$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Les microtransporteurs sont des matrices de support sphériques de la taille d’un micron avec des pores interconnectés qui fournissent une surface expansive pour l’attachement et la croissance des cellules.
Pour fabriquer des microtransporteurs dérivés de la matrice extracellulaire ou de l’ECM, commencez par une suspension uniforme d’ECM finement pulvérisée. Chargez la suspension dans une seringue reliée à un ensemble de perfusion. Fixez la seringue sur un pousse-seringue. Positionnez l’aiguille verticalement au-dessus d’une fiole cryogénique à une distance appropriée.
Maintenant, connectez l’aiguille à la borne positive d’une source d’alimentation haute tension. Fixez une bande de papier d’aluminium pliée sur le bord du ballon et connectez-la à la borne de mise à la terre pour terminer le circuit.
Ensuite, remplissez l’azote liquide dans le ballon avec l’extrémité intérieure de la bande d’aluminium immergée. Appliquez la tension souhaitée et réglez la pompe à seringue sur un débit approprié pour lancer l’électropulvérisation. Lorsque la suspension ECM conductrice émerge de la pointe de l’aiguille, sa forme se déforme sous l’influence du champ électrique et de la tension superficielle, formant un cône liquide pointu.
Avec des incréments de tension, la suspension se projette. Celui-ci finit par se briser en gouttelettes plus petites chargées et tombe dans le bain d’azote liquide. L’azote liquide gèle instantanément les microgouttelettes, cristallisant les particules de solvant qu’elles contiennent.
Transférez les microgouttelettes congelées dans un tube frais. Lyophilisez l’échantillon. Cette étape permet d’éliminer les particules de solvant gelées de l’échantillon, générant des pores à leur place. Stockez la poudre sèche de microsupports poreux pour d’autres applications.
Incuber la suspension ECM cryobroyée avec une agitation continue à 100 tr/min pendant la nuit. Chargez 3 millilitres de suspension ECM dans une seringue Luer-Lock de 3 millilitres et fixez un ensemble de perfusion à ailettes sur l’alésage de la seringue. Fixez la seringue à l’intérieur du pousse-seringue. Ensuite, fixez l’aiguille à un support d’autoclave et positionnez la pointe de l’aiguille verticalement à une distance de 4 à 6 centimètres du haut d’une fiole de Dewar de forme basse.
Ensuite, fixez une électrode de pince crocodile à la pointe de l’aiguille, en vous assurant également que la pince crocodile est connectée à la borne positive de l’alimentation haute tension. Repliez la bande de papier d’aluminium sur le bord de la bouteille sous vide. Ensuite, fixez une deuxième électrode crocodile sur le bord extérieur de la feuille. Connectez-le à la borne de terre de l’alimentation.
Remplissez le ballon de Dewar avec de l’azote liquide jusqu’à environ 1 centimètre du haut afin que les trois quarts de la feuille soient immergés. Ensuite, réglez la pompe à seringue à un débit d’infusion de 30 millilitres par heure et vaporisez électrosprayment les échantillons selon le protocole de texte. Une fois la perfusion terminée, versez soigneusement l’excès d’azote liquide du Dewar, en laissant le microtransporteur en suspension dans environ 25 millilitres d’azote liquide pour vous assurer qu’ils restent congelés.
Transférez immédiatement les microtransporteurs contenant de l’azote liquide dans un tube à centrifuger de 50 millilitres en versant en un seul mouvement fluide. Ensuite, à l’aide d’une pelle, récupérez les microsupports congelés qui restent dans le Dewar. Ajoutez-les dans le tube à centrifuger. Pour préparer la lyophilisation, couvrez le tube de centrifugation avec une feuille d’aluminium perforée de petits trous. Placez les tubes à centrifuger couverts dans une fiole de lyophilisateur. Ensuite, connectez immédiatement le ballon au lyophilisateur et séchez les échantillons pendant la nuit.