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Recherche sur le cancer
0 vues • 4:13 min • July 8th, 2025
Le glioblastome possède des cellules souches qui migrent le long des voies axonales des neurones myélinisés pour envahir des endroits éloignés du cerveau. Pour récapituler la migration des cellules de glioblastome ou de GBM sur les neurones in vitro, commencez par prendre une lamelle de verre.
Activez la lamelle par traitement au plasma d’oxygène et amorcez-la avec un agent fonctionnalisant. Ce traitement facilite l’accès aux produits chimiques dans les étapes suivantes. Ajouter la solution pégylée à la lamelle et incuber. Cette solution recouvre la lamelle, empêchant l’adhésion des neurones à des endroits aléatoires.
Versez un polymère photoinitiateur sur la lamelle et montez-le dans la chambre d’imagerie. Placez la chambre sur la platine d’un microscope à fluorescence. Une fois à l’intérieur, l’éclairage UV active les molécules photo-initiatrices localement dans les zones désignées correspondant aux micromotifs visualisés.
Les molécules photo-initiatrices activées clivent la couche PEG sous-jacente, générant le motif souhaité. Maintenant, ajoutez la solution de laminine et incuber. La laminine - une glycoprotéine - se dépose à des endroits spécifiques où la couche de PEG a été éliminée. Ensemencez le milieu contenant les neurones de l’hippocampe du rat sur la lamelle.
Incuber pour permettre l’adhérence des neurones sur les réseaux recouverts de laminine afin d’obtenir des lamelles à micromotifs neuronaux. Déposez une suspension de cellules GBM marquées par fluorescence sur les neurones à micromotifs. Image pour voir les cellules GBM fluorescentes migrer sur les neurones.
Pour fabriquer un substrat pour le micropatterning, traitez les lamelles de verre circulaires de 18 millimètres par activation à l’air ou au plasma pendant 5 minutes avant de placer les lamelles dans un dessiccateur avec 100 microlitres de triéthoxysilane de 3-aminopropyle pendant 1 heure. Ensuite, incubez une solution de Peg-SVA à 100 milligrammes par millilitre pendant 1 heure pour le dépôt de gel. À la fin de l’incubation, ajoutez 3 microlitres de PLPP et 50 microlitres d’éthanol absolu au centre de la lame et attendez qu’elle sèche complètement.
Pour la microstructuration de lames de verre, montez la lamelle dans une chambre Ludin et placez la chambre sur la platine d’un microscope équipé d’un système de mise au point automatique. Après l’imagerie, chargez les images micro-motifs dans le logiciel. Après le séquençage automatique de l’éclairage UV, utilisez une pipette pour laver abondamment le PLPP de la lamelle avec du PBS. Ensuite, incubez la lamelle avec 50 microgrammes par millilitre de laminine pendant 30 minutes, suivie d’un autre lavage avec du PBS comme démontré.
Pour mettre en place une culture embryonnaire de neurones hippocampiques de rat sur les lamelles à micromotifs, après le dernier lavage, réhydratez les lames de verre avec un milieu de culture de cellules neuronales. Grainez 5 fois 10 jusqu’au quatrième neurones de l’hippocampe du rat en suspension dans un milieu neurobasal enrichi de 3 % de sérum de cheval par centimètre carré sur chaque lamelle à micromotifs pour une incubation de 24 heures dans un incubateur à 5 % de dioxyde de carbone à 37 degrés Celsius. Centrifugez les cellules de glioblastome dissociées pendant 5 minutes à 1 000 tr/min et remettez en suspension la pastille dans un milieu de culture cellulaire de glioblastome. Ensuite, déposez 1 fois 10 à la troisième cellule GBM sur les neurones à micromotifs.