Analyse par patch-clamp perforé médié par l’amphotéricine B : une technique électrophysiologique pour étudier les courants ioniques dans les cellules de la vessie
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0 vues • 4:20 min • April 30th, 2023
La technique du patch-clamp perforé permet de mesurer en temps réel les courants ioniques associés à l’activité des canaux ioniques sur des cellules telles que le muscle lisse détrusor, ou DSM, cellules de la vessie.
Pour commencer, chargez la suspension cellulaire DSM sur une chambre en verre et incubez pour permettre l’adhérence cellulaire. Ensuite, ajoutez une solution extracellulaire contenant des ions tétraéthylammonium et césium aux cellules collées. Ces cations bloquent les canaux potassiques sur la membrane cellulaire et inhibent les courants potassiques interférents.
Ensuite, prenez une pipette à pince patch polie - un mince tube de verre creux contenant une électrode d’enregistrement connectée à un amplificateur. Remplissez la pipette à l’avant avec une solution intracellulaire et à contre-temps avec la même solution mais contenant de l’amphotéricine-B, un antibiotique perforant la membrane.
Maintenant, immergez la pointe de la pipette dans la solution extracellulaire contenant des cellules DSM. Après avoir réglé le potentiel et le courant à des niveaux appropriés, avancez la pointe de la pipette vers la membrane de la cellule et surveillez simultanément la résistance de
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