Zymographie peptidique fluorescente : une technique modifiée pour détecter l’activité de la protéase à l’aide de substrats fluorogènes dans des gels de zymogramme

La zymographie est une technique électrophorétique qui implique un substrat protéique copolymérisé avec un gel de polyacrylamide pour détecter les enzymes hydrolytiques et leur activité. Pour commencer, dissolvez les échantillons dans un tampon de zymographie contenant du glycérol, du dodécylsulfate de sodium ou SDS et du bleu de bromophénol.

Le glycérol rend le tampon d’échantillon plus dense que le tampon de courant environnant du gel, ce qui permet un chargement facile dans les poches de gel. Le SDS - un détergent anionique - dénature les enzymes de l’échantillon et les enrobe d’une charge négative. Le bleu de bromophénol - un colorant de suivi - aide à surveiller la progression de l’échantillon dans le gel.

Chargez les échantillons dans un gel de polyacrylamide enrobé de substrats fluorogéniques pour détecter l’activité de la protéase. Maintenant, connectez les électrodes et commencez l’électrophorèse. Le champ électrique généré fait migrer toutes les enzymes liées au SDS à travers le gel vers l’électrode chargée positivement.

Une fois l’électrophorèse terminée, retirez le gel et lavez-le dans un tampon renaturant contenant un détergent non ionique qui déplace le SDS pour perme