Fixation et coloration de coupes de tissus cryoconservés : une procédure pour traiter des coupes de tissus cérébraux congelés pour la microdissection au laser

Pour différencier des populations cellulaires spécifiques dans un tissu de tumeur cérébrale de souris hétérogène en vue de leur isolement ultérieur, commencez par prélever une lame de verre portant la section de tissu de tumeur cérébrale cryopréservée d’intérêt.

Incuber séquentiellement le tissu à des concentrations décroissantes d’éthanol. L’éthanol dissout le milieu d’enrobage qui a pénétré dans le tissu et fixe le tissu tout en maintenant l’intégrité des acides nucléiques.

De plus, l’éthanol réhydrate les tissus, ce qui permet une coloration uniforme au cours des étapes suivantes.

Maintenant, traitez le tissu avec du violet de Cresyl. Le violet de crésyle - un colorant basique - colore les composants cellulaires acides tels que les acides nucléiques.

Par la suite, contre-colorez le tissu avec de l’éosine Y. L’éosine Y - un colorant acide - colore les composants cellulaires de base tels que les protéines cytoplasmiques.

Cette étape de coloration différentielle permet de distinguer le cytoplasme des autres structures cellulaires, ce qui permet d’identifier les cellules d’intérêt.

Après la coloration, immergez le tissu dans des concentrations croissantes d’éthanol pour déshydrater