Name: Intraluminale Occlusion Artère cérébrale moyenne (MCAO) Modèle pour lAVC ischémique avec guidage laser Doppler chez la souris (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-05-08T14:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 1 s
Description: Découvrez le modèle d'occlusion intraluminale de l'artère cérébrale moyenne (MCAO) pour l'étude de l'AVC ischémique chez la souris. Cette méthode utilise la flowmétrie laser Doppler pour surveiller le flux sanguin cérébral.

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Ce protocole a été approuvé par le soin des animaux et du Comité institutionnel d'utilisation (IACUC) à l'Université de Floride et est en conformité avec le «principe de protection des animaux de laboratoire" (NIH publication n ° 86-23, révisée en 1985). 1. Matériels <ol><li> Animaux: Homme souris C57BL / 6 (Harlan Laboratories, Indianapolis, IN, USA) pesant 20-26 grammes au moment de la chirurgie. </li><li> Anesthésie: <ol><li> Appareil d'anesthésie: l'anesthésie par inhalation système VetEquip (VetEquip Inc, Pleasanton, CA, USA). </li><li> Anesthésique par inhalation: L'isoflurane (Baxter Pharmacie, Deerfield, IL). </li></ol></li><li> Outils chirurgicaux: SuperCut Ciseaux Iris, droites (World Precision Instruments, Inc, Sarasota, Floride, Etats-Unis); Vannas micro-ciseaux, droites (World Precision Instruments, Inc, Sarasota, Floride, Etats-Unis); Dumont forceps (pointe fine, 45 ° pointes coudées, World Precision Instruments, Inc, Sarasota, Floride, Etats-Unis) et unité de coagulation bipolaire (Salutgh Fréquence Dessiccateur 900, World Precision Instruments, Inc, Sarasota, Floride, USA), clip navire micro (World Precision Instruments, Inc, Sarasota, Floride, Etats-Unis) </li><li> Fournitures chirurgicales: Conseils de coton stériles; lingettes, éponges de gaze; Suture (7-0 suture de soie, Ethicon, Inc, Somerville, NJ, USA); adhésif tissulaire (Vetbond, 3M Company, St Paul, MN, USA); lavage chirurgical des mains : solution saline Bethadine, éthanol à 70%, et de 0,9% stérile; Pommade ophtalmique (Pommade Vétérinaire Puralube, Pharmaderm, Melville, NY, USA). </li><li> Occlusion de suture préparation pour MCAO: <ol><li> Filament pour le MCA occlusion: 7-0 suture chirurgicale monofilament en nylon (Ethicon, Inc, Somerville, NJ, USA). </li><li> Source de chaleur pour émousser la pointe de suture (Unité cautérisation thermique, World Precision Instruments, Inc, Sarasota, Floride). </li><li> Caoutchouc de silicone liquide (RTV Silicone adhésif, World Precision Instruments, Inc, Sarasota, Floride, USA). </li></ol></li><li> Surgical / dissection microscope (Microscope stéréo Leica MZ6). <ol><li> Fibre optiqueéclairage (éclairage fibre optique FO1-150, Techniquip Corp, Livermore, CA, USA). </li></ol></li><li> Laser Doppler (PeriFlux System 5000, Perimed, Stockholm, Suède). <ol><li> Flexible micropointe (MT B500-0 Microtip droite, Perimed, Stockholm, Suède) </li></ol></li><li> Paramètres de température: <ol><li> Rectale moniteur températures (BAT-12, World Precision Instruments, Inc, Sarasota, Floride). </li><li> Couverture thermique (T / PUMP, TP600, Gaymar, NY, USA). </li></ol></li><li> La coloration et la mesure quantitative de l'infarctus du volume: <ol><li> Solution à 2% de chlorure de 2,3,5-triphényltétrazolium (2% TTC, Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA). </li><li> Souris cerveau matrice trancheuse (Zivic-Miller Lab., Inc, Allison Park, Pennsylvanie, Etats-Unis). </li><li> Appareil photo numérique (V1253, Kodak Co., Rochester, NY, USA). </li><li> Image J logiciels (ImageJ 1.42q logiciel, US National Institutes of Health, Bethesda, MA, USA). </li></ol></li></ol> 2. Pré-chirurgicaux étapes <ol><li> Avant la chirurgie, les souris sont logés sous un 12:12 lumière / obscurité cycle avec libre accès à l'eau et rongeur. </li><li> Sutures pour MCAO sont préparés par émousser 1-2mm de la pointe de fil de suture avec de la chaleur et le revêtement 3-4mm de suture à partir de son arbre de pointe de caoutchouc de silicone liquide, ce qui lui permet de sécher (7-0; diamètre de pointe, 0.20-0.25 mm; revêtement longueur, 3-4mm, longueur de suture 11-13mm). Stérilité doit être conservé dans toutes les étapes mentionnées ci-dessus. </li><li> Après avoir pesé la souris, l'anesthésie est induite avec 4% d'isoflurane dans une chambre d'admission et maintenue pendant la procédure avec l'isoflurane 1,5-2% à 30% d'O 2 et 70% de N 2 O mélange de gaz par l'intermédiaire d'un masque facial. </li><li> La souris est placée dans une position couchée sur un tampon de gaze placé sur une surface de fonctionnement à température contrôlée (couverture thermique); la fourrure tête est rasée. </li><li> Pommade ophtalmique lubrifiant est appliqué sur les deux yeux et les paupières sont fermées pour empêcher le dessèchement des yeux lors de la surprocessus gique. </li><li> Une incision médiane (1 cm) est faite sur la peau qui recouvre la calotte crânienne de la ligne nucale supérieure à la nasion et la peau est tirée latéralement d'apposer une microsonde flexible (MT B500-0 Microtip droite; 0,5 mm de diamètre). La micropointe est placé perpendiculairement à la surface du crâne pariétal droit (1 mm et 5 mm postérieure latérale au bregma) pour contrôler le débit sanguin dans le territoire MCA par vélocimétrie laser. </li><li> Assurez-vous que la micro-pointe flexible est attaché au crâne bien avant que l'animal est tourné vers une position couchée. Cou de l'animal est placé sur un tampon doux et son nez est maintenu en cône du nez de l'appareil d'anesthésie. Cela se traduira par avoir assez d'espace pour la micropointe flexible. </li><li> Une sonde de température rectale est insérée pour maintenir une température constante pour animaux noyau de 37 ± 0,5 ° C. </li><li> Les deux pattes de devant et pattes postérieures sont collées à la surface plate-forme d'exploitation, et la queue est collé sur le tube rectal. </li> &lt;/ Ol&gt; 3. MCA occlusion chirurgie: <ol><li> Sous le microscope opératoire, une incision médiane du cou est faite avec des ciseaux entre le manubrium et la mâchoire en soulevant délicatement la peau lâche. </li><li> Les paires de glandes sous-maxillaires sous-jacents sont carrément divisée, avec la glande gauche laissés sur place. La glande sous-maxillaire droite est rétracté crânienne et sécurisé avec le muscle sterno. </li><li> La division exposé du muscle omo-hyoïdien recouvrant la gaine carotidienne est soigneusement divisée avec des micros. </li><li> L'artère carotide commune droite (CCA) est soigneusement séparée et isolée du nerf vague et de sa gaine (situé latérale CCA). </li><li> Ci-après, les 2 méthodes chirurgicales qui ont été fréquemment utilisés pour effectuer l'occlusion MCA divergent: </li></ol> Koizumi 4 Méthode <ol class="lroman" type="i"><li> Trois sutures lâches col de soie (7-0) sont préparés autour du droit du CCA. </li><li l carotide externe est identifi isol et caut en aval de la bifurcation il peut ensuite divis par des micro-ciseaux. pour les dommages involontaires p sur le site puissance devrait fix utilisant bouton d ceci coh tous><li> Une tension suffisante est appliquée à la suture col le plus proximal sur la DPA à occlure le débit sanguin (ligature permanente). L'occlusion flux est vérifiée par une baisse de ~ 50% des valeurs de base perfusion corticale. </li><li> Puis un clip récipient est placé juste avant la bifurcation CCA afin d'éviter un flux rétrograde au moment de l'artériotomie. </li><li> Une artériotomie est effectuée entre la ligature et suture proximale de la pince sur le récipient avec des micro-CCA ciseaux (plus proche de ligation). </li><li> La chaleur émoussée revêtu de silicone 7-0 suture nylon est introduite par l'artériotomie et avancé jusqu'à ce qu'il atteigne le clip pour vaisseau. Les 2 autres sont lâches sutures col gentment serrée autour de la CCA entre la artériotomie et le clip navire pour éviter le retour de débit de fuite à travers la CCA, avec prudence pour ne pas traumatiser la paroi artérielle, puis le clip navire est retirée. </li></ol> Longa 3 Méthode <ol class="lalpha" type="a"><li> Le CEA est identifié, disséqué autant que possible (près de sa bifurcation dans les artères linguale et maxillaire), cautérisée (avec alimentation mis à 1), et divisé par des micro-ciseaux. </li><li> Deux sutures lâches col de soie (7-0) sont préparés dans le proximale ICA juste au-dessus de la bifurcation du CCA. </li><li> Le CCA est temporairement fermé avec un clip navire. L'occlusion flux est vérifiée par une baisse de ~ 50% des valeurs de base perfusion corticale. </li><li> Puis l'ICA est temporairement fermée avec un clip récipient au-dessus des deux sutures lâches collier pour éviter un écoulement rétrograde au moment de l'artériotomie. </li><li> Une artériotomie est réalisée à l'aide de micro-ciseaux dans le proche CEA reflète à la souche. </li> &lt;li&gt; La chaleur émoussée revêtu de silicone 7-0 suture nylon est introduite par l'artériotomie dans CEA et avancé jusqu'à ce qu'il atteigne le clip pour vaisseau appliqué à l'ICA. Les 2 sutures lâches col proximale de l'ICA sont légèrement resserré autour de la partie proximale ICA pour éviter l'écoulement du sang reflux par l'ICA, avec une attention pour ne pas traumatiser la paroi artérielle, puis le clip navire est retirée. </ol> Le reste de la procédure est largement convergentes: <ol><li> Le fil de suture est en train d'occlusion avancé à travers l'artère carotide interne (ACI) en direction de la base du crâne jusqu'à ce qu'une légère résistance se fait sentir. Une baisse concomitante de la valeur du débit sanguin cérébral en pourcentage (= 80%) par rapport à la valeur initiale est confirmée par laser Doppler. Les 2 points de suture cols sont serrés autour du filament inséré. </li><li> Pour transitoires expériences ischémie cérébrale, la suture occlusive est retirée doucement au bout de 45 minutes. Ce point peut être modifié de temps pour divers objectifs expérimentaux. </li><li> After retirer le filament de suture, le site artériotomie est fermé pour éviter une hémorragie post-opératoire. Dans la méthode de M. Koizumi, il s'agit de serrer fermement les sutures collier autour du CCA. En technique Longa, le site artériotomie à la base du CEA est cautérisé, puis les fils de suture à la collerette proximale ICA sont desserrées et retirées à rétablir le flux carotidien. </li><li> Pour fermer l'incision, la glande sous-maxillaire et SMC sont posés sur le champ opératoire. Les bords de la plaie sont ensuite estimés avec de la colle tissulaire dans les zones cervicales et le cuir chevelu. Alternativement, un fil résorbable ou une agrafe métallique peut être utilisé pour fermer la plaie surtout quand survie à long terme de l'animal est destiné. </li><li> Après la fermeture de l'incision, l'animal reçoit 1 ml de solution saline chaude voie sous-cutanée à la reconstitution du volume. Une dose d'analgésiques appropriés (c.-à buprénorphine à 0,05-0,1 mg / kg) doit être utilisé pour réduire la douleur et l'inconfort des animaux au cours de la période de récupération. L'animal est retiré de la salle d'opération et placé dans une zone de récupération à chaud / cage pour éviter l'hypothermie, avec libre accès facile et à l'alimentation en eau douce et. </li></ol> 4. Post-Op évaluation neurologique Après que l'animal ne reprenne conscience totale, les déficits neurologiques peut être évaluée par une échelle simple (échelle de cinq points) comme suit 3: <ol start="0"><li> pas de déficits observables </li><li> non-renouvellement de patte controlatérale (léger déficit neurologique focal) </li><li> évoluent dans une direction controlatéral à un infarctus (déficit neurologique focal modéré) </li><li> tomber dans une direction controlatéral à un infarctus sévère (déficit neurologique focal) </li><li> diminution du niveau de conscience sans mouvement spontané </li></ol> 5. La coloration et la mesure quantitative du volume de l'infarctus cérébral <ol><li> Après 24 heures de reperfusion MCA, la souris survivant est pesé, profondément anesthésiés avec isoflorane 4%,et sacrifié selon le protocole approuvé. </li><li> Le cerveau est soigneusement enlevé et placé dans un cerveau de souris matrice trancheuse, et le cerveau tout entier est sectionnée au niveau coronaire intervalles de 2 mm. </li><li> Les sections sont immergés dans 2% TTC en tampon phosphate salin (PBS) à 37 ° C pendant 20 minutes. Après coloration TTC, infracted zone est indiquée par un blanc (non coloré) les tissus adjacents à la brique rouge (viable) du tissu (figure 1). </li><li> Des coupes sériées sont photographiés avec un appareil photo numérique et la zone de l'infarctus est mesurée à l'aide du programme J image. </li><li> La zone de l'infarctus (blanc, sans tache), la zone de l'hémisphère ipsilatéral (blanc et rouge brique, taché), et la zone de l'hémisphère controlatéral (rouge brique, teinté) sont mesurées pour chaque section. Le volume est calculé en faisant la somme des zones représentatives de toutes les sections et en multipliant par l'épaisseur de coupe. Après correction pour l'œdème, le volume de l'infarctus est calculé comme suit 9: Corrigezed infarctus du volume (CIV),% = [volume hémisphère contralatéral - (volume hémisphère ipsilatéral - volume de l'infarctus)] volume hémisphère / controlatéral x 100 </li></ol> 6. Les résultats représentatifs Après l'occlusion et la reperfusion du MCA via gauche CCA pour établir ischémie cérébrale transitoire, les animaux sont sacrifiés et leur cerveau en coupe coronale sont colorées avec TTC pour évaluer le volume de l'infarctus (figure 1). <img src="/files/ftp_upload/2879/2879fig1.jpg" alt="Figure 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figure 1"> Figure 1. TTC teinté sériées coronales du cerveau (2 mm) de souris soumises à une occlusion MCA. </ol>

<ol><li><a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recommendations+on+stroke+prevention%2C+diagnosis%2C+and+therapy.+Report+of+the+WHO+Task+Force+on+Stroke+and+other+Cerebrovascular+Disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%3B+a+journal+of+cerebral+circulation%22%5BJournal%5D)">Recommendations on stroke prevention, diagnosis, and therapy. Report of the WHO Task Force on Stroke and other Cerebrovascular Disorders.</a> Stroke; a journal of cerebral circulation. 20, 1407-1431 (1989).</li>
<li>Lloyd-Jones, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+disease+and+stroke+statistics--2009+update%3A+a+report+from+the+American+Heart+Association+Statistics+Committee+and+Stroke+Statistics+Subcommittee%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Heart disease and stroke statistics--2009 update: a report from the American Heart Association Statistics Committee and Stroke Statistics Subcommittee.</a> Circulation. 119, e21-e181 (2009).</li>
<li>Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reversible+middle+cerebral+artery+occlusion+without+craniectomy+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%3B+a+journal+of+cerebral+circulation%22%5BJournal%5D)">Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats.</a> Stroke; a journal of cerebral circulation. 20, 84-91 (1989).</li>
<li>Koizumi, J., Yoshida, Y., Nakazawa, T., Ooneda, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+studies+of+ischemic+brain+edema.+I.+A+new+experimental+model+of+cerebral+embolism+in+rats+in+which+recirculation+can+be+introduced+in+the+ischemic+area%5BTitle%5D)+AND+%22Jpn+J+Stroke%22%5BJournal%5D)">Experimental studies of ischemic brain edema. I. A new experimental model of cerebral embolism in rats in which recirculation can be introduced in the ischemic area.</a> Jpn J Stroke. 8, 1-8 (1986).</li>
<li>Clark, W. M., Lessov, N. S., Dixon, M. P., Eckenstein, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monofilament+intraluminal+middle+cerebral+artery+occlusion+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Neurol+Res%22%5BJournal%5D)">Monofilament intraluminal middle cerebral artery occlusion in the mouse.</a> Neurol Res. 19, 641-648 (1997).</li>
<li>Fujii, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strain-related+differences+in+susceptibility+to+transient+forebrain+ischemia+in+SV-129+and+C57black%2F6+mice.+%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%3B+a+journal+of+cerebral+circulation%22%5BJournal%5D)">Strain-related differences in susceptibility to transient forebrain ischemia in SV-129 and C57black/6 mice. </a> Stroke; a journal of cerebral circulation. 28, 1805-1810 (1997).</li>
<li>Bederson, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+2%2C3%2C5-triphenyltetrazolium+chloride+as+a+stain+for+detection+and+quantification+of+experimental+cerebral+infarction+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%3B+a+journal+of+cerebral+circulation%22%5BJournal%5D)">Evaluation of 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride as a stain for detection and quantification of experimental cerebral infarction in rats.</a> Stroke; a journal of cerebral circulation. 17, 1304-1308 (1986).</li>
<li>Qi, X., Hosoi, T., Okuma, Y., Kaneko, M., Nomura, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sodium+4-phenylbutyrate+protects+against+cerebral+ischemic+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Sodium 4-phenylbutyrate protects against cerebral ischemic injury.</a> Mol Pharmacol. 66, 899-908 (2004).</li>
<li>Barone, F. C., Knudsen, D. J., Nelson, A. H., Feuerstein, G. Z., Willette, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+strain+differences+in+susceptibility+to+cerebral+ischemia+are+related+to+cerebral+vascular+anatomy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Mouse strain differences in susceptibility to cerebral ischemia are related to cerebral vascular anatomy.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 13, 683-692 (1993).</li>
<li>Tureyen, K., Vemuganti, R., Sailor, K. A., Dempsey, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ideal+suture+diameter+is+critical+for+consistent+middle+cerebral+artery+occlusion+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Ideal suture diameter is critical for consistent middle cerebral artery occlusion in mice.</a> Neurosurgery. 56, 196-200 (2005).</li>
<li>Barber, P. A., Hoyte, L., Colbourne, F., Buchan, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temperature-regulated+model+of+focal+ischemia+in+the+mouse%3A+a+study+with+histopathological+and+behavioral+outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%3B+a+journal+of+cerebral+circulation%22%5BJournal%5D)">Temperature-regulated model of focal ischemia in the mouse: a study with histopathological and behavioral outcomes.</a> Stroke; a journal of cerebral circulation. 35, 1720-1725 (2004).</li>
<li>Kapinya, K. J., Prass, K., Dirnagl, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isoflurane+induced+prolonged+protection+against+cerebral+ischemia+in+mice%3A+a+redox+sensitive+mechanism%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroreport%22%5BJournal%5D)">Isoflurane induced prolonged protection against cerebral ischemia in mice: a redox sensitive mechanism?</a> Neuroreport. 13, 1431-1435 (2002).</li>
</ol>

Les auteurs déclarent n&#39;avoir aucun conflit d&#39;intérêts.

Le modèle MCAO est un modèle établi qui reproduit l&#39;ischémie cérébrale chez les espèces murines. Ce modèle a été utilisé pour la première chez les rats et par la suite adaptée à la souris. Éviter craniectomie pour éliminer l&#39;influence de la manipulation chirurgicale sur la perméabilité barrière hémato-encéphalique et la pression intracrânienne est un avantage de cette technique. Cependant, de nombreuses variables, comme la souche des différences liées à la taille 10, la suture pointe 11, la...

<table border="1"><tbody><tr><th> Nom du réactif </th><th> Type </th><th> Entreprise </th><th> Numéro de catalogue </th><th> Commentaires (optionnel) </th></tr><tr><td> Des souris mâles C57BL / 6 </td><td> Animal </td><td> Harlan Laboratories, Indianapolis, IN, USA </td><td></td><td> 20-26 grs </td></tr><tr><td> Microscope à dissection </td><td> Microscope </td><td> Microscope stéréo Leica MZ6 </td><td></td><td> Zoom 6.3:1 </td></tr><tr><td> Fibre optique d&#39;éclairage </td><td> Illuminateur </td><td> Techniquip Corp, Livermore, Californie, USA </td><td></td><td> FO1-150 </td></tr><tr><td> L&#39;isoflurane </td><td> Anesthésie </td><td> Pharmacie Baxter, Deerfield, IL </td><td> 1001936060 </td><td></td></tr><tr><td> SuperCut ciseaux Iris, droit </td><td> Outil chirurgical </td><td> Mondiale Precision Instruments, Inc, Sarasota, Floride, USA </td><td> 14218 </td><td></td></tr><tr&gt; <td> Vannas micro-ciseaux, droit </td><td> Outil chirurgical </td><td> Mondiale Precision Instruments, Inc, Sarasota, Floride, USA </td><td> 14003 </td><td></td></tr><tr><td> Dumont pointe fine pince </td><td> Outil chirurgical </td><td> Mondiale Precision Instruments, Inc, Sarasota, Floride, USA </td><td> 503290 </td><td></td></tr><tr><td> Clip navire </td><td> Outil chirurgical </td><td> Mondiale Precision Instruments, Inc, Sarasota, Floride, USA </td><td> 14120 </td><td></td></tr><tr><td> Dessiccateur à haute fréquence 900 </td><td> Outil chirurgical </td><td> Mondiale Precision Instruments, Inc, Sarasota, Floride, USA </td><td> 500397 </td><td></td></tr><tr><td> 7-0 suture chirurgicale monofilament en nylon </td><td> Suturer </td><td> Ethicon, Inc, Somerville, New Jersey, USA </td><td> 1647G </td><td> Suture d&#39;occlusion </td></tr><tr><td> 7-0 suture de soie chirurgicale </td><td> Suturer </td><td> Ethicon, Inc, Somerville, New Jersey, États-UnisA </td><td> 7733G </td><td> Pour la ligature de suture </td></tr><tr><td> Adhésif silicone RTV </td><td> Le caoutchouc de silicone </td><td> Mondiale Precision Instruments, Inc, Sarasota, Floride, USA </td><td> 1571 </td><td></td></tr><tr><td> Vetbond </td><td> Adhésif tissulaire </td><td> 3M Company, St Paul, MN, USA </td><td> 70200746587 </td><td></td></tr><tr><td> Pommade Vétérinaire Puralube </td><td> Pommade ophtalmique </td><td> Pharmaderm, Melville, NY, USA </td><td></td><td></td></tr><tr><td> La buprénorphine hydrochlorode </td><td> Analgésiques </td><td> Hospira Inc, Lake Forest, IL, USA </td><td> NDC 0409-2012-32 </td><td></td></tr><tr><td> Unité cautérisation thermique </td><td></td><td> Mondiale Precision Instruments, Inc, Sarasota, Floride, USA </td><td> 501292 </td><td></td></tr><tr><td> PeriFlux System 5000 </td><td> TCD débitmétrie </td><td> Perimed, Stockholm, Suede </td><td></td><td></td></tr><tr><td> BAT-12 </td><td> Thermomètre rectal </td><td> Mondiale Precision Instruments, Inc, Sarasota, Floride, USA </td><td> BAT-12R </td><td></td></tr><tr><td> T / PUMP, TP600 </td><td> Couverture thermique </td><td> Gaymar, NY, USA </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 2,3,5-triphényltétrazolium </td><td> Réactif </td><td> Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA </td><td> T8877 </td><td></td></tr><tr><td> Souris cerveau matrice trancheuse </td><td> Cerveau trancheuse </td><td> Zivic-Miller Lab., Inc, Allison Park, Pennsylvanie, Etats-Unis </td><td> BSMAS001-1 </td><td></td></tr></tbody></table>

intraluminale occlusion artère cérébrale moyenne (mcao) modèle pour l&#39;avc ischémique avec guidage laser doppler chez la souris

Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

L&#39;AVC est la troisième cause de décès et la première cause de handicap dans le monde, avec un coût estimé à près de 70 milliards de dollars aux États-Unis en 2009 1,2. Le intraluminale de l&#39;artère cérébrale occlusion (MCAO) modèle a été développé par Koizumi 4 en 1986 pour simuler cette percutante pathologie humaine chez le rat. Une modification de la méthode MCAO a ensuite été présenté par Longa 3. Les deux techniques ont été largement utilisées pour identifier les mécanismes moléculaires de lésions cérébrales résultant d&#39;un accident ischémique cérébral et modalités thérapeutiques potentielles 5. Cette méthode relativement non invasive chez le rat a été étendu pour utiliser la souris pour tirer parti des souches transgéniques et knock-out 6,7. Pour modéliser une ischémie cérébrale focale, une suture intraluminale est avancé par l&#39;artère carotide interne pour occlure la base de la MCA. Retrait de la suture après une période de temps spécifiée imite reperfusion spontanée, mais la suture peutégalement être maintenue en permanence. Cette vidéo sera de démontrer les deux grandes approches pour effectuer la procédure intraluminale MCAO chez la souris de façon progressive, ainsi que de fournir un aperçu des inconvénients potentiels et les pièges. Le tissu cérébral ischémique seront ensuite colorées par le chlorure de 2,3,5-triphényltétrazolium (CTT) pour évaluer l&#39;étendue de l&#39;infarctus cérébral 8.

Le intraluminale de l&#39;artère cérébrale occlusion (MCAO) est le modèle le plus fréquemment utilisé chez les modèles expérimentaux ischémiques AVC. Ici, nous allons démontrer tout le modèle en détail avec le guide de Laser Doppler, et ses résultats représentatifs.

Intraluminale Occlusion Artère cérébrale moyenne (MCAO) Modèle pour l&#39;AVC ischémique avec guidage laser Doppler chez la souris

L'accident vasculaire cérébral (AVC) est la troisième cause de décès et la première cause d'invalidité dans le monde, avec un coût estimé à près de 70 milliards de dollars aux États-Unis...

Dans cet article vidéo, nous présentons un modèle murin d'accident vasculaire cérébral ischémique connu sous le nom d'occlusion de l'artère cérébrale moyenne ou MCAO. Dans la méthode initiale d'occlusion de l'artère cérébrale moyenne par fil, un fil émoussé est introduit par l'artère carotide commune pour occlure l'artère cérébrale moyenne. Cette méthode entraîne une occlusion permanente de l'artère carotide commune.Une modification méthodologique de Longa permet d'accéder à l'artère cérébrale moyenne par l'artère carotide externe. Cette méthode préserve la fonction de la carotide commune et de sa circulation distale parmi les modèles expérimentaux d'accident vasculaire cérébral ischémique. Le modèle d'occlusion par filament intraluminal de l'artère cérébrale moyenne chez le rat et la souris est l'un des modèles les plus fréquemment utilisés ; depuis sa première description chez le rat, plusieurs modifications du modèle initial ont été publiées, la modification de Longa étant actuellement la variante la plus répandue.Ce modèle est moins invasif et permet d'induire facilement une ischémie permanente ou transitoire de manière contrôlée. Le modèle d'occlusion de l'artère cérébrale moyenne par filament intraluminal consiste à insérer un monofilament dans l'artère carotide interne et à le faire progresser jusqu'à ce qu'il bloque le flux sanguin vers l'artère cérébrale moyenne. Ce modèle provoque des infarctus reproductibles dans le territoire de l'artère cérébrale moyenne et permet une reperfusion après le retrait du fil.La taille de l'infarctus semble être influencée par de nombreux facteurs spécifiques dans cette technique, tels que le diamètre de la suture, le revêtement de la suture au silicone ou à la polyol lysine, ou encore la longueur d'insertion du filament lui-même. Dans cette vidéo, nous montrerons comment réaliser ce modèle étape par étape, ainsi que la manière d'éviter bon nombre des pièges et inconvénients potentiels liés à l'utilisation de cette méthode. Une suture en nylon monofilament 7,0 sera utilisée pour l'occlusion de l'artère cérébrale moyenne.L'extrémité du fil de nylon doit être émoussée en l'approchant d'une source de chaleur. L'extrémité émoussée doit être droite et lisse, d'une longueur d'environ un à deux millimètres. Après avoir émoussé l'extrémité, le fil doit être coupé à une longueur totale d'environ 11 à 13 millimètres.L'extrémité émoussée du fil est trempée dans du silicone jusqu'à ce que trois à quatre millimètres de l'extrémité soient recouverts, puis on laisse sécher. Toutes les étapes de préparation du fil doivent être réalisées en conditions stériles. Après avoir pesé la souris, l'anesthésie est induite avec 4 % d'isoflurane dans une chambre d'induction.La souris est placée en position prona sur un morceau de gaze posé sur une couverture thermique. Afin de maintenir une température corporelle centrale de 37 degrés, l'anesthésie est maintenue pendant la procédure à l'aide d'un masque facial. La tête rasée est nettoyée à l'alcool, au Bétadine puis à nouveau à l'alcool.Une incision d'un centim&egrave;tre est pratiqu&eacute;e dans la peau afin d'exposer le cr&acirc;ne un millim&egrave;tre en arri&egrave;re et cinq millim&egrave;tres lat&eacute;ralement par rapport au bgma. Une microsonde flexible est fix&eacute;e perpendiculairement &agrave; la surface du pari&eacute;tal droit pour surveiller le d&eacute;bit sanguin dans le territoire de l'art&egrave;re c&eacute;r&eacute;brale moyenne par imagerie du flux Doppler laser.En replaçant l'animal en position supine, une incision médiane du cou est réalisée à l’aide de ciseaux entre le manubrium et la mâchoire. Les glandes sous-maxillaires appariées sont séparées par dissociation pour exposer les structures sous-jacentes : le muscle digastrique, le muscle sterno-cléido-mastoïdien et la trachée. Un écarteur en forme de triangle permettant de dégager ces structures, ainsi qu'une dissection plus poussée, mettent au jour l'artère carotide commune, le nerf vague et la veine jugulaire interne. L'artère carotide commune se divise ensuite en artère carotide externe et artère carotide interne.L'artère occipitale peut également être observée en partant de la région de bifurcation. Dans la méthode de COE, l'artère carotide commune proximale est soigneusement dissociée et isolée du nerf vague. Trois ligatures en collier lâches sont préparées autour de l'artère carotide commune.Une attention particulière doit être portée afin que le nerf vague ne soit pas pris dans le point de suture. L'artère carotide externe est identifiée et isolée. Elle est ensuite cautérisée à deux ou trois millimètres de la bifurcation.La suture du collier le plus proximal sur l'artère carotide commune est serrée pour obstruer de façon permanente le flux sanguin. L'occlusion du flux est confirmée par une diminution d'environ 50 % par rapport aux valeurs de perfusion corticale de base. Les extrémités libres de la suture sont coupées. Une pince vasculaire est placée juste avant la bifurcation de la carotide commune afin d'éviter un flux sanguin rétrograde.Ensuite, une artériotomie est réalisée entre le clip vasculaire et la ligature à l’aide de ciseaux microchirurgicaux. Cela permet d’introduire le fil chauffé obtus dans la carotide commune et de le faire progresser jusqu’à ce qu’il atteigne le clip vasculaire. Les deux autres fils de ligature restants sont ensuite serrés délicatement afin d’éviter tout reflux sanguin par la carotide commune.Le clip du vaisseau est retiré et la suture émoussée est doucement avancée dans l'artère carotide interne. Jusqu'à ce qu'une résistance légère soit ressentie sur l'affichage Doppler, une diminution d'environ 80 % par rapport à la valeur de base est obtenue. Les deux fils de ligature sont solidement serrés afin d'éviter tout saignement rétrograde.La souris peut désormais être laissée dans un état d'ischémie pendant une période appropriée. Pour simuler la reperfusion, les sutures obstruantes sont retirées après un intervalle approprié. Une augmentation soudaine de la lecture Doppler indique que le flux sanguin collatéral a été rétabli.Le point de suture est entièrement retiré, et les deux points de suture du collier sont complètement serrés et coupés selon la méthode longue. Une voie différente peut être utilisée pour oblitérer l'artère cérébrale moyenne. Tout d'abord, il faut identifier, isoler et cautériser l'artère carotide externe le plus distalement possible, en laissant une longueur suffisante pour l'insertion du fil de suture.L'artère carotide externe est ensuite sectionnée et ses branches sont cautérisées et coupées également. Le moignon de l'artère carotide externe est rétracté. Deux points de suture lâches sont préparés autour de l'artère carotide interne proximale, juste au-dessus de la bifurcation carotidienne commune.L'artère carotide commune est fermée temporairement à l'aide d'un clip vasculaire. Ceci entraîne une baisse des valeurs de perfusion d'environ 50 % juste en aval de la bifurcation. L'artère carotide interne est également clampée à l'aide d'un clip vasculaire et une artérotomie est réalisée près de l'extrémité du moignon rétracté de la carotide externe à l'aide de ciseaux microchirurgicaux.La suture chauffée est introduite par l'artère carotide primitive et la carotide externe, puis avancée jusqu'à ce qu'elle atteigne le clip vasculaire placé sur la carotide interne. Les deux ligatures libres autour de la carotide interne proximale sont doucement serrées afin d'éviter tout reflux du flux sanguin, sans toutefois comprimer suffisamment pour endommager la paroi artérielle. Ensuite, le clip vasculaire est retiré de l'artère carotide interne, l'artère tri-palatine se séparant alors de l'artère carotide interne.Alors que le fil est progressivement avancé en douceur, il convient de faire attention pour éviter de le rediriger vers l'intérieur. Une seconde baisse sur l'affichage du Doppler est observée. Lorsque le fil émoussé atteint l'artère cérébrale moyenne, les fils du collier doivent à nouveau être resserrés afin d'éviter tout saignement rétrograde.La souris peut désormais être maintenue dans un état d'ischémie pendant une période appropriée. Le retrait du point de suture obtus rétablit la circulation sanguine, comme l'indique l'augmentation du signal sur le moniteur Doppler. Une fois les sutures complètement retirées, le moignon de l'artère carotide externe est cautérisé.Pour prévenir les saignements postopératoires, il est essentiel de préserver la perméabilité de l'artère carotide commune. Les points de suture du ligature au niveau de l'artère carotide interne proximale sont ensuite desserrés et sectionnés, puis le clip placé sur l'artère carotide commune est retiré afin de rétablir le flux sanguin. Ce rétablissement est indiqué par un deuxième pic sur l'enregistrement Doppler.Une fois que la souris reprend conscience, les déficits neurologiques peuvent être évalués à différents moments selon une échelle à cinq points. Un score de zéro indique l'absence de déficit neurologique observable ; un score de un, correspondant à un accident vasculaire cérébral léger, se manifeste par l'incapacité à étendre une patte antérieure du côté opposé à l'hémisphère touché par l'accident vasculaire cérébral. Un score de deux, correspondant à un accident vasculaire cérébral modéré, se manifeste par des cercles effectués dans une direction opposée à celle de l'hémisphère lésé.Un score de trois, correspondant à un accident vasculaire cérébral sévère, se manifeste par une chute dans une direction opposée à l'hémisphère lésé. Une souris avec un score de quatre n'aura aucune activité motrice spontanée. Pour obtenir une mesure du volume de l'accident vasculaire cérébral, le cerveau est retiré du crâne à un moment approprié.Après la reperfusion, le cerveau est placé dans un coupeur matriciel et l'ensemble du cerveau est sectionné de manière coronaire. Tous les deux millimètres, le cervelet et les bulbes olfactifs sont écartés. Chaque section de deux millimètres est immergée dans une solution de TTC à 2 % pendant 20 minutes à 37 degrés à l'obscurité.Les images numériques des coupes cérébrales montrent que le TTC colore en rouge le tissu vivant et laisse le tissu infarctus d'une couleur blanc pâle pour chaque section. La zone d'infarctus, désignée ici par un, la zone de l'hémisphère ipsilatéral entier, désignée ici par deux, et la zone de l'hémisphère controlatéral, désignée ici par trois, sont toutes mesurées à l'aide du logiciel Image J. Après avoir mesuré les aires pour toutes les sections, les volumes respectifs peuvent être calculés en additionnant les valeurs des aires et en multipliant par l'épaisseur des tranches.Pour déterminer le volume d'infarctus corrigé pour l'œdème, on utilise la formule suivante. Ce volume est exprimé en pourcentage du volume hémisphérique controlatéral. Le modèle MCO fournit des résultats reproductibles.Toutefois, certains facteurs procéduraux peuvent interférer avec l'exécution de la technique. Le revêtement en silicone à l'extrémité du fil de suture est important car il lisse la surface du fil et réduit le risque d'abrasion endothéliale ou de perforation du vaisseau. En outre, le revêtement du fil peut être modifié afin de répondre à différents objectifs expérimentaux.Un revêtement dépassant trois à quatre millimètres à partir de l'extrémité obstruera l'artère proximale de l'artère cérébrale moyenne, augmentant ainsi le volume total d'infarctus. Les fils de suture colorés doivent être appliqués avec précaution afin de ne pas comprimer le nerf vague, et noués délicatement pour ne pas traumatiser la paroi AAL. La température corporelle de la souris peut influencer l'importance de l'infarctus ; elle doit donc être maintenue stable tout au long de la procédure.Nous espérons que la visualisation de cette vidéo vous aidera à vous orienter dans le processus chirurgical et vous fournira un point de départ solide pour vos propres expériences. Merci d'avoir regardé et bonne chance dans vos expériences.

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L'occlusion filamenteux de l'artère cérébrale moyenne est un modèle commun pour l'étude de l'AVC ischémique chez la souris.

Course de modélisation chez la souris - Moyen-occlusion artérielle cérébrale avec le modèle filamentaire

Nous démontrons dans la vidéo un procédé pour produire une occlusion de l'artère cérébrale moyenne chez des souris adultes en utilisant un monofilament intraluminale. Nous montrons aussi comment évaluer l'étendue de l'infarctus cérébral par le chlorure de 2,3,5-triphényltétrazolium (TTC) coloration.

Modèle murin d&#39;occlusion artère cérébrale moyenne

Le modèle de milieu intraluminal occlusion cérébrale chez la souris est présentée ici. L'étendue de l'infarctus cérébral est évaluée par un score neurologique et coloration au violet de crésyl, une alternative à la coloration TTC, offrant le grand avantage de tester en parallèle de nombreux marqueurs d'intérêt.

Modèle murin d&#39;MCAO intraluminale: Évaluation infarctus cérébral par coloration au violet de crésyl

Plusieurs modèles animaux d'ischémie cérébrale ont été développés pour simuler la condition humaine d'accident vasculaire cérébral. Ce protocole décrit l'endothéline-1 (ET-1) induit par une occlusion de l'artère cérébrale moyenne (MCAO) modèle d'AVC ischémique chez le rat. En outre, des considérations importantes, les avantages et les inconvénients de ce modèle sont discutées.

L&#39;endothéline-1 induite Moyen Modèle occlusion de l&#39;artère cérébrale pour AVC ischémique avec guidage laser Doppler chez le rat

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Afin de comprendre la physiopathologie de la course, il est important d'utiliser des modèles fiables. Ce document décrira l'un des modèles de course les plus fréquemment utilisés chez la souris, appelé le modèle milieu occlusion de l'artère cérébrale (MCAo) (également appelé le filament intraluminal ou d'un modèle de suture) avec reperfusion.

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Intraluminale Occlusion Artère cérébrale moyenne (MCAO) Modèle pour l'AVC ischémique avec guidage laser Doppler chez la souris

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