Préparation d’un échafaudage œsophagien porcin décellularisé : une technique pour générer un échafaudage acellulaire à partir d’un œsophage de porc

Les échafaudages décellularisés dérivés de la matrice extracellulaire de tissus spécifiques imitent leur microenvironnement extracellulaire natif. Ces échafaudages conservent leur intégrité structurelle et leur composition biochimique et servent de plates-formes prometteuses pour l’ingénierie tissulaire.

Pour préparer un échafaudage œsophagien porcin décellularisé, commencez par un œsophage porcin fraîchement excisé. Coupez l’œsophage en deux dans le sens longitudinal et rincez-le avec un tampon approprié pour éliminer tous les débris. Ensuite, fixez l’œsophage avec sa surface muqueuse, la couche la plus interne, vers le haut.

Séparez la muqueuse de la sous-muqueuse sous-jacente à une extrémité de l’œsophage. Disséquez l’œsophage longitudinalement le long du tissu conjonctif lâche de la muqueuse appelé lamina propria pour séparer complètement la surface de la muqueuse de la sous-muqueuse sous-jacente.

De plus, excisez les régions proximales et distales de la muqueuse, qui contiennent une densité plus élevée de glandes sous-muqueuses et une couche de lamina propria plus épaisse. Coupez le tissu muqueux en morceaux de taille uniforme.

Traitez les tissus avec une solution saline hypertonique complétée par des antibiotiques. Les antibiotiques aident à prévenir la croissance bactérienne. À une concentration élevée de soluté, l’eau s’échappe des cellules et provoque leur rétrécissement. Cette étape contribue en outre à la mort cellulaire et au détachement de la matrice extracellulaire.

Maintenant, détachez doucement l’épithélium relâché du tissu sous-jacent. Rincez le tissu avec un tampon pour éliminer les débris cellulaires. Enfin, incubez le tissu dans du glycérol, ce qui facilite davantage la décellularisation des tissus en déshydratant et en lysant les cellules tout en préservant l’intégrité de la membrane basale.

Pour préparer les échafaudages décellularisés de l’œsophage du porc, commencez par utiliser des ciseaux et une pince à épiler pour ouvrir l’œsophage du porc longitudinalement. Ensuite, lavez l’œsophage dans un pot stérile de 180 millilitres contenant 100 millilitres de PBS stérile pendant 10 minutes en secouant doucement pour éliminer tous les débris.

Pendant que le tissu est rincé, vaporisez une planche de dissection en liège avec de l’éthanol à 70 %. Lorsque le bouchon est sec, épinglez l’œsophage sur la planche avec la muqueuse vers le haut. Maintenant, utilisez une pince à épiler stérile pour saisir la surface de la muqueuse à une extrémité de l’œsophage et retirez le tissu de la planche pour séparer la muqueuse de la sous-muqueuse sous-jacente.

Ensuite, à l’aide d’une lame de scalpel stérile, disséquez l’œsophage longitudinalement le long de la lamina propria, en retirant les broches au fur et à mesure que la dissection progresse pour permettre à la muqueuse d’être soulevée. Jetez la sous-muqueuse sous-jacente et utilisez un scalpel pour couper la muqueuse restante en morceaux carrés de 5 centimètres. Lavez les morceaux dans 150 millilitres de PBS stérile en les agitant doucement, comme cela vient d’être démontré.

Après cinq minutes, transférez le tissu dans un pot de 180 millilitres contenant 150 millilitres de 1 solution molaire de chlorure de sodium complétée par des antibiotiques à 37 degrés Celsius. Après 72 heures, transférez le tissu dans 150 millilitres de PBS stérile, à ce moment-là, l’épithélium aura commencé à se séparer visiblement du tissu sous-jacent.

À l’aide d’une pince stérile et d’une lame de scalpel, retirez l’épithélium qui se détache et placez le reste du tissu dans un pot frais de 150 millilitres de PBS stérile avec trois lavages de cinq minutes avec une agitation douce. Le tissu doit maintenant être stocké dans du glycérol pendant au moins quatre mois pour stériliser complètement l’échafaudage.