Encyclopédie des expériences JoVE
Recherche sur le cancer
0 vues • 2:59 min • April 30th, 2023
Les sphéroïdes sont des agrégats cellulaires sphériques tridimensionnels in vitro qui imitent le microenvironnement tumoral in vivo et aident à étudier la progression tumorale. Pour préserver ces sphéroïdes en les encastrant, commencez par prendre un tube stérile contenant des sphéroïdes dans un tampon souhaité.
Traitez les sphéroïdes avec du paraformaldéhyde. Le paraformaldéhyde réticule les protéines cellulaires, ce qui permet de stabiliser et de préserver la structure cellulaire. Centrifugez les sphéroïdes et retirez le surnageant contenant du paraformaldéhyde. Remettez la pastille sphéroïde en suspension dans le tampon.
Ensuite, préparez la concentration souhaitée de solution de gel d’agarose fondue. Faites une goutte de gel d’agarose sur une lame de microscope. Maintenir la lame sur un bloc chauffant pour éviter la solidification de l’agarose.
À l’aide d’une micropipette à large orifice, prélevez les sphéroïdes du tube. Pipetez soigneusement les sphéroïdes au centre de la goutte de gel d’agarose sans toucher la lame de microscope. Par la suite, incubez la lame à une température appropriée pour permettre à l’ECM de se solidifier et de piéger les sphéroïdes à l’intérieur.
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