Isolement basé sur la SEC de vésicules extracellulaires dérivées de la microglie : une technique pour isoler des vésicules extracellulaires à partir de milieux de culture conditionnés par la microglie
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0 vues • 3:37 min • April 30th, 2023
cellules microgliales libèrent des médiateurs immunitaires sous la forme de vésicules extracellulaires ou VE, y compris des corps apoptotiques plus grands et des vésicules de micro-taille plus petites, dans les milieux de croissance in vitro.
Pour isoler les VE, commencez par prendre des milieux conditionnés par la microglie. Ce milieu de culture contient des cellules microgliales ainsi que les VE libérées. Centrifugez le média pour granuler les cellules.
Récupérez le surnageant contenant les VE, les débris et les agrégats de protéines dans un tube frais. Centrifugez à nouveau pour éliminer les débris cellulaires et les grands corps apoptotiques.
Transférez le surnageant dans un tube d’ultracentrifugation. Centrifugeuse à grande vitesse.
Jetez le surnageant contenant le milieu usé et remettez en suspension la pastille d’EV et d’agrégat de protéines dans le tampon souhaité.
En même temps, prenez une colonne de chromatographie d’exclusion stérique avec un filtre approprié à sa base.
Emballez hermétiquement la colonne avec une matrice de filtration de gel composée de billes de gel sphériques qui forment un tamis poreux de taille de pores définie.
Chargez la suspension d’EV et d’ag
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