Imagerie intravitale basée sur la fenêtre crânienne dans un modèle murin : une technique d’imagerie pour étudier le comportement des cellules cancéreuses pré-injectées dans le cerveau d’un modèle murin

L’imagerie intravitale à travers des fenêtres d’imagerie optique facilite le suivi à haute résolution des cellules individuelles pour étudier leur comportement dans le microenvironnement natif d’un animal vivant.

Pour commencer, prenez une souris anesthésiée avec son cerveau pré-injecté de cellules cancéreuses et ayant une fenêtre crânienne implantée à l’intérieur d’un anneau métallique. Les cellules cancéreuses expriment des protéines nucléaires fluorescentes.

Positionnez la souris, face vers le haut, dans une boîte d’imagerie. Le support magnétique dans la boîte d’imagerie permet de sécuriser la fenêtre crânienne implantée.

Maintenant, transférez le boîtier d’imagerie à l’intérieur de la chambre d’imagerie à environnement contrôlé d’un microscope inversé pour analyser le comportement des cellules cancéreuses dans le cerveau.

En mode multiphoton, réglez le laser sur une longueur d’onde appropriée. Concentrez-vous sur la région tumorale pour détecter la fluorescence des cellules cancéreuses.

Définissez une pile z pour chaque position afin d’acquérir plusieurs images intravitales de cellules cancéreuses dans différents plans optiques.

Cette étape permet de capturer une proportion significative de cellules cancéreuses dans le microenvironnement tumoral sans affecter la résolution cellulaire.

Par la suite, acquérez des images de différentes positions de la tumeur pendant une durée prolongée.

Le suivi du trajet des cellules cancéreuses dans différents plans optiques permet de déterminer la migration des cellules tumorales individuelles à l’aide d’un logiciel approprié.

Au moment expérimental approprié, placez la souris face vers le haut dans une boîte d’imagerie et réglez l’objectif d’eau 25x sur la position z la plus basse. Ajoutez une grosse goutte d’eau dans l’objectif et transférez la boîte d’imagerie dans la chambre climatique sombre à 37 degrés Celsius du microscope.

Approchez l’objectif de la lamelle de la fenêtre d’imagerie crânienne jusqu’à ce que la goutte d’eau touche la lamelle et, en utilisant le mode d’épifluorescence, observez la tumeur à travers l’oculaire pour mettre les cellules au point.

Réglez le laser sur la bonne longueur d’onde et sélectionnez le mode en direct. Après avoir sélectionné plusieurs positions d’intérêt pour l’imagerie, enregistrez leurs coordonnées dans le logiciel. Définissez une pile z pour chaque position afin d’acquérir le volume maximal de cellules tumorales sans compromettre la résolution des cellules tumorales, avec une taille de pas entre les images réglée sur 3 micromètres.

Ensuite, acquérez des images du volume tumoral à différentes positions toutes les 20 minutes pendant 2 heures, en ajoutant de l’eau à l’objectif avant chaque acquisition d’image. Une fois la dernière image acquise, transférez la souris sur un coussin chauffant avec surveillance jusqu’à la récupération complète.