Name: Trichuris muris Infection: Un modèle de type 2 Immunité et inflammation de lintestin (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-05-24T12:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 5 s
Description: Découvrez comment établir un modèle d'infection intestinale par Trichuris muris chez la souris. Cette méthode permet d'analyser les réponses immunitaires Th2 protectrices et Th1 pathologiques pour étudier l'immunité anti-parasitaire.

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Ce travail a été soutenu par les Instituts canadiens de recherche en santé (MSH-95368, 89773 et MOP-MOP-106623 à CZ) et la Fondation canadienne pour l&#39;innovation. SMC est le récipiendaire d&#39;une Association des IRSC / canadienne de gastroentérologie de bourses postdoctorales. CZ est un chercheur des IRSC Nouveau.

1. Propagation Trichuris muris oeufs <ol><li> Pour générer de nouveaux lots d'œufs de Trichuris muris, infecter 20 à 30 des souris immunodéficientes (ex-NOD.Cg Prkdc scid IL2RG tm1Wjl / SZJ (NSG) ou 129S6/SvEvTac-Rag2 tm1Fwa (RAG2 - / -)) ou des souris génétiquement sensibles ( par exemple. AKR / J) qui sont âgées de 6-8 semaines, avec environ 300 oeufs de Trichuris muris par gavage oral. </li><li> Après 32-35 jours le sacrifice de la souris par le CO 2 asphyxie. </li><li> Exposer la partie ventrale de la souris et humide de l'abdomen avec de l'éthanol à 70%. </li><li> En utilisant des pinces saisir la peau de l'abdomen et de faire une petite incision à l'aide des ciseaux. Coupez la peau pour exposer le contenu abdominal. </li><li> Identifier le caecum et l'intestin proximal grande, et les supprimer. </li><li> Placez le caecum et le gros intestin proximal dans un plat de 10 cm de Pétri contenant Eagle modifié par Dulbecco (DMEM) avec 500 U / ml de pénicilline et 500 ug / ml de streptomycine (P / S). Couper le caecum ouverte pour exposer la lumière et les vers. En utilisant une pince cæcum lieu dans un bécher de tampon phosphate salin (PBS) et secouer délicatement pour enlever les excréments. </li><li> Retour au cæcum boîte de Pétri et en utilisant des pinces lisses incurvées (Roboz RS-5047) tirez délicatement vers et les placer dans un puits d'une plaque de 6 puits contenant 5 ml de DMEM + P / S. </li><li> Répétez ce processus pour toutes les souris. </li><li> Mettez la plaque 6 puits dans un contenant Tupperware avec une serviette en papier humide pour maintenir l'humidité et incuber à 37 ° C pendant 4 heures. </li><li> Après 4 heures supprimer un ver utilisant une pince incurvée lisse et les diviser en deux nouveaux puits de la plaque de 6 puits contenant 5 ml de DMEM + P / S. Récolte du contenu de la même origine et le placer dans un tube Falcon de 15 ml. Spin tubes à 3000 tpm et retirez et réservez surnageant comme antigène 4 h (peut être utilisé pour la restimulation des cellules après PBS dialyse, où les rendements en protéines typiques sont de 10-20 mg par 20 souris) et resuspendre œuf contenant le culot dans l'eau du robinet en autoclave. </li><li> Mettez la plaque de 6 puits de retour à 37 ° C pendant la nuit. Retirez et jetez les vers. Récolte du contenu des puits dans un tube Falcon et tournent à 3000 rpm pendant 5 min. Retirer le surnageant et la réserve de l'antigène pendant la nuit (peut être utilisé pour Trichuris Ag ELISA spécifiques d'isotypes d'anticorps après la dialyse PBS, où les rendements en protéines typiques sont de 10-20 mg par 20 souris) et contenant des oeufs Resuspendre le culot dans l'eau du robinet en autoclave. </li><li> Combinez 4 heures et les oeufs une nuit et filtrer les œufs à travers le tamis 70μm de supprimer tout les vers restants, puis transférer dans un flacon de 75 cm2. Gardez ballon dans un endroit sombre et couvert de feuilles pendant 6 semaines à température ambiante (RT). </li><li> Lavez les oeufs dans de l'eau du robinet à l'autoclave et resuspendre à 50 œufs viables dans 50 pi. Pour ce faire, centrifugeuse oeufs à 3000 rpm pendant 5 min et remettre en suspension dans l'eau du robinet ~ 50ml stérile. Retirer 50 oeufs ul et le placer sur une lame de verre. Utiliser le grossissement 40x compter le nombre de viabilité des oeufs embryonnés dans l'ul 50. Diluer les œufs pour donner 50 œufs viables dans 50 pi. Pour les images d'œufs viables s'il vous plaît voir l'étude de Kopper et Mansfield 16. </li></ol> 2. L'infection aiguë des souris expérimentales avec Trichuris muris œufs (200 œufs / souris) <ol><li> Bien resuspendre oeufs et enlever un volume suffisant pour traiter le nombre de souris X 2 (par exemple pour 10 souris prendre 200 x 10 souris ul x 2 = 4 ml d'oeufs) et les placer dans un tube de 14 ml pression bouchon. </li><li> Inverser le tube de 14 ml bouchon pression pour mélanger. Amener 200 pi d'œufs dans une seringue ml sur une aiguille de taille appropriée d'alimentation (pour les souris pesant 25 grammes, nous avons utilisé de calibre 18 1 1 / 2 "d'aiguilles). Dans un Scruff la main de la souris et en utilisant la main d'autres administrent des œufs par gavage oral . </li><li> Attendre 21 jours. </li></ol> 3. De pêche expérimentale <ol><li> Le 21ème jour du sacrifice des souris en utilisant du CO 2. </li><li> Recueillir le sang de souris par ponction cardiaque, dans une seringue non hépariné, et conserver à 4 ° C. Le jour suivant, d'isoler le sérum et le congeler à -20 ° C. Le sérum peut être utilisé pour la détection de Trichuris spécifiques IgG et IgE par ELISA. </li><li> Exposer la partie ventrale de la souris et humide de l'abdomen avec de l'éthanol à 70%. </li><li> En utilisant des pinces saisir la peau de l'abdomen et de faire une petite incision à l'aide des ciseaux. Coupez la peau et la membrane sous-jacente pour exposer le contenu abdominal. </li><li> Identifier l'intestin grêle, le caecum et le colon. Prenez le caecum avec une pince et tirez hors de la cavité abdominale. Avec une autre paire de pinces poussez intestin grêle vers la droite exposer les ganglions mésentériques (mLNs). Retirez le mLNs en faisant attention de ne pas couper dans les intestins et les placer dans un faucon de 15 ml contenant 2 ml de médias. Si désiré, ces peuvent être traitées et restimulées in vitro (4x10 6 / ml dans 1 ml de plaques de 24 puits avec 1 ug / ml αCD3/CD28 ou avec 50μg/ml 4h Ag Trichuris) pendant 72 heures pour l'analyse des cytokines par ELISA et f intracellulairecytométrie en bas. </li><li> Découpez le caecum et le colon. </li><li> En utilisant une pince, sortez pelotes fécales du côlon distal et le placer dans un tube de 2 ml Axygen. Congeler à -20 ° C. Pelotes fécales peuvent être analysés par western blot pour l'expression de la résistine-like molecule-β (β-RELM). </li><li> Enlevez l'extrémité du cæcum (~ 0,5 cm). Pour enlever les excréments maintenir la pointe du cæcum avec une pince et rincer avec du PBS en utilisant une seringue de 3 ml et de calibre 22 aiguille dans une boîte de Pétri. Placer dans du paraformaldéhyde 4% frais dans un tube de 5 ml Falcon bouchon clin d'oeil. Conserver à 4 ° C. Elles peuvent être inclus en paraffine, coupés et montés sur des lames pour l'analyse histologique. </li><li> Supprimer un morceau de côlon proximal (~ 1 cm) pour l'ARN. Mettez l'échantillon dans 2 ml Axygen tube avec 500 ul RNAlater. Conserver à 4 ° C. Ces échantillons peuvent être analysés pour l'expression des ARNm par qPCR. </li><li> Placez le reste du cæcum dans une boîte de Pétri étiquetés et congeler à -20 ° C. </li></ol> 4. Énumération des Trichuris muris ver dans le caecum <ol><li> Retirer du congélateur et le caecum place dans une boîte de Pétri contenant de l'eau ~ 5 ml. </li><li> Avec des ciseaux, couper le caecum ouverte pour exposer la lumière. </li><li> Tenez le caecum avec des pinces et agiter vigoureusement le caecum pour enlever la majorité des matières fécales. </li><li> Transfert cæcum à l'autre boîte de Pétri contenant de l'eau douce et en utilisant une pince incurvée gratter délicatement l'IECS le tissu sous-jacent. </li><li> Transfert cæcum d'un nouveau plat de Pétri contenant de l'eau et vigoureusement grattez tissus restants avec une pince, déchirant le tissu en petits morceaux. </li><li> Utiliser un microscope à dissection pour compter tous les vers dans tous les 3 des boîtes de Pétri. Comme vous trouvez un ver retirez le plat pour assurer le même ver n'est pas comptée deux fois. Si les vers sont endommagé (cassé dans la moitié) ne comptent que se termine fin ou épais pour obtenir un décompte précis. </li></ol> 5. Les résultats représentatifs Le modèle d'infection par Trichuris muris permet aux chercheurs de quantifier la charge parasitaire et des réponses immunitaires systémiques, ainsi que d'examiner histologiquement la réponse inflammatoire dans le cæcum distale. Lorsque la lumière du cæcum récolté est exposé, vers Trichuris peuvent être énumérés en utilisant un microscope à dissection (figure 1A-B). Les paramètres de l'immunité à Trichuris également isotype d'anticorps IgG1 commutation d'(associé à l'immunité de type Th2) chez les animaux résistants, et IgG2a (associé à l'immunité de type Th1) chez les animaux sensibles (figure 1C). Expression de la coupe spécifique des cellules de protéines résistine-like molecule-β (β-RELM) est associée à la clairance de Trichuris et est détectable par Western blot (figure 2). La partie distale du caecum peut être coloré avec l'acide périodique-Schiff (PAS) pour évaluer les réponses des cellules caliciformes et l'étendue de l'inflammation intestinale en réponse à l'infection (figure 3). <img src="/files/ftp_upload/2774/2774fig1.jpg" alt="Figure 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figure 1"> Figure 1. Quantification de l'immunité à Trichuris muris. (A) Résistant (B6) des souris expulser muris Trichuris par jour 21 post-infection. En revanche, sensibles (AKR / J) les souris deviennent chroniquement infectés par Trichuris, résultant en l'établissement du parasite. Chaque barre représente la moyenne ± SEM de 4-8 animaux par groupe. (B) vers sont comptés en utilisant un microscope à dissection. Panneau supérieur montre des vers dans l'isolement, le panneau du bas montre les vers, en présence de l'IECS et les fèces. (C) Trichuris spécifique des titres IgG2a sont déterminés par ELISA de sérum dilué (1:2 dilution, à partir de 01h20 et se terminant à la dilution 1:2560) sur des plaques recouvertes d'antigène Trichuris excréteurs (O / N Ag, 5 ug / ml). Sensible AKR / J souris ont des niveaux considérablement plus élevés de Trichuris spécifiques IgG2a sérum que résistants souris B6. <img src="/files/ftp_upload/2774/2774fig2.jpg" alt="Figure 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figure 2"> Figure 2. Apurement des Trichuris muris est associée à l'expression de la coupe spécifique des cellules β des protéines RELM-7. RELM-β production peut être détectée à partir des pelotes fécales de Trichuris infectés résistants (B6), mais pas sensibles (AKR / J) chez la souris par une analyse Western blot. Chaque voie est représentatif d'un seul animal, (N) = Naive, (Tm) = 21 jours Trichuris souris infectées. <img src="/files/ftp_upload/2774/2774fig3.jpg" alt="Figure 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figure 3"> Figure 3. L'examen histologique de l'infection à Trichuris cæcum distale suivantes. Sections um 5-7 de la distale cæcum colorés avec le PAS. Hyperplasie des cellules caliciformes et de la production de mucus sont évidents dans résistants (B6), mais pas sensibles (AKR / J) des souris suite à une infection par Trichuris.

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<li>Bancroft, A. J., Else, K. J., Grencis, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-level+infection+with+Trichuris+muris+significantly+affects+the+polarization+of+the+CD4+response%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Low-level infection with Trichuris muris significantly affects the polarization of the CD4 response.</a> Eur. J. Immunol. 24, 3113-3118 (1994).</li>
</ol>

Expériences sur les animaux ont été effectuées en conformité avec les directives et règlements établis par l&#39;Université de la Colombie-Britannique.

Ce protocole détaille une dose standard de haute aiguë Trichuris muris infection qui peut être modifiée au besoin par l&#39;investigateur. Par exemple, les souris peuvent être sacrifiés et les tissus récoltés à des jours différents. Afin de déterminer que les souris ont réussi à établir la charge parasitaire complète qu&#39;ils peuvent être sacrifiés au jour 14, date à laquelle toutes les souris doivent porter un fardeau de quelque 200 vers. Les souris peuvent également être infectés pendant 32 jours, où n&#39;...

<table border="1"><tbody><tr><th> Nom du réactif </th><th> Société </th><th> Numéro de catalogue </th><th> Commentaires </th></tr><tr><td> Aiguilles alimentation animale (18 x 1 ½ &quot;) </td><td> Popper </td><td> 7912 </td><td></td></tr><tr><td> Pince courbée lisse </td><td> Roboz </td><td> RS-5047 </td><td></td></tr><tr><td> DMEM </td><td> Gibco </td><td> 11965 </td><td></td></tr><tr><td> NOD.Cg-Prkdc scid IL2R gtm1Wjl / SZJ (NSG) </td><td> Jackson Laboratories </td><td> 005557 </td><td> Ce sont les souris, nous avons utilisé, cependant, aucune des souris immunodéficientes ou souche sensible devrait fonctionner. </td></tr><tr><td> RNAlater </td><td> Qiagen </td><td> 76104 </td><td></td></tr><tr><td> Tubes de 2 ml </td><td> Axygen </td><td> MCT-200-C </td><td></td></tr><tr><td> Tubes de 15 ml </td><td> Falcon </td><td> 352096 </td><td></td></tr><tr><td> 6 assiettes bien </td><td> Falcon </td><td> 353046 </td><td></td></tr><tr><td> Paraformaldéhyde </td><td> Sciences Electron Microscopy </td><td> 15710 </td><td></td></tr><tr><td> α-RELMβ d&#39;anticorps </td><td> PeproTech Inc </td><td> 0694270Rb </td><td></td></tr></tbody></table>

trichuris muris infection: un modèle de type 2 immunité et inflammation de l&#39;intestin

Trichuris muris Infection: A Model of Type 2 Immunity and Inflammation in the Gut

Trichuris muris est un pathogène naturel des souris et est biologiquement et antigéniquement similaires aux espèces de Trichuris qui infectent les humains et le bétail 1. Œufs infectieux sont donnés par gavage oral, éclosent dans l&#39;intestin grêle distal, envahissent les cellules épithéliales intestinales (CEI) qui bordent les cryptes du cæcum et du côlon proximal et sur ​​la maturation des œufs des vers la libération dans l&#39;environnement 1. Ce modèle est un outil puissant pour examiner les facteurs qui contrôle l&#39;activation des cellules CD4 + T helper (Th), ainsi que des changements dans l&#39;épithélium intestinal. La réponse immunitaire qui se produit dans les souches résistantes consanguines, telles que C57BL / 6 et BALB / c, est caractérisée par des cytokines Th2 polarisées (IL-4, IL-5 et IL-13) et l&#39;expulsion des vers tout type Th1 associée de cytokines (IL -12, IL-18, IFN-γ) de promouvoir des infections chroniques chez AKR ​​génétiquement sensibles / souris J 2-6. Cytokines Th2 promouvoir des changements physiologiques dans le microenvironnement intestinale, y compris le roulement rapide des CEI, la différenciation des cellules caliciformes, le recrutement et l&#39;évolution de la perméabilité épithéliale et la contraction des muscles lisses, qui ont tous été impliqués dans l&#39;expulsion 7-15 ver. Ici, nous détaillons un protocole pour la propagation de Trichuris muris oeufs qui peuvent être utilisées dans des expériences ultérieures. Nous fournissons également une récolte expérimentale de l&#39;échantillon avec des suggestions pour l&#39;analyse post-infection. Globalement, ce protocole permettra aux chercheurs les outils de base pour réaliser un modèle d&#39;infection par Trichuris muris souris qui peut être utilisé pour traiter les questions relatives à la propension Th dans le tractus gastro-intestinal ainsi que des fonctions effectrices immunitaires des CEI.

Trichuris muris infection est un modèle de l&#39;immunité intestinale Th2 où les souris résistantes générer une réponse immunitaire protectrice Th2 et souris susceptibles de générer une réponse Th1 pathologique.

Trichuris muris Infection: Un modèle de type 2 Immunité et inflammation de l&#39;intestin

*Trichuris muris* est un agent pathogène naturel chez la souris et présente des similitudes biologiques et antigéniques avec les espèces de *Trichuris* qui infectent l'homme et le bétail1. ...

L'objectif général de cette procédure est d'établir et de maintenir un modèle d'infection naturelle par hain. Tout d'abord, des souris sont infectées par voie orale avec des œufs de tra curus mirrors par gavage. Vingt et un jours plus tard, les animaux infectés sont euthanasiés et le sang, les ganglions lymphatiques mésentériques, les granulés fécaux, les côlons et le seeker sont prélevés.À l’aide de ces échantillons, la réponse immunitaire générée contre les tricks peut être analysée. Les miroirs peuvent être analysés. Les échantillons sériques peuvent être analysés par lysa afin de détecter les anticorps spécifiques de TRA.Une restimulation in vitro des cellules des ganglions lymphatiques peut être réalisée afin d'analyser les réponses immunitaires cellulaires. Des granulés fécaux peuvent être utilisés pour l'évaluation de la teneur en protéines et une analyse de l'expression génique peut être effectuée par analyse en QPCR du côlon. Enfin, l'extrémité du caecum peut être utilisée pour l'histologie, tandis que le reste du caecum peut servir à déterminer la charge parasitaire chez les souris infectées.En fin de compte, on peut obtenir des résultats indiquant si une souris est résistante ou sensible à l'infection par les MOUs de trais, et la réponse immunitaire dirigée contre le parasite peut être caractérisée. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine de l'immunologie, telles que les facteurs contrôlant l'activation des cellules T auxiliaires, ainsi que les protéines nécessaires à la différenciation des cellules TH2. Les œufs des MOUs de Trauss peuvent être propagés chez des souris immunodéficientes ou des souches génétiquement sensibles, comme les KR, 35 jours après l'infection, afin de récolter les œufs à partir de souris euthanasiées.Exposer la surface ventrale de l'animal et rincer l'abdomen de la souris avec de l'éthanol à l'aide de pinces et de ciseaux stériles. Saisir la peau abdominale et pratiquer une petite incision. Exposer le contenu abdominal, identifier le cæcum et le côlon proximal, puis les retirer.Transférez les organes dans une boîte de Pétri de 10 centimètres contenant du DMEM supplémenté de pénicilline et de streptomycine. Ensuite, ouvrez le caecum et le colon proximal à l’aide de forceps afin d’exposer la lumière et les vers. Placez les organes ouverts dans un bécher contenant du PBS et agitez doucement pour éliminer les matières fécales.Une fois le cæcum lavé, transférez-le dans une nouvelle boîte de Pétri et utilisez une pince courbe lisse pour extraire délicatement les vers. Transférez tous les vers provenant de chaque souris dans un puits d'une plaque à six puits contenant cinq millilitres de DMEM enrichi en antibiotiques. Placez la plaque à six puits avec une serviette en papier humide à l'intérieur d'un récipient hermétique et incubez à 37 degrés Celsius pendant quatre heures afin de permettre aux vers de pondre leurs œufs.Après cette incubation, utilisez une pince pour retirer les vers du puits d'origine et répartissez-les dans deux nouveaux puits contenant du DMEM. Cette répartition des vers permettra de maximiser la récupération des œufs à l’aide d’une pipette. Récupérez le milieu restant contenant l’antigène sécrété et les œufs provenant du puits d’origine et transférez-le dans un tube Falcon de 15 millilitres.Centrifuger le tube à 3000 tr/min pendant cinq minutes. Ensuite, retirer et conserver le surnageant contenant l'antigène de quatre heures et Reese's bend le culot contenant l'œuf dans de l'eau stérile. Placer la plaque à six puits contenant les vers à 37 degrés Celsius une fois de plus et incuber toute la nuit jusqu'au lendemain matin.Après avoir éliminé les vers, récoltez le contenu des puits comme indiqué précédemment et centrifugez le surnageant pour isoler les œufs. Conservez le surnageant contenant l'antigène de nuit et remettez les œufs en suspension dans de l'eau. Comme auparavant, mélangez ces œufs avec ceux obtenus à partir de l'incubation de quatre heures.Filtrez les œufs à l’aide d’un tamis de 70 microns afin d’éliminer les vers éventuellement restants. Ensuite, transférez-les dans un flacon carré de 75 centimètres. Recouvrez le flacon de papier d’aluminium pour le protéger de la lumière et conservez les œufs pendant six semaines à température ambiante.Cela permettra aux œufs de mûrir et d'éclore après six semaines. Lavez les œufs, ajoutez de l'eau et comptez les œufs viables. Illustré ici.À titre d'exemple d'un œuf embryonné viable et d'un œuf non viable, Reese plie la concentration d'Exeter à 50 par 50 microlitres. À ce stade, les œufs peuvent être conservés à quatre degrés Celsius avant d'injecter les souris. Veillez à bien resuspendre complètement la solution contenant les œufs.Transférez la quantité souhaitée d'inoculum dans un tube de 14 millilitres à bouchon vissable et retournez le tube pour mélanger. Aspirez 200 microlitres d'œufs dans une aiguille d'alimentation de taille appropriée adaptée à la taille de l'animal, fixée à une seringue d'un millilitre. Saisissez la souris par la nuque et administrez les œufs par gavage oral.Replacer la souris infectée dans sa cage et laisser l'infection évoluer pendant 21 jours. Après 21 jours, utiliser une seringue non héparinisée pour prélever le sang des souris infectées par ponction cardiaque. Après l'euthanasie par dioxyde de carbone, les échantillons de sang peuvent être conservés à quatre degrés Celsius.Pour l'isolement du sérum et l'analyse des IgG et IgE spécifiques de tra par ELISA. Exposer la cavité abdominale de la souris comme décrit précédemment. Puis utiliser une pince pour extraire le cæcum à l’aide de ciseaux ou d’une autre pince.Pousser l'intestin grêle vers la droite afin d'exposer les ganglions lymphatiques mésentériques. Retirer délicatement les ganglions lymphatiques en prenant soin de ne pas sectionner les intestins, puis les placer dans un tube Falcon de 15 millilitres contenant deux millilitres de milieu. Les cellules des ganglions lymphatiques peuvent ensuite être cultivées in vitro avec le surnageant d'antigène S de quatre heures provenant des cultures de vers, afin d'analyser la réponse immunitaire cellulaire contre le parasite.Une fois les ganglions lymphatiques prélevés, exciser le cæcum et le côlon comme décrit précédemment, à l’aide de pinces, libérer les granulés fécaux du côlon distal et les placer dans un tube d’oxygène de deux millilitres ; les granulés peuvent être conservés à moins 20 degrés Celsius et analysés quant à leur teneur en protéines par immunotransfert (western blot) à l’aide de ciseaux. Prélever environ un centimètre de côlon proximal et le placer dans un tube contenant de l’ARN. Conserver ultérieurement à quatre degrés Celsius.Coupez environ cinq millimètres de l'extrémité du cæcum en tenant celle-ci avec une pince. Utilisez une seringue de trois millilitres et une aiguille de calibre 22 pour rincer l'échantillon avec du PBS. Transférez-le ensuite dans un tube conique de cinq millilitres à bouchon vissé contenant du paraldéhyde à 4 %.L'échantillon de caecum fixé au paraldéhyde peut être conservé à quatre degrés Celsius et utilisé pour une analyse histologique. Placer le reste du caecum dans une boîte de Pétri et le congeler à moins vingt degrés Celsius afin d'éliminer les vers. Pour faciliter le dénombrement des vers, décongeler le caecum et le placer dans une boîte de Pétri contenant environ cinq millilitres d'eau à l'aide de ciseaux.Ouvrir le caecum pour exposer la lumière et secouer afin de recueillir les matières fécales dans une boîte. Placer le caecum propre dans une nouvelle boîte de Pétri contenant de l'eau et utiliser des pinces courbes lisses pour prélever les cellules épithéliales intestinales. Transférer le caecum dans une autre boîte de Pétri contenant de l'eau et déchirer le tissu en petits morceaux.Observer les fèces, les cellules épithéliales intestinales et le tissu du caecum au microscope stéréoscopique, dénombrer les vers, les retirer au fur et à mesure du comptage et les placer dans une nouvelle boîte. Voici à quoi doivent ressembler les vers présents dans le caecum avant et après l'isolement, comme illustré ici. Après infection, les souris tragus mirrors black six parviennent à contrôler les parasites, tandis que les souris KR développent une charge parasitaire accrue.Des souris A KR tout aussi sensibles développent des taux nettement plus élevés d'IgG spécifique à TRA que les souris black six, comme déterminé par ELISA sérique. Dans cette expérience, une analyse par immunotransfert a révélé que la quantité de la protéine spécifique des cellules caliciformes, realm bêta, était augmentée dans les selles des souris black six, mais pas dans celles des souris A KR, après infection. Une analyse histologique du cæcum distal montre une hyperplasie des cellules caliciformes et une production de mucus chez les souris black six résistantes infectées par TRAs MOUs, mais pas chez les souris A KR sensibles.Après avoir visionné cette vidéo, vous devriez bien comprendre comment propager les œufs de trichine, infecter des souris expérimentales et prélever les tissus intestinaux, le mésentère, les ganglions lymphatiques entériques et le sang afin d'analyser l'infection chez des souris sensibles ou résistantes.

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JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie et infection

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