Injection intraveineuse de cellules cancéreuses dans le système vasculaire de la membrane chorioallantoïde du poulet : une procédure pour établir un modèle de cancer de la membrane chorioallantoïde pour étudier l’invasion du cancer et les métastases

La membrane chorioallantoïdienne de poule, ou CAM, d’un œuf de poule fécondé est la membrane extra-embryonnaire soutenue par un riche réseau vasculaire. Cette membrane hautement vascularisée qui tapisse la membrane de l’enveloppe non vasculaire facilite l’échange de gaz et de nutriments avec l’embryon en développement.

Pour générer un modèle de cancer CAM in vitro, commencez avec un embryon de poulet viable, fécondé et sans coquille portant un CAM complètement développé dans une boîte.

Ensuite, assemblez l’appareil d’injection contenant une tubulure fixée à une seringue transportant une suspension unicellulaire de cellules cancéreuses transduites dans un tampon réfrigéré approprié. Connectez une aiguille en verre personnalisée au tube pour une administration de haute précision lors de l’injection ultérieure.

Maintenant, transférez l’embryon au microscope. Identifiez une veine appropriée près du point de bifurcation sur la surface CAM. Injectez la suspension de cellules cancéreuses dans la veine sélectionnée et assurez-vous d’une administration complète. Rétractez doucement l’aiguille. Couvrez l’embryon et incubez-le dans des conditions appropriées.

Le système vasculaire dense à l’intérieur de la couche mésodermique abrite les cellules tumorales injectées, facilitant ainsi la formation de tumeurs primaires. Finalement, certaines de ces cellules migrent à travers le système vasculaire et extravasent, envahissant le stroma environnant, où elles prolifèrent pour former des foyers métastatiques.

Pour l’injection IV, concentrez les cellules à 0,5 à 1 million de cellules par millilitre en utilisant du PBS 1x glacé pour diluer ou remettre en suspension les cellules. Attendez-vous à ce qu’environ 1 millilitre de suspension cellulaire soit nécessaire pour 10 embryons. Pour assembler l’appareil d’injection, montez une aiguille sur la seringue, puis étendez l’aiguille de la seringue avec un morceau de tube de 3 à 5 centimètres de long.

Cassez la pointe de l’aiguille en borosilicate à l’aide d’une pince fine. Chargez la seringue de 50 à 200 microlitres de suspension de cellules cancéreuses et insérez l’aiguille borosilicate dans la tubulure. Inspectez l’aiguille pour détecter l’obstruction de la cellule et les bulles d’air. Si un colmatage cellulaire est observé dans le capillaire, retirez le capillaire, remettez les cellules en suspension et remplacez-le par un nouveau capillaire.

Utilisez le piston pour repousser les bulles. Retirez le couvercle et transférez l’embryon sous le stéréoscope. Identifiez la veine appropriée à injecter sur la surface de la CAM, qui n’est normalement que légèrement plus large que le diamètre de la pointe de l’aiguille en borosilicate et située à mi-chemin entre l’embryon et la paroi de la boîte de pesée.

Il est généralement plus facile d’injecter au point immédiatement adjacent à la bifurcation de la veine. Appuyez la pointe de l’aiguille contre la paroi du vaisseau sanguin et appliquez une légère pression dans le même sens que le flux sanguin. Si nécessaire, utilisez un coton-tige pour aider à ancrer ou à stabiliser le récipient qui est injecté. Appuyez doucement sur le piston de la seringue pendant 2 à 10 secondes jusqu’à ce que le volume souhaité soit injecté.

Jetez l’embryon si un saignement excessif ou une accumulation de liquide clair apparaît au site d’injection. Retirez l’aiguille du CAM et tamponnez doucement le site d’injection avec un coton-tige pour éliminer tout sang ou cellules cancéreuses en excès. Couvrez l’embryon injecté dans la boîte de pesée avec le couvercle et remettez-le dans l’incubateur. Répétez la procédure jusqu’à ce que tous les embryons soient injectés.

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• Societal Importance - It improves the efficacy of drug administration (e.g., cancer treatments).
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