Caecale procédure Crevaison ligature

Bonjour, je m'appelle Miguel Toscano du laboratoire du Dr Dena, dans le département de Microbiologie et d'Hématologie de l'Université Temple. Aujourd'hui, nous allons vous montrer comment mettre en place le modèle d'injection intracalvarique et de ponction chez la souris de souche C57 Black 6. Nous utilisons ce modèle dans notre laboratoire pour imiter la septicémie humaine.

En substance, ce modèle consiste en une perforation du côlon qui permet le relâchement de matériel fécal dans la cavité péritonéale, provoquant ainsi une septicémie polymicrobienne et générant une réponse immunitaire exacerbée. Dans ce modèle, de nombreux organes et différents types cellulaires sont endommagés de façon irréversible, ce qui peut finalement entraîner la mort de l'animal.

Commençons. Anesthésier la souris. La première étape consiste à anesthésier l'animal par injection intrapéritonéale.

Un mélange, un pour un, de kétoamine et de xylazine. Pour éviter de se faire mordre par la souris et pour éviter de lui faire mal, il faut saisir la souris par la queue avec une main. De l'autre main, on appuie vers le bas contre le sol.

Ensuite, nous pouvons saisir la souris par l'arrière de la tête, puis la retourner sur le dos afin d'exposer l'abdomen. À l’aide d’une seringue à insuline de calibre 29, nous injectons de 20 à 30 microlitres d’anesthésique dans la cavité péritonéale. Pour préparer la souris à l’intervention, saisissez l’arrière de la souris et rasez son abdomen en appuyant sur la queue ou sur la patte de la souris.

Nous vérifions que la souris n'est pas sensible à la douleur, puis l'abdomen est désinfecté. D'abord en frottant avec une solution de Bétadine, suivie d'un essuyage avec une lingette d'alcool isopropylique pendant au moins une minute. Pour s'exercer à la laparotomie, nous soulevons la peau au milieu de l'abdomen avec la pince et pratiquons une petite incision d'environ un centimètre de longueur.

Ensuite, soulevez le périnée et pratiquez une autre petite incision afin d'exposer la cavité péritonéale. À l'aide de pinces courbes, maintenez la membrane péritonéale. Identifiez et exposez le caecum en le faisant passer à travers la membrane péritonéale.

Placez-le sur l'abdomen. Voici venu le moment de la ligature. C'est un facteur important.

Afin de déterminer la gravité du modèle, on peut moduler la sévérité de l'intervention. En fonction de l'emplacement de la ligature, les souris développeront une septicémie plus bénigne. Si la ligature est réalisée près de l'extrémité du caecum, une septicémie de gravité modérée si elle est faite au milieu, et une septicémie sévère si elle est effectuée près de la valve iléo-cæcale, la sévérité de l'intervention se reflétera par le pourcentage de mortalité.

Ne jamais ligaturer la valve iléo-cæcale. Effectuer maintenant la ligature à l’aide d’un fil de soie avec un nœud double afin de bien serrer. Tenir le cæcum et percer soigneusement près du site de ligature, puis pratiquer une autre perforation plus proche de l’extrémité du cæcum. La membrane du cæcum est molle et se perce très facilement.

En utilisant des aiguilles de différentes épaisseurs et en effectuant une ou deux perforations, on peut également moduler la gravité du modèle. La méthode à perforation simple ou double présentée ici constitue une technique alternative à la perforation classique complète. L'avantage de la méthode à perforation simple ou double est qu'elle permet de mieux contrôler la quantité de matières fécales expulsées lorsque l'abcès est comprimé.

Retenez le caecum avec deux doigts et extrayez délicatement le caecum pour prélever une très petite quantité de matière fécale. Fermeture de la laparotomie : soulevez alors le péritoine et replacez soigneusement le caecum dans la cavité péritonéale.

Soit extrêmement prudent pour éviter tout piquage accidentel du cæcum avec la pince ; l'utilisation d'une pince plus grande est recommandée. Il est maintenant temps de fermer la cavité péritonéale. À l’aide d’un fil de soie, il est très important de bien s’assurer qu’elle est parfaitement refermée.

Nous commençons par un côté de la plaie où nous faisons un nœud. Continuer la suture jusqu'au côté opposé en passant la soie sous la boucle du point précédent. Pour fermer la peau, nous pouvons utiliser des agrafes de Mitchell ou des agrafes réflexes, à l’aide de l’outil approprié pour fermer les agrafes.

Placer autant de pinces que nécessaire pour s'assurer que la plaie est fermée. Réanimer les souris en injectant par voie sous-cutanée un millilitre de solution saline préchauffée. À l’aide d’une aiguille de calibre 25, cette mesure de réhydratation liquide induira la phase hyperdynamique du sepsis, mettant ainsi fin à la procédure.

Placer la souris sous une lampe chauffante à infrarouge, ou alternativement sur un tapis chauffant, jusqu’à ce qu’elle se réveille de l’anesthésie. Placer de la nourriture et de l’eau sur le sol de la cage et surveiller les animaux toutes les huit à douze heures afin de détecter des signes de maladie. Injecter de la buprénorphine par voie sous-cutanée pour l’analgesie postopératoire.

Un autre analgésique à utiliser est le Tramadol. Les signes de sepsie, ainsi que les symptômes de sepsie, sont la fièvre, la léthargie, le pelo, l'érection, la diarrhée, le regroupement et le malaise. Les animaux très malades présentent une diminution sévère de la température corporelle et bougent à peine afin d'éviter la souffrance.

Les animaux doivent être euthanasiés à ce stade H. Voici donc comment nous réalisons le modèle de ligature en forme de croissant et de ponction. Nous espérons que cette démonstration de la procédure vous a été utile pour vos recherches avant le début de votre étude animale. Nous vous recommandons vivement d'utiliser des cerveaux anciens ou inutilisés pour vous entraîner, afin d'établir le degré de gravité approprié pour vos expériences en modifiant la longueur de la ligature, l'épaisseur de l'aiguille et le nombre de ponctions.

Sur ce, au revoir.