JoVE Encyclopedia of Experiments
Recherche sur le cancer
0 vues • 3:02 min • April 30th, 2023
L’inoculation orthotopique facilite l’administration de cellules cancéreuses à un animal receveur dans un organe ou un site qui correspond à l’histotype tissulaire. Pour commencer, préparez une souris nue immunodéprimée anesthésiée en position couchée.
Ensuite, faites une incision chirurgicale dans la région du cou pour révéler les glandes salivaires. Déplacez les glandes salivaires et disséquez les muscles de la sangle pour exposer la trachée et la glande thyroïde sous-jacentes.
La glande thyroïde, une glande endocrine, se compose de deux lobes qui se trouvent de chaque côté de la trachée et entourent le cartilage cricoïde. Ces deux lobes sont reliés par une mince bande de tissu thyroïdien appelée isthme.
Maintenant, préparez une suspension de cellules cancéreuses de la thyroïde avec un tampon approprié dans une seringue. Injectez soigneusement la suspension cellulaire dans le lobe thyroïdien de la souris.
Par la suite, repositionnez les glandes salivaires et suturez l’incision. Laissez la souris récupérer. Surveillez la souris chaque semaine pour observer la croissance des tumeurs orthotopiques dans le lobe de la thyroïde.
Pour l’inoculation de cellules tumorales thyroïdiennes orthotopiques, suspendez une aliquote de cellules Cal62 dans 5 microlitres de PBS et injectez par voie sous-cutanée 100 microlitres d’analgésique et 100 microlitres d’antibiotique dans une souris nude BALB/c âgée de 7 semaines. Après avoir confirmé l’absence de réponse au pincement des orteils, placez l’animal sous un microscope à dissection et désinfectez le cou de l’animal avec de l’iodopovidone.
Ensuite, faites une incision d’environ 2 centimètres dans la peau et déplacez les glandes salivaires pour exposer le cou. Utilisez une pince de dissection et/ou des ciseaux pour disséquer les muscles de la sangle afin d’exposer la trachée et la glande thyroïde, et utilisez une seringue de 10 microlitres pour injecter le volume de 5 microlitres de cellules tumorales dans le lobule thyroïdien droit, situé sur le côté du cartilage cricoïde.
Lorsque toutes les cellules ont été libérées, repositionnez les glandes salivaires et utilisez des sutures tressées en soie, enduites et non résorbables pour fermer l’incision. Ensuite, appliquez de l’iodopovidone sur la zone de la plaie et placez la souris sur une couverture thermique avec surveillance jusqu’à ce qu’elle se rétablisse complètement.