Injection chirurgicale de citerne magna : une méthode d’administration de cellules tumorales directement dans le système nerveux central d’un modèle murin

Le cerveau murin est tapissé de trois couches méningées : la membrane durale la plus externe, la membrane arachnoïdienne moyenne et la membrane de la pie.

Dans la région postérieure du cerveau, la membrane arachnoïdienne et la membrane pia sont intervenues par un espace sous-arachnoïdien cérébrospinal ou rempli de LCR, appelé citerne magna.

Pour effectuer une injection intracisternale des cellules tumorales, commencez par prendre un modèle de souris anesthésié. Préparez la souris en enlevant les poils de la surface ventrale de la tête.

Maintenant, placez la souris en position couchée et fixez sa tête à un cadre stéréotaxique. Positionnez le nez de la souris en le pointant légèrement vers le bas pour niveler la colonne vertébrale avec la citerne magna.

À l’aide de ciseaux, faites une petite incision médiane à l’extrémité postérieure du cerveau, au niveau des oreilles.

Écartez soigneusement la couche musculaire superficielle. La citerne magna peut être visualisée comme un triangle inversé recouvert par la membrane durale transparente.

Ensuite, prenez une seringue contenant une suspension de cellules tumorales circulantes.

En gardant la musculature environnante rétractée, insérez la seringue sous la membrane de la dure-mère, en perçant la membrane arachnoïdienne. Cette étape permet l’injection de cellules tumorales directement dans le LCR présent dans la citerne magna.

Enfin, fermez le site d’incision en appliquant des clips de plaie et laissez la souris récupérer.

Commencez par injecter par voie sous-cutanée à la souris 1 milligramme par kilogramme de buprénorphine à libération prolongée. Après avoir anesthésié la souris, préparez-la pour la chirurgie. Coupez le site chirurgical avec une zone de bordure suffisante pour empêcher la fourrure de contaminer le site d’incision.

Rasez la fourrure de toute la surface de la tête et préparez la peau à l’aide d’une technique stérile. Ensuite, saturez le site avec un antiseptique cutané germicide, en travaillant du centre du site vers la périphérie, et laissez-le sécher.

Positionnez le corps de manière à ce que la colonne vertébrale soit maintenue au niveau de la citerne magna. Tout en appliquant une légère traction sur la queue, placez du ruban adhésif à la base de la queue pour la fixer.

Appliquez soit un champ stérile, soit un matériau en plastique adhésif stérile pour protéger le site chirurgical de la contamination. Avec le cou en pleine extension, passez les pointes des ciseaux chirurgicaux vers le bas avec une légère pression sur l’os occipital en commençant juste entre les pavillons.

Faites une petite incision médiane de 3 à 5 millimètres légèrement au-dessus de la concavité palpée. Prélevez 5 microlitres de suspension cellulaire dans une seringue Hamilton 30G. À l’aide d’une pince à bout émoussé avec une pointe de 1 à 2 millimètres, appuyez doucement sur la citerne magna.

Introduisez les pointes en position fermée et ouvrez-les tout en appliquant une pression vers le bas sur la dure-mère. Répétez la dissection contondante jusqu’à ce que la membrane durale soit facilement identifiée et que les vaisseaux sanguins associés soient visibles dans la zone exposée.

Tout en tenant la pince, ouvrir pour rétracter la musculature environnante. Introduisez une aiguille non carottante 30G sous la dure-mère pour visualiser le biseau, en vous assurant que l’aiguille n’est introduite que juste au-delà du biseau lui-même.

Déployez lentement un piston de seringue et déposez les cellules juste en dessous de la dure-mère. Si une fuite au point d’injection est notée, appliquez une légère pression avec un applicateur à bout de coton. Fermez la peau en appliquant une pince à plaie ou une microgoutte d’adhésif pour la peau.

Surveillez les souris tous les jours après la chirurgie pendant la première semaine. Si une souris semble souffrir ou être en détresse, traitez-la avec une injection sous-cutanée de 10 milligrammes par kilogramme de carprofène, une fois toutes les 12 à 24 heures pendant un maximum de 5 jours, selon la consultation et les directives du vétérinaire.