Préparation de suspension ECM : une technique pour obtenir une suspension homogène à partir d’une matrice extracellulaire dérivée de tissus
Encyclopédie des expériences JoVE
Recherche sur le cancer
0 vues • 4:16 min • April 30th, 2023
La matrice extracellulaire ou MEC, un réseau de soutien complexe dans les tissus, est constituée de protéoglycanes et de protéines.
Pour obtenir une ECM homogénéisée, commencez par prélever une quantité mesurée de poudre ECM décellularisée dans un tube. Maintenant, ajoutez un tampon acidifié dans le tube pour former une suspension ECM.
Simultanément, dans un autre tube, dissoudre l’alpha-amylase - une enzyme glycolytique - dans le même tampon acidifié. Le pH acide de ce tampon facilite l’activité optimale de l’enzyme alpha-amylase.
Ensuite, complétez le tube contenant la suspension ECM avec une solution d’enzyme alpha-amylase. Incuber le tube avec une agitation constante. L’alpha-amylase hydrolyse les glycanes - les fractions glucidiques - présentes dans les protéoglycanes.
Centrifuger pour granuler la fraction ECM riche en protéines, laissant les glycanes digérés et les enzymes usées dans le surnageant. Jetez le surnageant.
Remettre la pastille en suspension dans une solution de chlorure de sodium. Les ions chlorure extraient les protéines de la pastille ECM dans la suspension. Centrifugez et jetez le surnageant contenant du chlorure de sodium.
Ensuite, ajoutez de l’acide acétique
Consultez la transcription complète et accédez à des milliers de vidéos scientifiques