Prétraitement tissulaire FFPE pour l’ARN CISH : une procédure pour traiter des coupes de tissus fixées au formol et incluses dans la paraffine pour l’hybridation in situ chromogène de l’ARN

Le prétraitement des coupes de tissu fixées au formol ou incluses dans du FFPE facilite l’exposition des acides nucléiques et permet la liaison des sondes marquées à la séquence cible lors de l’hybridation in situ ultérieure. De plus, le prétraitement aide à maintenir l’intégrité des acides nucléiques dans les cellules et la morphologie globale des tissus.

Pour commencer, prenez une lame de verre portant une section de tissu FFPE déparaffinisé et réhydraté d’intérêt. Traitez le tissu avec une concentration appropriée de peroxyde d’hydrogène et incuber.

Le peroxyde d’hydrogène inactive de manière irréversible la peroxydase endogène, qui est physiologiquement présente dans les cellules. Ce processus de blocage élimine la possibilité de signaux de fond non spécifiques lors des étapes d’hybridation ultérieures.

Ensuite, plongez la section de tissu dans un bain chauffé contenant un tampon de récupération d’antigène approprié. Incuber pour la durée souhaitée. À haute température, les réticulations chimiques induites par le fixateur dans les protéines et les acides nucléiques, exposant les épitopes non masqués à des sondes lors du marquage ultérieur.

Enfin, traitez l’échantillon avec une