+in+the+gastrointestinal+tract%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Med%22%5BJournal%5D)">Interleukin 25 regulates type 2 cytokine-dependent immunity and limits chronic inflammation in the gastrointestinal tract.</a> J. Exp. Med. 203, 843-849 (2006).</li>
<li>Artis, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RELM%CE%B2%2FFIZZ2+is+a+goblet+cell-specific+immune-effector+molecule+in+the+gastrointestinal+tract%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">RELMβ/FIZZ2 is a goblet cell-specific immune-effector molecule in the gastrointestinal tract.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 101, 13596-13600 (2004).</li>
<li>Datta, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+novel+genes+in+intestinal+tissue+that+are+regulated+after+infection+with+an+intestinal+nematode+parasite%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Identification of novel genes in intestinal tissue that are regulated after infection with an intestinal nematode parasite.</a> Infect. Immun. 73, 4025-4033 (2005).</li>
<li>Cliffe, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accelerated+intestinal+epithelial+cell+turnover%3A+a+new+mechanism+of+parasite+expulsion%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Accelerated intestinal epithelial cell turnover: a new mechanism of parasite expulsion.</a> Science. 308, 1463-1465 (2005).</li>
<li>Artis, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+weapons+in+the+war+on+worms%3A+identification+of+putative+mechanisms+of+immune-mediated+expulsion+of+gastrointestinal+nematodes%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Parasitol%22%5BJournal%5D)">New weapons in the war on worms: identification of putative mechanisms of immune-mediated expulsion of gastrointestinal nematodes.</a> Int. J. Parasitol. 36, 723-733 (2006).</li>
<li>Finkelman, F. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytokine+regulation+of+host+defense+against+parasitic+gastrointestinal+nematodes%3A+lessons+from+studies+with+rodent+models%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Cytokine regulation of host defense against parasitic gastrointestinal nematodes: lessons from studies with rodent models.</a> Annu. Rev. Immunol. 15, 505-533 (1997).</li>
<li>Grencis, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enteric+helminth+infection%3A+immunopathology+and+resistance+during+intestinal+nematode+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Enteric helminth infection: immunopathology and resistance during intestinal nematode infection.</a> Chem. Immunol. 66, 41-61 (1997).</li>
<li>Khan, W. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+intestinal+muscle+contraction+by+interleukin-9+%28IL-9%29+or+IL-9+neutralization%3A+correlation+with+worm+expulsion+in+murine+nematode+infections%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Modulation of intestinal muscle contraction by interleukin-9 (IL-9) or IL-9 neutralization: correlation with worm expulsion in murine nematode infections.</a> Infect. Immun. 71, 2430-2438 (2003).</li>
<li>Khan, W. I., Blennerhasset, P., Ma, C., Matthaei, K. I., Collins, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stat6+dependent+goblet+cell+hyperplasia+during+intestinal+nematode+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Parasite+Immunol%22%5BJournal%5D)">Stat6 dependent goblet cell hyperplasia during intestinal nematode infection.</a> Parasite Immunol. 23, 39-42 (2001).</li>
<li>Akiho, H., Blennerhassett, P., Deng, Y., Collins, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+IL-4%2C+IL-13%2C+and+STAT6+in+inflammation-induced+hypercontractility+of+murine+smooth+muscle+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Gastrointest.+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Role of IL-4, IL-13, and STAT6 in inflammation-induced hypercontractility of murine smooth muscle cells.</a> Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 282, 226-2232 (2002).</li>
<li>Kopper, J. J., Mansfield, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+improved+methods+for+delivery+of+Trichuris+muris+to+the+laboratory+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Parasitol.+Res%22%5BJournal%5D)">Development of improved methods for delivery of Trichuris muris to the laboratory mouse.</a> Parasitol. Res. 107, 1103-1113 (2010).</li>
<li>Bancroft, A. J., Else, K. J., Grencis, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-level+infection+with+Trichuris+muris+significantly+affects+the+polarization+of+the+CD4+response%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Low-level infection with Trichuris muris significantly affects the polarization of the CD4 response.</a> Eur. J. Immunol. 24, 3113-3118 (1994).</li>
</ol>

Expériences sur les animaux ont été effectuées en conformité avec les directives et règlements établis par l&#39;Université de la Colombie-Britannique.

Ce protocole détaille une dose standard de haute aiguë Trichuris muris infection qui peut être modifiée au besoin par l&#39;investigateur. Par exemple, les souris peuvent être sacrifiés et les tissus récoltés à des jours différents. Afin de déterminer que les souris ont réussi à établir la charge parasitaire complète qu&#39;ils peuvent être sacrifiés au jour 14, date à laquelle toutes les souris doivent porter un fardeau de quelque 200 vers. Les souris peuvent également être infectés pendant 32 jours, où n&#39;...

<table border="1"><tbody><tr><th> Nom du réactif </th><th> Société </th><th> Numéro de catalogue </th><th> Commentaires </th></tr><tr><td> Aiguilles alimentation animale (18 x 1 ½ &quot;) </td><td> Popper </td><td> 7912 </td><td></td></tr><tr><td> Pince courbée lisse </td><td> Roboz </td><td> RS-5047 </td><td></td></tr><tr><td> DMEM </td><td> Gibco </td><td> 11965 </td><td></td></tr><tr><td> NOD.Cg-Prkdc scid IL2R gtm1Wjl / SZJ (NSG) </td><td> Jackson Laboratories </td><td> 005557 </td><td> Ce sont les souris, nous avons utilisé, cependant, aucune des souris immunodéficientes ou souche sensible devrait fonctionner. </td></tr><tr><td> RNAlater </td><td> Qiagen </td><td> 76104 </td><td></td></tr><tr><td> Tubes de 2 ml </td><td> Axygen </td><td> MCT-200-C </td><td></td></tr><tr><td> Tubes de 15 ml </td><td> Falcon </td><td> 352096 </td><td></td></tr><tr><td> 6 assiettes bien </td><td> Falcon </td><td> 353046 </td><td></td></tr><tr><td> Paraformaldéhyde </td><td> Sciences Electron Microscopy </td><td> 15710 </td><td></td></tr><tr><td> α-RELMβ d&#39;anticorps </td><td> PeproTech Inc </td><td> 0694270Rb </td><td></td></tr></tbody></table>

trichuris muris infection: un modèle de type 2 immunité et inflammation de l&#39;intestin

Trichuris muris Infection: A Model of Type 2 Immunity and Inflammation in the Gut

Trichuris muris est un pathogène naturel des souris et est biologiquement et antigéniquement similaires aux espèces de Trichuris qui infectent les humains et le bétail 1. Œufs infectieux sont donnés par gavage oral, éclosent dans l&#39;intestin grêle distal, envahissent les cellules épithéliales intestinales (CEI) qui bordent les cryptes du cæcum et du côlon proximal et sur ​​la maturation des œufs des vers la libération dans l&#39;environnement 1. Ce modèle est un outil puissant pour examiner les facteurs qui contrôle l&#39;activation des cellules CD4 + T helper (Th), ainsi que des changements dans l&#39;épithélium intestinal. La réponse immunitaire qui se produit dans les souches résistantes consanguines, telles que C57BL / 6 et BALB / c, est caractérisée par des cytokines Th2 polarisées (IL-4, IL-5 et IL-13) et l&#39;expulsion des vers tout type Th1 associée de cytokines (IL -12, IL-18, IFN-γ) de promouvoir des infections chroniques chez AKR ​​génétiquement sensibles / souris J 2-6. Cytokines Th2 promouvoir des changements physiologiques dans le microenvironnement intestinale, y compris le roulement rapide des CEI, la différenciation des cellules caliciformes, le recrutement et l&#39;évolution de la perméabilité épithéliale et la contraction des muscles lisses, qui ont tous été impliqués dans l&#39;expulsion 7-15 ver. Ici, nous détaillons un protocole pour la propagation de Trichuris muris oeufs qui peuvent être utilisées dans des expériences ultérieures. Nous fournissons également une récolte expérimentale de l&#39;échantillon avec des suggestions pour l&#39;analyse post-infection. Globalement, ce protocole permettra aux chercheurs les outils de base pour réaliser un modèle d&#39;infection par Trichuris muris souris qui peut être utilisé pour traiter les questions relatives à la propension Th dans le tractus gastro-intestinal ainsi que des fonctions effectrices immunitaires des CEI.

Trichuris muris infection est un modèle de l&#39;immunité intestinale Th2 où les souris résistantes générer une réponse immunitaire protectrice Th2 et souris susceptibles de générer une réponse Th1 pathologique.

Trichuris muris Infection: Un modèle de type 2 Immunité et inflammation de l&#39;intestin

*Trichuris muris* est un agent pathogène naturel chez la souris et présente des similitudes biologiques et antigéniques avec les espèces de *Trichuris* qui infectent l'homme et le bétail1. ...

L'objectif général de cette procédure est d'établir et de maintenir un modèle d'infection naturelle par hain. Tout d'abord, des souris sont infectées par voie orale avec des œufs de tra curus mirrors par gavage. Vingt et un jours plus tard, les animaux infectés sont euthanasiés et le sang, les ganglions lymphatiques mésentériques, les granulés fécaux, les côlons et le seeker sont prélevés.À l’aide de ces échantillons, la réponse immunitaire générée contre les tricks peut être analysée. Les miroirs peuvent être analysés. Les échantillons sériques peuvent être analysés par lysa afin de détecter les anticorps spécifiques de TRA.Une restimulation in vitro des cellules des ganglions lymphatiques peut être réalisée afin d'analyser les réponses immunitaires cellulaires. Des granulés fécaux peuvent être utilisés pour l'évaluation de la teneur en protéines et une analyse de l'expression génique peut être effectuée par analyse en QPCR du côlon. Enfin, l'extrémité du caecum peut être utilisée pour l'histologie, tandis que le reste du caecum peut servir à déterminer la charge parasitaire chez les souris infectées.En fin de compte, on peut obtenir des résultats indiquant si une souris est résis

trichuris-muris-infection-model-type-2-immunity-inflammation

Research

Recherche

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie et infection

Des modèles expérimentaux de maladies inflammatoires de l'intestin nous ont permis d'examiner le complexe innée et adaptative des réponses immunitaires associées à la pathogenèse. Utiliser score histologique, la quantification des cytokines pro-inflammatoires et de l'activité myéloperoxydase, on peut commencer à évaluer ces réponses observée dans la maladie intestinale inflammatoire.

Enquêter inflammation intestinale induite par DSS modèle des MICI

Iléus postopératoire (POI) est une complication de la chirurgie abdominale conduisant à une morbidité accrue et un séjour prolongé à l'hôpital. Parce que les stratégies prophylactiques ou thérapeutiques font défaut intensification de la recherche est nécessaire. Par conséquent, nous avons établi un modèle de souris standard et possible d'étudier la physiopathologie de POI et d'étudier les options possibles thérapeutiques.

D&#39;évaluation fonctionnelle de la motilité intestinale et inflammation de la paroi intestinale chez les rongeurs: analyses dans un modèle standardisé de la manipulation intestinale

Citrobacter rodentium infection constitue un modèle précieux pour l'étude des infections bactériennes entériques ainsi que l'hôte réponses immunitaires et la colite chez la souris. Ce protocole décrit la mesure du intégrité de la barrière, la charge de pathogènes et les dommages histologiques permettant la caractérisation approfondie des contributions pathogène et de l'hôte à la colite infectieuse murin.

La<em&gt; Citrobacter rodentium</emModèle de souris&gt;: Étudier Contributions des agents pathogènes et l&#39;hôte de la colite infectieuse

Les modèles animaux se sont révélés être des outils précieux dans la définition de mécanismes spécifiques hôtes et pathogènes qui contribuent au développement de l'inflammation chronique. Nous décrivons ici un modèle murin d'infection par voie orale avec l'agent pathogène humain Porphyromonas gingivalis et méthodologies de détail pour évaluer la progression de l'inflammation au niveau des sites locaux et systémiques.

Un modèle de souris pour l&#39;inflammation chronique induite par pathogène sur les sites locaux et systémiques

Ici, nous présentons un protocole pour induire une inflammation colique chez la souris par transfert adoptif de lymphocytes Tsyngéniques à haute teneur en CD4+CD45RB dans des receveurs déficients en lymphocytes T et B. Les caractéristiques cliniques et histopathologiques imitent les maladies inflammatoires de l’intestin humain. Cette méthode permet d’étudier l’initiation de l’inflammation colique et la progression de la maladie.

Induction de murin inflammation intestinale par transfert adoptif de effecteur CD4<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt; Haute</sup&gt; T cellules dans des souris immunodéficientes

Dans ce modèle de colite induite par antigène, les lymphocytes T CD4+ OT-II exprimant une protéine fluorescente rouge ont été transférés adoptivement dans des souris RAG-/- qui expriment une protéine fluorescente verte dans des phagocytes mononucléaires (MP). Les hôtes ont été mis au défi par Escherichia coli (E. coli) exprimant la protéine ovalbumine (OVA) fusionnée à une protéine fluorescente cyan (CFP).

Développement d&#39;un modèle Colite antigène conduit à étudier la présentation des antigènes par les cellules présentatrices d&#39;antigènes aux cellules T

Un protocole pour simuler l’entrée de composés d’origine bactérienne après rupture de la barrière intestinale est présenté ici. Une faible dose de lipopolysaccharide a été injectée systémique chez la souris, qui ont été observées pendant l’injection après 24 h. L’expression des cytokines pro-inflammatoires était déterminée à plusieurs moments dans la rate, du foie et du colon.

Injections de lipopolysaccharides dans souris pour imiter l’entrée des produits d’origine microbienne après rupture de la barrière intestinale

Colostomie distale murin fournit un modèle murin pour la colite détournement humaine, une colite lymphocytaire principalement dans le segment du côlon exclus du flux de matières fécal.

Murine colostomie distale, un nouveau modèle de colite détournement chez les souris C57BL/6

Ce protocole décrit un modèle de souris de la fibrose intestinale salmonella conduite qui ressemble aux caractéristiques pathologiques clés de Crohn' la maladie de s comprenant l'inflammation transmurale et la fibrose. Cette méthode peut être utilisée pour évaluer les facteurs hôtes qui modifient les résultats fibrotiques à l'aide de souris mutantes maintenues sur un fond génétique C57Bl/6.

Fibrose intestinale induite par l'infection chronique à Salmonella

Dans ce protocole, un modèle de colite adoptive de transfert de lymphocytes T spécifiques à l’antigène du microbiote intestinal est décrit. Les lymphocytes T CD4+ sont isolés à partir de souris transgéniques TCR CBir1. Ceux-ci sont spécifiques pour un antigène immunodominant du microbiote intestinal CBir1 flagellin, qui est transféré dans les souris Rag1-/- receveuses, entraînant une inflammation intestinale.

Induction de l’inflammation intestinale par transfert adoptif de lymphocytes T CD4+ transgéniques CBir1 TCR à des souris immunodéficientes

Notre protocole détaillé décrit la création et l’utilisation du modèle avancé d’intestin sur puce, qui simule la muqueuse intestinale humaine avec des structures 3D et divers types de cellules, permettant une analyse approfondie des réponses immunitaires et des fonctions cellulaires en réponse à la colonisation microbienne.

Modèle d’intestin sur puce immunocompétent pour l’analyse des réponses immunitaires de la muqueuse intestinale

Découvrez comment établir un modèle d'infection intestinale par Trichuris muris chez la souris. Cette méthode permet d'analyser les réponses immunitaires Th2 protectrices et Th1 pathologiques pour étudier l'immunité anti-parasitaire.

Trichuris muris Infection: Un modèle de type 2 Immunité et inflammation de l'intestin

Explorer plus de vidéos