Hybridation de sonde et amplification de signal dans l’hybridation in situ de l’ARN : une technique de détection de séquences d’ARN spécifiques dans des coupes de tissus

Pour détecter une séquence d’ARN spécifique dans une cellule, commencez par prélever une section de tissu sur une lame de verre. Superposez la section de tissu avec un tampon d’hybridation approprié contenant les sondes d’ARN cibles.

Ces sondes sont des molécules d’ARN en forme de Z ayant une partie de reconnaissance de cible à une extrémité et une séquence de queue à une autre extrémité. Un bras d’espacement relie ces deux extrémités.

Maintenant, incubez la lame dans un four d’hybridation à une température optimale. Les sondes d’ARN en forme de Z pénètrent dans la cellule et s’hybrident par paires avec la séquence d’ARNm cible correspondante.

Retirez la diapositive du four. Immergez la lame dans une solution de lavage pour éliminer les sondes non liées et le tampon d’hybridation en excès.

Ensuite, ajoutez une solution de préamplificateur et incubez. La molécule de préamplificateur se fixe à la séquence de queue de deux sondes Z adjacentes. Cette molécule ne se lie pas à une seule sonde Z, ce qui garantit sa spécificité.

Ensuite, ajoutez le mélange de réactifs de l’amplificateur et incuber. Plusieurs molécules d’amplification s’hybrident dans la séquence unique de préamplificateur.