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La langue constitue un épithélium squameux stratifié et une couche sous-jacente de tissu conjonctif dense appelée lamina propria. L’épithélium est constitué de cellules épithéliales squameuses multicouches qui offrent une protection contre le stress mécanique.
Pour isoler les cellules épithéliales, commencez par une langue de souris fraîchement récoltée. Hachez la langue pour obtenir des fragments de tissu plus petits. Ensuite, traitez les fragments avec un cocktail de digestion personnalisé contenant des enzymes collagénase, hyaluronidase et désoxyribonucléase.
Les enzymes collagénase et hyaluronidase digèrent la matrice extracellulaire qui maintient le tissu ensemble, favorisant la libération de cellules individuelles dans la suspension. La désoxyribonucléase dégrade tout ADN libre libéré par les cellules lysées.
Ajoutez un tampon contenant du sérum à l’échantillon digéré pour inactiver les enzymes hydrolysantes des protéines. Maintenant, filtrez l’échantillon à travers des filtres cellulaires pour éliminer tous les fragments et débris de tissu non digérés et obtenir une suspension unicellulaire de cellules épithéliales.
Centrifugeuse pour séparer les cellules. Jeter le surnagean
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