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Recherche sur le cancer
0 vues • 4:32 min • July 8th, 2025
Les cellules souches de tumeurs cérébrales ou BTSC - un sous-ensemble de cellules au sein des tumeurs cérébrales - possèdent des capacités d’auto-renouvellement et contribuent à la progression de la tumeur et à la résistance au traitement. Pour déterminer l’effet des médicaments sur l’invasion in vitro des BTSC, il faut commencer par des suspensions de BTSC dans un milieu approprié dans des flacons de culture. Traitez l’une des suspensions avec le médicament d’intérêt.
Incuber les flacons. Les composants du milieu favorisent la prolifération cellulaire. Les cellules restent en suspension, formant ainsi des amas sphériques appelés neurosphères. Lorsque vous atteignez la taille souhaitée, collectez les neurosphères. Laissez-les sédimenter par gravité et retirez les supports. Ensuite, mettez en suspension les neurosphères non traitées et traitées par le médicament dans un milieu réfrigéré contenant une protéine de matrice extracellulaire appropriée et le médicament.
Plaquez les suspensions dans une plaque multi-puits réfrigérée. Permettez aux neurosphères de sédimenter au fond du puits pour une meilleure imagerie. Ensuite, incubez pour la polymérisation des protéines matricielles, en intégrant les neurosphères à l’intérieur. Imagez les neurosphères pendant une durée prolongée à l’aide de la microscopie à cellules vivantes. En culture, les BTSC intégrés sécrètent des enzymes protéolytiques, qui dégradent les protéines matricielles, permettant ainsi la migration cellulaire.
Au fil du temps, l’augmentation de la dégradation de la matrice crée un microenvironnement approprié pour l’invasion des BTSC des neurosphères dans la matrice environnante. À l’aide d’un logiciel approprié, mesurez la surface totale des neurosphères à différents points temporels. Les BTSC non traités présentent une surface accrue, ce qui indique un taux d’invasion plus élevé que les BTSC traités par médicament.
Pour évaluer l’invasion de la neurosphère BTSC, il faut d’abord ajouter le composé d’intérêt dans le flacon à la concentration souhaitée pour le cours temporel prédéterminé avant le placage d’invasion de la neurosphère. Lorsque la taille moyenne d’une neurosphère atteint environ 150 à 200 micromètres, inclinez et mélangez doucement le flacon à l’aide d’une pipette, puis transférez 500 microlitres de neurosphères BTSC remises en suspension dans un tube de 1,5 millilitre par condition expérimentale sur glace.
Aspirez autant de milieu que possible du fond de chaque tube de 1,5 millilitre sans perdre la pastille de neurosphère et remettez doucement les neurosphères en suspension dans 500 microlitres de solution de collagène de type I fraîchement préparée de 0,4 milligramme par millilitre. Transférez 100 microlitres de neurosphères de collagène suspendues dans trois puits par condition dans une nouvelle plaque de 96 puits sur glace et laissez les neurosphères se stabiliser pendant 5 minutes.
Il est essentiel de laisser les neurosphères se déposer pendant 5 minutes sur la glace. Sinon, les sphères ne seront pas sur le même plan de mise au point pour l’imagerie. Après 5 minutes de polymérisation du collagène dans l’incubateur de culture cellulaire, transférez la plaque dans le plateau du système d’imagerie de cellules vivantes pour acquérir une image de référence de la taille de la neurosphère au moment de l’enrobage avant le début de l’invasion. Ensuite, configurez le logiciel pour qu’il acquière des images toutes les 1 à 2 heures jusqu’à ce que le taux d’invasion ait atteint un plateau, généralement de 24 heures.
Pour imager la surface croissante des BTSC à mesure qu’ils envahissent la matrice au fil du temps, utilisez l’objectif 10x pour acquérir quatre images par puits pour chaque ensemble de trois puits répliqués. Pour déterminer la surface cellulaire relative représentée par le pourcentage de confluence du puits, configurez une définition de traitement qui met spécifiquement en évidence les cellules sur l’arrière-plan du puits. Ensuite, collectez les données sous forme de surface cellulaire totale pour chaque puits à chaque point temporel. Déterminez la moyenne des trois puits répliqués et tracez graphiquement l’invasion des BTSC en traçant l’augmentation de la surface cellulaire au fil du temps.