Modèle de tumeur à membrane chorioallantoïde de poulet ou CAM : une méthode in ovo pour simuler l’invasion périneurale des cellules tumorales

Dans certains cancers métastasants, les cellules tumorales s’étendent loin du site d’origine et pénètrent dans les tissus nerveux, un phénomène appelé invasion périneurale ou PNI.

La PNI peut être mise en évidence in ovo à la surface de la membrane chorioallantoïdienne ou CAM, qui imite la membrane basale du tissu épithélial humain.

Pour commencer, prenez un œuf de poule viable et fécondé avec sa coquille partiellement ouverte, exposant une CAM entièrement développée.

Ensuite, isolez les ganglions de la racine dorsale ou DRG de la moelle épinière d’une souris. DRG est un groupe de neurones sensoriels à l’aide desquels les cellules cancéreuses envahissent l’espace périneural.

Incuber les DRG dans un milieu approprié avec un colorant fluorescent pour les étiqueter afin de les visualiser facilement. Maintenant, transférez le DRG sur la surface CAM sans rompre la membrane.

Couvrez l’œuf d’un film transparent pour éviter toute contamination microbienne. Par la suite, incubez l’œuf pour faciliter l’intégration de DRG dans la CAM.

Après l’incubation, ensemencez les cellules cancéreuses marquées par fluorescence sur une surface sèche de CAM, à l’écart du DRG. La surface sèche minimise la propagation des cellules cancéreuses et permet une formation régulière de tumeurs.

Scellez l’ouverture de la coquille de l’œuf et incuberez-la pour permettre l’interaction entre les cellules cancéreuses DRG et les cellules cancéreuses. Au microscope, on peut observer les cellules cancéreuses se développer vers le DRG greffé, mettant en évidence le PNI.

Pour la greffe d’un ganglion de la racine dorsale sur la membrane chorioallantoïdienne, utilisez une pince fine et stérile pour saisir soigneusement un ganglion dans la boîte de culture et lavez doucement le tissu dans un récipient de HBSS frais. Placez le ganglion sur la membrane chorioallantoïdienne d’un œuf, en faisant attention de ne pas percer la membrane, et couvrez toutes les ouvertures de l’œuf avec des pansements en film transparent stérile. Lorsque tous les œufs ont été greffés, remettez-les dans l’incubateur d’œufs humidificateur pendant 2 jours sans rotation.

À la fin de l’incubation, transférez les œufs dans l’armoire à flux laminaire et utilisez des ciseaux et des pinces pour ouvrir le film transparent de pansement. Ensuite, ajoutez 0,5 à 1 million de cellules tumorales marquées par fluorescence dans 5 microlitres de HBSS sur la membrane chorioallantoïdienne de chaque ovule, à environ 2 millimètres de chaque ganglion de la racine dorsale, en gardant une distance uniforme entre les ganglions et les cellules. Ensuite, couvrez les œufs d’un nouveau pansement et remettez les œufs dans l’incubateur d’œufs pendant 7 jours sans rotation.

• Perineural Invasion (PNI) - Penetration of tumor cells into nerve tissues in metastasizing cancers.
• Ovo Model - An in-vitro method using chicken egg to study biological processes.
• Chorioallantoic Membrane (CAM) - The outer membrane of a chicken egg, mimics human basement membrane.
• Dorsal Root Ganglia (DRG) - Cluster of sensory neurons that cancer cells target to invade perineural space.
• Fluorescent Labeling - Technique to visualize cells or molecules using a fluorescent dye.

• Introduction to PNI - A metastasizing cancer process involving tumor cells invading nerve tissues (e.g., PNI).
• Utilization of Ovo Model - A method to demonstrate PNI on the surface of the CAM (e.g., ovo model).
• Role of DRG in PNI - Essential neuronal cluster that cancer cells target in PNI (e.g., DRG).
• Experiments with Fluorescent Labeling - Tracking cancer cell-DRG interaction using fluorescent dye (e.g., fluorescent labeling).

• What is PNI and how does ovo model help in its study?
• What role does the CAM play in an ovo model?
• How does DRG relate with PNI in the context of an ovo model?

• Real-world Implication of PNI study - Offers insight for targeted cancer therapies (e.g., PNI).
• Potential Impact on Oncology - Influences cancer research and treatment methods (e.g., ovo model).
• Societal Significance of PNI - Enhances understanding of metastasizing cancers, aiding community health (e.g., DRG).
• Science Advancements - Advances in fluorescence techniques help track cellular interactions efficiently.