Purification de noyaux par centrifugation en gradient : une technique pour obtenir une fraction ultrapure de noyaux intacts à l’aide de la centrifugation par gradient de densité

Pour isoler et purifier des noyaux intacts, commencez par prélever une fraction de noyaux bruts dans un tube. La fraction contient des noyaux intacts ainsi que des fragments de noyaux brisés et des débris.

Mélangez cette fraction avec un milieu à gradient de densité approprié de sorte qu’elle forme une suspension de la concentration la plus faible.

Maintenant, des solutions de couches de densités croissantes du même milieu de gradient sous la fraction des noyaux bruts pré-préparés pour générer un gradient de densité discontinu en plusieurs étapes. Cette étape permet à la fraction des noyaux bruts de former une bande au sommet du gradient.

Ensuite, centrifugez le tube à basse vitesse.

Sur la base des différences de forme et de masse, les noyaux intacts migrent différemment par rapport aux débris et aux fragments nucléaires. Il en résulte que les noyaux intacts forment une bande séparée.

Après centrifugation, localiser la bande distincte constituée de noyaux intacts à l’interface des solutions de gradient de densité.

À l’aide d’une pipette, aspirer les couches supérieures du gradient pour faciliter l’accès à la bande des noyaux purs. Recueillir la bande contenant les noyaux dans un t