Isolement d’une colonie de cellules cancéreuses métastatiques à partir d’une MCA de poulet : une procédure pour isoler les cellules cancéreuses à partir de cultures d’œufs sans coquille

La membrane chorioallantoïdienne du poulet, ou CAM, est une membrane à trois couches située juste sous la coquille de l’œuf. Il se compose d’un ectoderme externe, d’un mésoderme hautement vasculaire et de l’endoderme le plus interne.

Le mésoderme CAM comprend des vaisseaux sanguins, des fibroblastes et des composants stromaux, et fournit ainsi un environnement favorable à la colonisation des cellules tumorales.

Pour isoler les cellules cancéreuses colonisées de la MCA, commencez par prélever une culture d’ovules sans coquille pré-injectée avec des cellules cancéreuses marquées par fluorescence dans une boîte. Visualisez l’ovulation au microscope à fluorescence. Localisez les colonies de cancer métastatiques fluorescentes et compactes.

Excise doucement le tissu CAM contenant les colonies métastatiques d’intérêt. Transférez le tissu CAM excisé dans un tube de microcentrifugation. Coupez le tissu en petits morceaux pour rendre le CAM accessible au traitement enzymatique dans les étapes suivantes.

Complétez le tube avec l’enzyme collagénase et incubez. La collagénase dégrade la protéine de collagène dans le mésoderme CAM et initie la dissociation des colonies cancéreuses. Centrifuger la suspension pour granuler les cellules cancéreuses, les restes de tissu CAM et les fibroblastes CAM. Jetez le surnageant contenant de la collagénase.

Ajoutez un milieu de croissance sélectif et transférez la suspension dans une plaque de culture fraîche. Ce milieu favorise la croissance des cellules cancéreuses en suspension par rapport aux autres cellules. Aspirez les cellules cancéreuses et stockez-les pour une analyse ultérieure en aval.

Au jour 5 après l’injection, retirez les embryons de l’incubateur et inspectez et localisez les CAM embryonnaires pour la distribution métastatique des colonies. Sous le microscope de dissection, tirez doucement le tissu CAM qui contient la colonie métastatique d’intérêt vers le haut à l’aide de pinces fines et coupez-le avec des ciseaux chirurgicaux.

Transférez le tissu CAM dans un tube stérile vide de 1,5 millilitre et fermez le couvercle du tube. Répétez la procédure d’excision jusqu’à ce que toutes les colonies d’intérêt soient rassemblées dans des tubes séparés. Hachez doucement le tissu CAM dans un tube de microcentrifugation à l’aide d’une aiguille stérile 18G distincte pour chaque colonie. Ajoutez 100 microlitres de 1x solution de collagénase et incubez pendant 30 minutes à 37 degrés Celsius.

Faites tourner les cellules et le tissu CAM à 300 x g pendant 5 minutes à température ambiante. Aspirez la solution de collagénase et remettez les cellules en suspension dans un milieu complet pour la lignée cellulaire d’intérêt. Ensuite, faites tourner à nouveau les cellules et les tissus.

Remettre en suspension les cellules et les morceaux de tissu dans 1 millilitre de milieu complet et le facteur de sélection le cas échéant. Ensuite, transférez dans une seule boîte de culture tissulaire de 12 puits. Pendant les trois prochaines semaines, surveillez quotidiennement la croissance et la contamination des cellules cancéreuses. Lorsque les cellules atteignent une confluence de 70 % à 80 %, transférez-les dans une boîte de culture de plus grand volume. Passez au séquençage ou à la prochaine ronde de sélection dès que le nombre adéquat de cellules cancéreuses est atteint.

• Chicken Chorioallantoic Membrane (CAM) - A membrane under chicken eggshell with a vascular and diverse ecosystem.
• Fluorescently Labeled Cancer Cells - Cancer cells tagged for microscopic visualization.
• Metastatic Cancer Colonies - Clusters of cancer cells that spread from their original site.
• Collagenase - Enzyme used to degrade collagen, aiding in cancer colony dissociation.
• Selective Growth Media - Aid in the proliferation of certain cell types over others.

• Explain the physical structure of the Chicken Chorioallantoic Membrane (e.g., CAM).
• Detail how fluorescently labeled cancer cells are used to track cancer colonies (e.g., cancer cells png).
• Discuss the process of isolating metastatic cancer colonies on the CAM (e.g., colony isolation).
• Relate this process to larger concepts in cancer research, specifically metastasis studies.

• What is the Chicken Chorioallantoic Membrane (CAM) and its significance in cancer research?
• How do fluorescently labeled cancer cells aid in tracking metastasis?
• What is the isolation procedure for metastatic cancer colonies?

• Describe how CAM model enhances understanding of cancer metastasis (e.g., chickencam).
• Identify how cancer research can be optimised by adopting this procedure (e.g., colonial cancer).
• Highlight the important role of selective growth media in cell research (e.g., error isolate shell).
• Explain the technological advancements made in studying metastatic cancer colonies.