Extraction basée sur SDS-PAGE de protéines associées aux vésicules extracellulaires : une procédure pour extraire des protéines des VE et les préparer à la digestion en gel

Pour commencer, prenez un tube contenant des vésicules extracellulaires intactes ou VE.

Suspendez les VE dans le volume souhaité de tampon de lyse et sonicez l’échantillon. Ce traitement lyse la membrane EV et cisaille le matériel génétique, libérant les protéines dans le tampon.

Centrifugeuse pour granuler les débris cellulaires et le matériel génétique cisaillé. Prélever le surnageant contenant diverses protéines.

Ajoutez un colorant de chargement à l’extrait de protéine et passez-le sur un gel SDS-PAGE.

Trempez le gel dans une solution de coloration pour permettre aux molécules de colorant de se lier aux protéines. Localisez la bande colorée contenant la protéine souhaitée et excisez-la.

Coupez la bande colorée en petits morceaux pour améliorer l’accessibilité des protéines aux enzymes dans les étapes suivantes. Transférez ces morceaux dans un tube de microcentrifugation.

Ajoutez une solution de décoloration qui élimine le colorant colorant. Retirez la solution de décoloration usée.

Ajouter une solution de réduction. Incuber pour permettre à l’agent réducteur de cliver les liaisons disulfure dans les protéines, exposant ainsi les groupes sulfhydryles libres.

Traitez les protéine