Culture de cellules endothéliales à partir de microvaisseaux cérébraux de rat : une procédure pour isoler et cultiver des cellules endothéliales à partir de microvaisseaux de cerveau de rat

Pour isoler les cellules endothéliales du cerveau, transférez d’abord un cerveau de rat récolté dans une boîte contenant un tampon réfrigéré.

Après avoir enlevé le cervelet et les nerfs optiques, divisez le cerveau en hémisphères cérébraux. Ensuite, séparez le mésencéphale du cerveau antérieur.

Retirez les méninges et la substance blanche contenant de la myéline du cerveau antérieur, laissant derrière le cortex cérébral pour isoler les microvaisseaux.

Ensuite, homogénéisez le cortex pour briser le tissu nerveux et les constituants.

Centrifuger l’homogénat pour éliminer les débris cellulaires et la myéline.

Par la suite, traitez la pastille tissulaire avec un cocktail de digestion contenant des enzymes de collagénase, de dispase et de désoxyribonucléase.

Les collagénases et les dispasses digèrent la matrice extracellulaire qui intègre les microvaisseaux, détachant les fragments de microvaisseaux du tissu. Les désoxyribonucléases dégradent tout ADN libre libéré par les cellules lysées.

Mélangez le volume souhaité d’homogénat digéré avec un milieu à gradient de densité approprié et centrifugez.

Jetez la couche supérieure contenant de la myéline et du parenchyme cérébral, suivie du sur