Test de synthèse d’ADN : une technique pour évaluer la synthèse de l’ADN dans les cellules en prolifération à l’aide de l’incorporation radioactive de thymidine tritiée

Commencez par prendre une plaque multi-puits contenant des cellules adhérentes.

Traitez ces cellules avec un milieu contenant de la thymidine tritiée - une version radioactive de la thymidine - et incubez.

Pendant l’incubation, les cellules qui se répliquent activement incorporent de la thymidine radioactive. Cette thymidine s’apparie à l’opposé de l’adénosine, générant de l’ADN radiomarqué dans les cellules en prolifération.

Retirez le support usagé des puits. Ajoutez un tampon de lyse pour lyser les cellules et libérer de l’ADN dans la suspension.

Préparez l’ensemble du collecteur de cellules en plaçant les tubes collecteurs du moissonneur sur les puits de la microplaque.

Appliquez une pression d’aspiration pour permettre l’aspiration de l’ADN en suspension des puits. Cet ADN se dépose sur le papier filtre, formant des taches spécifiques.

Découpez les chads en papier filtre avec des taches d’ADN. Transférez ces tchads individuellement dans des flacons à scintillation.

Superposez le papier filtre avec un cocktail de scintillation. Placez le flacon dans un comptoir à scintillation liquide.

À l’intérieur du compteur, l’ADN marqué émet de l’énergie par désintégration radioactive. Cet