Purification de sous-populations de vésicules extracellulaires : une technique pour purifier des sous-populations de vésicules extracellulaires à l’aide de l’ultracentrifugation à gradient de densité
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0 vues • 4:27 min • April 30th, 2023
Les vésicules extracellulaires ou VE sont des vésicules nanométriques, hétérogènes, délimitées par une membrane, sécrétées par diverses cellules, y compris les cellules tumorales cérébrales. Les petits VE sont une sous-population composée de VE d’origine endosomale et de VE membranaires.
Pour purifier les petits VE, commencez par prendre des VE pré-extraits en suspension dans un tampon supplémenté en saccharose qui maintient une solution homogène et préserve l’intégrité structurelle des VE.
À cette solution, ajoutez ensuite un volume approprié d’iodixanol - un milieu inerte et non toxique - pour obtenir la densité souhaitée.
L’iodixanol solubilise les protéines contaminantes pour les éliminer plus tard.
Ensuite, ajoutez des couches de solutions d’iodixanol de densités décroissantes successivement pour créer un gradient de densité discontinu.
Centrifugez le tube à grande vitesse.
En fonction de leur taux de flottaison, les VE les plus denses migrent vers une couche tout aussi dense de milieu à gradient, tandis que les VE moins denses migrent davantage vers une couche plus légère, et les contaminants les plus denses forment une pastille au fond du tube.
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