Purification des peptides : une technique basée sur la RP-HPLC pour extraire des peptides à partir de lysats de protéines digérées

Pour isoler et purifier les peptides, commencez par une suspension de lysat de protéines contenant un mélange de peptides digérés.

Traitez le mélange avec de l’acide trifluoroacétique ou un réactif à base de TFA. Ce réactif anionique ou chargé négativement forme un complexe de paires d’ions avec des résidus basiques ou chargés positivement sur les peptides, masquant ainsi leur charge et améliorant l’hydrophobicité des peptides.

Maintenant, assemblez une colonne de chromatographie liquide haute performance en phase inverse, ou RP-HPLC, contenant une phase stationnaire poreuse à base de silice, immobilisée avec des ligands hydrophobes non polaires. Ajoutez un tampon d’équilibrage compatible avec les peptides à la colonne pour préparer la phase stationnaire avant l’application de l’échantillon.

Maintenant, chargez l’échantillon acidifié dans la colonne. À l’intérieur de la colonne, les peptides hydrophobes s’adsorbent sélectivement sur les ligands hydrophobes de la phase stationnaire. Passez un tampon de lavage à travers la colonne pour éluer toute particule non liée ou indésirable.

Ensuite, passez un tampon d’élution organique moins polaire, avec une hydrophobie élevée, à travers la