Quantification à base de nanoparticules conjuguées d’anticorps à l’aide de la microscopie à fond noir : une procédure pour capturer et quantifier des exosomes spécifiques à partir de fluides corporels

Les exosomes sont de petites structures entourées d’une membrane qui sont sécrétées par les cellules dans l’espace extracellulaire. Les exosomes sont abondamment présents dans les biofluides.

Pour identifier et capturer des exosomes spécifiques dans les fluides corporels, commencez par prendre une lame d’immunodosage multi-puits. Cette lame est fonctionnalisée avec des protéines qui agissent comme des antigènes et se lient à des anticorps spécifiques.

Complétez la lame avec la solution d’anticorps primaire souhaitée et incuber. Ces anticorps se lient aux antigènes pré-enrobés sur la surface de la lame.

Aspirez la solution restante pour éliminer tous les anticorps non liés. Maintenant, ajoutez un tampon bloquant qui bloque les antigènes libres, empêchant ainsi la liaison non spécifique des exosomes.

Ensuite, retirez le tampon de blocage, chargez les exosomes contenant la suspension sérique sur la lame et incuberez. Cela permet la liaison exclusive d’exosomes spécifiques à la cible aux anticorps primaires capturés.

Ensuite, chargez une suspension d’anticorps secondaires conjugués à des nanoparticules d’or sur la surface de la lame. Ces anticorps se fixent aux exosomes pré-liés et for