Cryobroyage de tissus décellularisés : une technique pour obtenir de fines poudres de matrice extracellulaire

Le broyage cryogénique ou cryobroyage est une technique qui permet de refroidir des échantillons de tissus décellularisés à des températures extrêmement basses et de les broyer en une poudre fine tout en conservant leur composition biochimique.

Pour commencer, obtenez une matrice extracellulaire décellularisée ou ECM d’intérêt dérivée de tissus lyophilisés. Émincez-le pour obtenir de petits fragments.

Ensuite, transférez les fragments ECM hachés dans un bocal de broyage. Introduisez les billes de broyage dans le bocal de broyage. Immerger le bocal de broyage chargé dans de l’azote liquide pour congeler l’échantillon à −196 °C.

Chargez le bocal refroidi dans un système de cryobroyage. Soumettre l’échantillon congelé à un cryobroyage à une fréquence appropriée pour la durée souhaitée.

Pendant le cryobroyage, le bol de broyage oscille radialement en position horizontale. En conséquence, l’inertie des billes de broyage leur permet d’impacter l’échantillon congelé à haute énergie aux extrémités arrondies du bocal et de le pulvériser.

De plus, le mouvement du bocal de broyage couplé au mouvement des billes de broyage favorise un mélange intensif de l’échantillon pour obtenir une poudre fine avec une distribution granulométrique uniforme.

Maintenant, transférez la poudre ECM cryobroyée dans un flacon en verre. Fermez hermétiquement le flacon pour éviter l’exposition à l’humidité. Dessécher l’échantillon jusqu’à ce qu’il soit utilisé ultérieurement.

Utilisez des ciseaux chirurgicaux tranchants pour hacher finement le tissu décellularisé. Pour cryobroyer le tissu traité, remplissez une chambre de broyage en acier inoxydable de 25 millilitres pour un système de broyage à boulets de laboratoire avec ECM lyophilisé haché et ajoutez deux billes de broyage en acier inoxydable de 10 millimètres.

Fermez et immergez complètement la chambre de broyage chargée dans de l’azote liquide pendant 3 minutes. Ensuite, broyez l’échantillon congelé à 30 hertz pendant 3 minutes. Répétez l’immersion dans l’azote liquide et le broyage jusqu’à ce que l’ECM soit broyé en une poudre fine.