Préparation d’organoïdes à partir de tumeurs : un modèle tumoral 3D in vitro

Hachez le tissu tumoral en petits morceaux. Transférez les morceaux dans un tube avec tampon de digestion. Les fibres de collagène entourant les cellules se décomposent, dégradant la matrice des tissus. Ensuite, granulez les morceaux digérés et jetez la majeure partie du tampon de digestion. Agitez le tube pour briser la pastille.

La solution se compose maintenant d’amas de cellules de différentes tailles. Remettre en suspension les amas cellulaires dans une solution de trypsine et d’un inhibiteur de ROCK. La trypsine continue de décomposer la tumeur et l’inhibiteur empêche la mort cellulaire. À intervalles réguliers, pipetez la solution pour briser les amas et disperser les cellules. Ensuite, remettez les cellules en suspension dans une solution matricielle à la concentration appropriée.

Placez des gouttes de la solution dans une plaque de culture pour former des dômes matriciels. Placez les plaques à l’envers dans un incubateur et laissez la matrice se solidifier complètement. Ensuite, ajoutez le milieu de culture cellulaire et incubez, à l’endroit. La matrice fournit un échafaudage pour soutenir la croissance tridimensionnelle de l’organoïde.

Après le hachage, placez les morceaux de tumeur dans un tube de 15 millilitres de tampon de digestion pour une digestion de 1,5 à 2 heures à 37 degrés Celsius. À la fin de la digestion, sédimenter le tissu digéré par centrifugation et jeter le surnageant.

Agitez le tube pour détacher la pastille de cellule. Remettez les cellules en suspension dans 1 millilitre de trypsine préchauffée complétée par 10 micromolaires d’inhibiteur de Y-27632 ROCK pendant 5 minutes à 37 degrés Celsius.

À la fin de l’incubation, triturez la boue tissulaire cinq fois avec la pointe de pipette standard P1000. Remettez le tube dans le bain-marie pour une incubation et une trituration supplémentaires de 5 minutes.

Pour le placage en dôme matriciel, laver les cellules digérées dans 9 millilitres de milieu froid, puis collecter les cellules par centrifugation. Remettez les cellules en suspension dans 1 millilitre de milieu frais pour le comptage, et après le comptage, récupérez à nouveau les cellules par centrifugation. Diluez les cellules tumorales dans le volume approprié de matrice.

Déposez avec précaution 200 microlitres de solution de cellules matricielles dans chaque puits d’une plaque à 6 puits réchauffée à 55 degrés Celsius. Laissez les dômes se solidifier à température ambiante pendant 2 minutes avant de placer l’assiette à l’envers dans un incubateur à 37 degrés Celsius pendant 20 minutes.

Lorsque les dômes se sont complètement solidifiés, ajoutez 2 millilitres de milieu organoïde de la prostate complété par l’androgène R1881 et l’inhibiteur de ROCK dans chaque puits. Remettez la plaque dans l’incubateur de culture cellulaire.

• In vitro tumor models - Methods for studying tumor behavior in lab-controlled conditions.
• PeproTech Noggin - A protein used to regulate cellular processes in tissue culture.
• Tumor model - A method or process used to replicate tumor environment and behavior for scientific studies.
• Cell pellet - Cluster of cells collected at the bottom of a tube after centrifugation.
• ROCK inhibitor organoids - Compounds that prevent cell apoptosis during organoid creation.
• Noggin conditioned media - Media enriched with Noggin protein, used in cellular culture and experiments.
• Cell pellet in tube - Term refers to cells that have been concentrated by centrifugation in a sample tube.

• Introduce In vitro tumor models by defining this as a replicate of tumor behavior (e.g., in vitro tumor models).
• Key Concepts by summarizing principles involved in cell pellet creation (e.g., cell pellet).
• Underlying Mechanisms through visualizing the process of using ROCK inhibitor in organoid creation.
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• What role does the PeproTech Noggin play in the tumor model creation?
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• Practical Applications - Tumor models help study cancer growth and potential cures (e.g., in vitro tumor models).
• Industry Impact - Lab studies benefit the healthcare industry and the field of oncology (e.g., ROCK inhibitor organoids).
• Societal Importance - The research contributes to advancements in cancer treatment options (e.g., Noggin conditioned media).
• Link to Scientific Advancements - Understanding tumor behavior facilitates innovative treatment approaches.