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Pour différencier des populations cellulaires spécifiques dans un tissu de tumeur cérébrale de souris hétérogène en vue de leur isolement ultérieur, commencez par prélever une lame de verre portant la section de tissu de tumeur cérébrale cryopréservée d’intérêt.
Incuber séquentiellement le tissu à des concentrations décroissantes d’éthanol. L’éthanol dissout le milieu d’enrobage qui a pénétré dans le tissu et fixe le tissu tout en maintenant l’intégrité des acides nucléiques.
De plus, l’éthanol réhydrate les tissus, ce qui permet une coloration uniforme au cours des étapes suivantes.
Maintenant, traitez le tissu avec du violet de Cresyl. Le violet de crésyle - un colorant basique - colore les composants cellulaires acides tels que les acides nucléiques.
Par la suite, contre-colorez le tissu avec de l’éosine Y. L’éosine Y - un colorant acide - colore les composants cellulaires de base tels que les protéines cytoplasmiques.
Cette étape de coloration différentielle permet de distinguer le cytoplasme des autres structures cellulaires, ce qui permet d’identifier les cellules d’intérêt.
Après la coloration, immergez le tissu dans des concentrations croissantes d’éthanol pour déshydrater le tissu et éviter une distorsion excessive des tissus.
Ensuite, lavez le mouchoir avec du xylène. Le xylène déplace et élimine l’éthanol de la section tissulaire.
Enfin, ajoutez une solution de montage adaptée sur la section des tissus afin de préserver la morphologie des tissus.
La section de tissu traitée est prête à être utilisée pour la microdissection au laser, un processus qui permet d’isoler avec précision des cellules spécifiques du tissu.
Immergez les lames dans des immersions séquentielles de 30 secondes à l’éthanol, suivies d’une coloration en solution de violet cristallin pendant 20 secondes et 5 secondes dans une solution d’éosine Y à 0,5 %.
À la fin de l’incubation de l’éosine Y, utilisez du papier filtre pour éponger les lames et déshydrater les lames dans des immersions successives ascendantes à l’éthanol. Après l’immersion de 60 secondes dans l’éthanol, rincez les lames dans un récipient de xylène pendant 3 minutes.
Ensuite, séchez les lames sur une surface exempte de RNase à température ambiante pendant 10 secondes avant de monter les échantillons dans un milieu de montage préparé avec de l’eau sans RNase. Après 10 à 20 secondes, transférez les lames sur la plate-forme de microdissection du microscope.