Modélisation de l’invasion neuronale cancéreuse in vitro : une méthode de co-culture de ganglions de la racine dorsale et de cellules cancéreuses

L’invasion neurale est le mécanisme des métastases cancéreuses dans lequel les cellules cancéreuses neurotrophiques démontrent une capacité intrinsèque à se développer dans et autour des nerfs. Pour observer ce phénomène in vitro, il faut d’abord prendre un ganglion de la racine dorsale murin isolé ou DRG - un groupe de corps cellulaires de neurones sensoriels.

Placez le DRG dans un milieu glacé pour conserver sa viabilité. Maintenant, transférez le DRG dans une goutte de matrice extracellulaire réfrigérée ou ECM, qui sert d’échafaudage tridimensionnel autour du DRG. Ensuite, ensemencez les cellules cancéreuses neurotrophiques dans l’ECM à une distance appropriée autour du DRG.

Permettez à l’ECM de se solidifier afin d’y intégrer le DRG et les cellules cancéreuses. Enfin, ajoutez un milieu de culture approprié à l’ECM et incuber. Le milieu de croissance nutritif et les protéines ECM fournissent un microenvironnement optimal pour les explants.

Pendant l’incubation, l’interaction réciproque entre les explants favorise la croissance de DRG de petites projections nerveuses ou neurites qui poussent radialement vers les cellules cancéreuses. Simultanément, les cellules cancéreuses migrent de manière unidirectionnelle loin de leurs colonies et envahissent les neurites nouvellement formés.

En travaillant dans une hotte à flux laminaire, placez une boîte de Pétri à fond de verre de 35 millimètres sur une grille en papier sur de la glace. À l’aide d’une pointe de pipette pré-refroidie, distribuez environ 10 microlitres d’ECM appauvri en facteur de croissance au centre de la grille. Tout en observant l’antenne à travers un stéréomicroscope sous un grossissement de 2X à 4X, placez le DRG au centre de l’ECM, près du bas de l’antenne. Après avoir récolté et lavé 40 000 cellules cancéreuses d’intérêt provenant de cultures confluentes, remettre en suspension la pastille dans 40 microlitres d’ECM sur de la glace.

Une fois de plus, visualisez la grille à travers le stéréomicroscope, mesurez 500 microns à partir du DRG et distribuez 10 microlitres de suspension de cellule à ce stade. Répétez dans toutes les directions à partir du DRG. Laissez le plat dans la hotte à flux laminaire pendant 10 à 15 minutes pour qu’il se solidifie mais ne se dessèche pas. Une fois que l’ECM s’est solidifié, ajoutez lentement du DMEM complété en le pipetant contre la paroi latérale de la plaque. Ajoutez environ 2 millilitres de support, suffisamment pour couvrir l’ECM.

L’ajout de DMEM doit se faire très lentement en pipetant contre la paroi latérale de la plaque pour éviter le détachement du DRG du fond de la plaque.

Placez la plaque dans l’incubateur de culture tissulaire et suivez les instructions de la partie écrite du protocole pour maintenir la culture.

• Neural Invasion – A method of cancer metastasis where neurotrophic cancer cells grow around nerves.
• Dorsal Root Ganglion (DRG) – A cluster of sensory neuron cell bodies.
• Extracellular Matrix (ECM) – The three-dimensional scaffold around the DRG.
• Neurotrophic Cancer Cells – Cancer cells capable of growing towards or in nerves.
• Neurites – Small nerve projections sprouting from DRG towards cancer cells.

• Introduce Neural invasion – A cancer metastasis method involving neurotrophic cells and nerves (e.g., neural invasion).
• Key Concepts – DRG and ECM are critical for studying this in vitro (e.g., culture invasion).
• Underlying Mechanisms – Interaction between DRG and cancer cells, with growth in ECM (e.g., neural cancer).
• Connect to Experiment – Describes the in vitro methodology used to visualize the process.

• What is 'neural invasion' and how does it relate to neurotrophic cancer cells?
• What roles do DRG and ECM play in visualizing cancer metastasis in vitro?
• How does interaction between DRG and cancer cells facilitate neural invasion?

• Practical Applications – Neural invasion studies contribute to cancer research (e.g., ganglia cancer).
• Industry Impact – Findings benefit the medical sector, particularly oncology (e.g., neural cancer).
• Societal Importance – Insights could influence cancer treatment methods (e.g., neural invasion).
• Link to Scientific Advancements – Advances in vitro techniques to visualize cancer cell behavior.