Encyclopédie des expériences JoVE
Recherche sur le cancer
0 vues • 2:36 min • April 30th, 2023
Lors de l’inoculation intramuqueuse orthotopique, les cellules tumorales correspondant à l’histotype du tissu muqueux sont délivrées dans le tissu muqueux d’un animal receveur.
Pour commencer, retenez une souris anesthésiée par le cou sur une plate-forme chirurgicale pour faciliter l’accès à sa bouche.
Préparez une suspension de cellules cancéreuses hautement métastasantes dans une matrice de membrane basale réfrigérée dans une seringue. La basse température empêche la suspension de se solidifier.
Injectez soigneusement cette suspension dans la joue interne ou la région buccale de la souris. La région buccale est bordée par la muqueuse buccale, qui est entourée d’un réseau de vaisseaux sanguins et lymphatiques.
Assurez-vous que la suspension des cellules cancéreuses est complète et rétractez doucement l’aiguille. Permettez à la matrice de se solidifier et d’intégrer les cellules à l’intérieur.
Laissez la souris récupérer. Dans les jours qui suivent l’injection, une tumeur primitive se développe au site d’injection. Finalement, les cellules de cette tumeur à fort potentiel métastatique peuvent voyager à travers le système lymphatique et s’extravaser dans les ganglions lymphatiques.
Ces cellules cancéreuses s’adaptent à leur nouveau microenvironnement et prolifèrent et établissent des colonies métastatiques dans les ganglions lymphatiques.
Immédiatement avant l’injection, mélangez les cellules à un rapport de 1 à 1 suspension de cellules tumorales à matrice de membrane basale sur de la glace. Chargez une seringue de 0,5 millilitre équipée d’une aiguille 23G avec 100 microlitres de cellules par animal receveur. Placez les seringues sur de la glace et confirmez l’absence de réponse au pincement des orteils chez une souris anesthésiée.
Ensuite, insérez l’aiguille dans la région buccale droite ou gauche à travers l’espace ouvert disponible de chaque côté de la bouche, en gardant la seringue parallèle à la région buccale pendant qu’elle est à l’intérieur de la cavité buccale, pour faciliter l’injection du volume complet de 100 microlitres de la suspension de la matrice de la membrane basale cellulaire sur une période de 5 secondes. Gardez la seringue en place pendant 5 secondes supplémentaires pour vous assurer que tout le matériel a été injecté avant de retirer doucement la seringue. Les tumeurs deviendront très visibles dans environ une semaine.