Génération de cellules souches neurales induites (iNSC) à partir de cellules mononucléées du sang périphérique (PBMNC) : une procédure basée sur le virus Sendai pour reprogrammer les PBMNC en iNSCs

Pour reprogrammer les cellules somatiques en cellules souches neurales induites ou iNSC - des cellules souches possédant une capacité d’auto-renouvellement et de différenciation élevée, commencez par cultiver des cellules mononucléées du sang périphérique dans un milieu sans sérum pour développer les érythroblastes.

Ensuite, pipetez la suspension d’érythroblaste dans une plaque de culture. Traitez les cellules avec le virus Sendai recombinant ou SeV. Ces virus codent pour reprogrammer des facteurs de transcription. Centrifuger pour sédimenter les cellules et incuber.

Après la fusion du SeV avec la membrane de la cellule hôte, le génome du virus subit une transcription suivie d’une traduction dans le cytoplasme. L’expression ectopique des facteurs de transcription déclenche le processus de reprogrammation cellulaire sans intégrer les gènes dans le génome de l’hôte.

Maintenant, centrifugez la culture pour éliminer les virus. Remettre en suspension les cellules transduites dans un milieu approprié, puis placage. De plus, centrifuger pour éliminer les débris cellulaires. Remettez les cellules en suspension dans le milieu iNSC.

Ensuite, ensemencez les cellules dans une plaque recouverte